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• Sebastian Victoria

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Practica 4. Estudio de bombeo de protones por Tabla1. Comparación del estudio efecto de pH ende los inhibidores de la cadena de levaduras; soluciones: solución control, contra tiempo.

transporte de electrones desacoplante, inhibidor, en un resultado de pH. pH Tiempo

Control

Dinitrofenol

y de los desacoplantes

Azida de sodio

(Desacoplante )

(Inhibidor)

0 min

6,31

6,41

6,44

5 min

7,27

8,04

7,49

10min 15min

6,8 7,03

6,41 6,88

6,6 6,86

20min

6,78

6,91

6,5

30min 40min

5,99 6,08

6,44 5,45

6,35 6,11

50min

4,15

4,78

5,9

Grafica1. Representacion grafica del estudio de Ph contra tiempo

8.04 7.49 7.27 6.8 6.6 6.41

6.44 6.41 6.31

Control

7.03 6.88 6.86

Dinitrofenol

6.91 6.78 6.5

6.44 6.35 5.99

6.11 6.08 5.45 Azida de sodio

5.9

4.78 4.15

Descripción de resultados: Grafica1. Representación grafica del estudio de pH en tres soluciones el cual muestran el aumento y de crecimiento del pH en el medio en el que se encuentran las levaduras dependiendo la reacción de las soluciones: inhibidor (azida de sodio), desacoplante (dinitrofenol), y una solución control, con la glucosa y la levadura.



Experimento1. Control, se observa que con el tiempo incrementa el pH, para el minuto 5 empieza a decrecer rápidamente de forma asimétrica dando picos elevados entre este proceso, que termina con un pH de 4,15 de uno de 6,31 en un rango de 50 minutos



Experimento2. Dinitrofenol, se observa que de un pH de

6,41 este

incrementa a un pH de 8,04 (Alcalino) para después decrecer a un pH de 4,78 en un rango de 50 minutos, en el laxo de pH contra tiempo se presentan picos elevados en el pH para que después sigan decreciendo.



Experimento3. Azida de sodio, se observa que de un pH de 6,44 decrece a un pH de 5,9 con la presencia de dos pequeña elevaciones casi no notables en el minuto 5 y en el minuto 15.

Análisis de resultados: Los cambios de pH que se obtuvieron fueron debido a la ATPasa en el espacio intermembranal (lado P), la cual bombea protones y K+ de la membrana plasmática al citosol y este último al espacio extracelular, provocando una diferencia electroquímica de hasta 2 unidades de pH. La ATP sintasa en la membrana interna de la mitocondria sintetizará ATP a partir de ADP + Pi acompañada por el flujo de protones desde el espacio intermembranal a la matriz mitocondrial, esto lleva a una disminución en el gradiente de H+ disminuyendo así el gradiente electroquímico ya que se vuelve negativo y alcalino en el interior, pero al agregar el inhibidor se bloqueará la síntesis de ATP y con el desacomplante en este caso el dinitrofenol disipa el gradiente H+ y esto genera una disminución de H+ a través de ATP sintasa que provoca una disminución de ATP y por lo tanto también tendrá un ambiente alcalino. El transporte de protones se produce con normalidad, lo que permite la respiración, pero sin la producción de ATP. Por lo tanto, la energía es liberada en forma de calor. Al contrario de agregar el inhibidor

que en este caso es la azida de sodio bloquea la síntesis de ATP y la respiración. Entonces los protones quedan en el citosol y la ATPasa tipo P los bombea hacia el espacio extracelular.

Conclusiones: Se ha concluido que existen agentes que modifican la cadena transportadora de electrones y en consecuencia la generación de energía (ATP), esto se logró demostrar por medio de soluciones con Azida de sodio (inhibidor) y con Dinitrofenol (desacoplante), en presencia de estos agentes el bombeo de protones por parte de la levadura se veía comprometido y por lo tanto el pH de la solución cambiaba en comparación con la solución control, este cambio de pH en el medio extracelular nos daba una idea clara de lo que pasaba en el medio intracelular.