• Author / Uploaded
• dave11730

• Categories
• Lípido
• Compuestos orgánicos
• Bioquímica
• Compuestos químicos
• Sustancias químicas

Citation preview

grupo: 3IM1 Lenard

Vaca Vargas Oscar sección I

SEPARACIÓN DE FOSFOLÍPIDOS POR CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA Introducción: Los lípidos son biomoléculas orgánicas insolubles en el agua, que pueden extraerse de las células y de los tejidos mediante disolventes no polares, por ejemplo, el cloroformo, el éter o el benceno. Los lípidos desempeñan diversas funciones biológicas importantes, actuando 1) como componentes estructurales de las membranas, 2) como formas de transporte y almacenamiento del combustible catabólico, 3) como cubierta protectora sobre la superficie de muchos organismos, y 4) como componentes de la superficie celular relacionados con el reconocimiento de las células, la especificidad de especie y la inmunidad de los tejidos. Casi todos los ácidos grasos, que proporcionan el componente hidrocarbonado de los lípidos tienen un número par de átomos de carbono, pudiendo ser saturado o insaturados; los dobles enlaces tienen casi siempre la configuración cis. Los fosfolípidos y esteroles constituyen alrededor de la mitad de la masa de las membranas biológicas. Los lípidos pueden ser separados fácilmente de otras biomoléculas por extracción con solventes orgánicos y pueden ser separados por técnicas experimentales como la cromatografía de adsorción, la cromatografía de placa fina y cromatografía de fase reversa.

Fosfatidil Serina Fosfatidil Colina

0.36

0.55

0.50

0.51

Esfingomielina Lisofosfatidil Colina (isolecitina)

0.31 0.2

0.46 0.22

-

0.33 0.21

Discusión: realizamos 4 cromatografias con aplicaciones de extracto de lípidos de gallina y de codorniz.

Molibdato: En esta placa, todos los fosfolípidos se

Objetivos

tiñeron debido a que todos presentan en su estructura un grupo fosfato, el cual da un color azul

• Separar fosfolípidos de la yema de huevo por medio de cromatografía en capa fina.

Yodo: Los cristales de yodo reaccionan con las dobles

• Comparar el perfil de fosfolípidos de la yema de huevo con otras especies. Resultados: Rf en cm

Ninhidrina: En esta placa se tiñeron la Lecitina y la

Gallina Lípidos neutros Fosfatidil-etanol -amina Fosfatidil Serina Fosfatidil Colina

Molibdato 0.8 0.66

Yodo 0.79 0.55

Ninhidrina 0.64

Bismuto -

0.43

0.39

0.32

0.65

Esfingomielina Lisofosfatidil Colina (isolecitina)

0.33 1.18

0.32 0.18

-

0.45 0.21

Codorniz Lípidos neutros Fosfatidil-etanol -amina

ligaduras de todos los fosfolípidos del cromatograma tiñendo de color café como prueba positiva. Esta prueba al igual que la de molibdato, dio positiva para todos los fosfolípidos.

Fosfatidil-etanol-amina ya que contienen grupos amino, las cuales reaccionan con la ninhidrina formando un compuesto de color violeta

Bismuto: El reactivo de Bismuto reacciona con la Colina de la Lecitina, Esfingomielina e Isolecitina, tiñendo manchas de color amarillo-naranja.

Conclusiones

Molibdato 0.83 0.51

Yodo 0.94 0.67

Ninhidrina 0.71

Bismuto -

•Los Lípidos neutros, Fosfatidil-etanol-amina, Lecitina, Esfingomielina e Isolecitina contienen un grupo fosfato en su estructura (en cabeza polar). •La, Fosfatidil-etanol-amina y la Lecitina, contienen un grupo amino.

grupo: 3IM1 Lenard

Vaca Vargas Oscar sección I

•La Lecitina, Esfingomielina e Isolecitina contienen en su estructura Colina. •Los Lípidos neutros, Fosfatidil-etanol-amina, Lecitina, Esfingomielina e Isolecitina contienen dobles enlaces.

Bibliografía •Lehninger, A., Bioquímica, Principios de Bioquímica, 4ª edición, Ediciones Omega, Barcelona, España, 1984, pp. 343-348. •Rouser, G.; Fleischer, S. & Yamamoto, A. (1970) Lipids 5, 494-496.

DETERMINACIÓN DE COLESTEROL EN YEMA DE HUEVO

Determinar la concentración de colesterol en la yema de huevo por el método de LiebermanBurchard.

Cálculo para agregados

los

miligramos

de

------0.25ml

x= 20 µg

------0.50ml

x= 40 µg

Tubo 3

0 10

20

30

40

50

60

70

80

90

µg /ml

6 4 0 n m

colesterol

Al interpolar la el valor de absorbencia en la curva tipo, la concentración de glutámico es de : 44 µg

------15ml

x= 132000 µg

X= 132 mg de colesterol (5yemas)

------0.75ml

x= 60 µg

Tubo 4 80 µg -------1ml -------1ml

x= 80 µg

80 µg -------1ml

Resultados

Hay muchas variables por las cuales no obtuvimos la concentración de colesterol correcta, como pudo ser la preparación de los tubos para la curva tipo, porque se trabajó con cloroformo el cual volatiliza muy rápido, y con anhídrido acético que se hidrata muy fácilmente. Conclusión:

La concentración de colesterol presente en la yema de huevo de codorniz es de 26.4 mg/yema (según nuestros resultados).

Tubo 5

------1.25ml

En la bibliografía se encontró que la concentración de colesterol en un huevo de codorniz es de 76mg, y es un valor bastante alejado de lo que se obtuvo experimentalmente mediante el método de Lieberman-Burchad.

80 µg -------1ml

X

0.1

Discusión:

80 µg -------1ml

X

0.2

X= 132/5= 26.4

Tubo 2

X

0.3

a

X

80 µg -------1ml

X

0.4

44µg -------0.005ml

Tubo 1

X

o r b e n c i a

Volumen del extracto de yema de huevo (de codorniz): 15 mL

Objetivos 

A

b Concentracion de colesterol s

x= 100 µg

El método de Lieberman-Buchard no nos resultó muy eficiente para determinar el colesterol en el huevo. Bibliografía:

100 11

grupo: 3IM1 Lenard * www.institutohuevo.com/

Vaca Vargas Oscar sección I