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• Pamela Cazco

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MEDIOS DE CULTIVO Un medio de cultivo es un sustrato o una solución de nutrientes que permite el desarrollo de microorganismos. En las condiciones de laboratorio para realizar un cultivo, se debe sembrar sobre el medio de cultivo elegido las muestras en las que los microorganismos van a crecer y multiplicarse para dar colonias.

Entre los requerimientos más importantes de las bacterias para su desarrollo están el carbono, el oxígeno, nitrógeno, dióxido de carbono e hidrógeno. Muchas bacterias sin embargo necesitan del aporte extra de factores de crecimiento específicos en forma de suero, sangre y extracto de levadura entre otros.

LÍQUIDOS (CALDOS) No contiene ningún agente gelificante, por lo que los microorganismos crecen por todo el medio. El crecimiento en este tipo de medios es más rápido puesto que la movilidad permite acceder de una forma más fácil a los nutrientes SÓLIDOS Tienen una proporción de agar de, aproximadamente, el 1,5%. El

crecimiento se desarrolla en la superficie del medio. Estos medios pueden depositarse en placas de Petri o en tubos de ensayo 1

SEMISÓLIDOS Son aquellos que contienen una proporción de agar inferior al 0,5%. Se utilizan para pruebas bioquímicas y de movilidad.

Es un medio de cultivo sólido que permite el aislamiento exclusivo de bacilos Gram negativos. Por esta razón es un medio selectivo y además permite distinguir entre bacilos fermentadores y no fermentadores de la lactosa, lo que lo hace un medio diferencial. MICROORGANISMOS: Escherichia coli colonias grandes, rosa intenso con halo de precipitación, Salmonella typhimurium–Colonias medianas, incoloras transparentes, Proteus mirabilis–Colonias grandes, incoloras opacas, inhibición total o parcial del swarming, Enterococcus faecalis–Inhibición parcial, Staphylococcus aureus–Crecimiento inhibido

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El agar EMB es un medio de cultivo sólido selectivo y diferencial utilizado para el aislamiento de bacilos Gram negativos, principalmente de la familia Enterobacteriaceae, y otros bacilos Gram negativos no exigentes MICROORGANISMOS: aquellas bacterias que fermentan fuertemente la lactosa, como Escherichia coli, o la sacarosa, como Yersinia enterocolítica o Proteus penneri, forman un precipitado negro verdoso, dando un aspecto de brillo metálico característico en estas especies.

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Es un medio de cultivo sólido, selectivo y diferencial. Fue creado en el Instituto Hektoen por King y Metzger para el aislamiento de bacterias enteropatógenas de los géneros Shigella y Salmonella. También posee sales biliares que actúan inhibiendo el crecimiento de algunas bacterias, especialmente Gram positivas y algunas Gram negativas. Es por este motivo que se considera un medio selectivo.

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AGAR CHOCOLATE Es un medio de cultivo sólido, enriquecido, no selectivo y no diferencial. Es utilizado principalmente para el aislamiento de microorganismos exigentes desde el punto de vista nutricional, aunque en él pueden crecer cualquier tipo de bacterias.

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Es un medio de cultivo solido utilizado para el crecimiento de gérmenes exigentes, como Brucella, Neisseria o Streptococcus. Es un medio muy enriquecido, pero no es diferencial. Permite el cultivo de aerobios, anaerobios y microaerófilos. Tiene un bajo potencial redox que, al aumentar, se manifiesta por un color rosa del medio.

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Es un medio de cultivo solido utilizado para la identificación presuntiva de los microorganismos de las vías urinarias.

MICROORGANISMOS: E. coli, P. mirabilis y E. faecalis, con la simple visualización del cambio de color de la colonia sobre el medio (rojo burdeos, azulo marrón). La identificación solo requiere la adición de un reactivo para confirmar o descartar la especie sospechada.

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AGAR CHAPMAN Es un medio líquido utilizado para el aislamiento de estafilococos. Su elevado contenido en cloruro sódico permite la inhibición de la mayoría de los otros gérmenes. La presencia de manitol y rojo fenol convierten a este medio en diferencial. MICROOORGANISMO: Staphylococcus aureus, ya que este germen crece bien en medios salados y fermenta el manitol (colonias amarillas)

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Medio de cultivo utilizado para el aislamiento de Salmonella spp. y de algunas especies de Shigella spp. a partir de heces, alimentos y otros materiales en los cuales se sospeche su presencia. Los pocos microorganismos fermentadores de lactosa capaces de desarrollar, acidifican el medio haciendo virar al rojo el indicador de pH, obteniéndose colonias rosadas o rojas sobre un fondo rojizo. Salmonella, Shigella y otros microorganismos no fermentadores de lactosa, crecen bien en el medio de cultivo, y producen colonias transparentes.

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El medio C.L.E.D. (Cistina Lactosa Electrólito Deficiente) está recomendado para el recuento e identificación presuntiva de los microorganismos de las vías urinarias. Su bajo contenido en electrolitos evita la invasión de los cultivos por Proteus. La presencia de lactosa en su composición le confiere el carácter de medio diferencial, aunque la interpretación sea diferente al anterior medio por la incorporación de otro indicador: el azul de bromotimol. Las colonias lactosa positivas

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aparecerán de color amarillo y las lactosa negativas lo harán con un color verdoso, blanco o azulado.

El Agar nutritivo es un medio de cultivo usado normalmente como rutina para todo tipo de bacteria. Es muy útil porque permanece solido incluso a relativas altas temperaturas. Además, el crecimiento bacteriano en este agar lo hace en la superficie, por lo que se distinguen mejor las colonias pequeñas. En un caldo de nutrientes, la bacteria crece en el líquido, y aparece como una sustancia espesa, con colonias difícilmente observables.

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La hemolisis parcial de los eritrocitos da como un resultado un color verdoso del medio sólido que rodea las colonias (alfa-hemolisis). Los que producen hemolisinas que lisan los eritrocitos, produce un aclaramiento del medio que rodea las colonias (betahemolisis). Demuestra la presencia de dos tipos de microorganismos: Un morfotipo de colonias grandes 12

blancas, brillantes y con bordes irregulares pertenecientes a bacilos gramnegativos. El otro morfotipo presenta colonias blancas, pequeñas, enteras, típicas de un microorganismo grampositivo. Un tipo de colonias grandes, blancas pertenecientes a Staphyloccous. El otro tipo de colonias puntiforme pertenecientes a Streptococus.

Es un medio de cultivo que se utiliza normalmente en microbiología. Permite el crecimiento de un determinado grupo de bacterias mientras que inhibe el crecimiento de otras. Este medio es importante en el laboratorio clínico debido a que es capaz de distinguir el microorganismo patogénico en un corto periodo de tiempo. Staphylococci produce colonias amarillas con zonas amarillas, mientras que 13

coagulase-negative Staphylococci produce colonias rojas o ligeramente rosadas sin cambio alguno al medio. Si un organismo es capaz de fermentar el manitol, un subproducto ácido es creado que hace que el rojo de fenol cambie a amarillo. Se usa para el aislamiento selectivo de colonias de Staphylococci sospechosas de ser patógenas.

Es esta una base para la preparación de varios medios destinados al aislamiento, cultivo y diferenciación de micobacterias. Los nutrientes de este medio basal, más los aportados por el agregado de la mezcla de huevos, constituyen un rico soporte para el crecimiento de una gran variedad de micobacterias. El verde de malaquita inhibe a gran parte de la flora 14

acompañante. Con el agregado de glicerina se estimula el crecimiento de Mycobacterium tuberculosis, aunque gran parte de M. bovis es inhibido. Agregando un 5% de NaCl, se pueden seleccionar micobacterias tolerantes a la sal, como es el caso de M. smegmatis.

El agar Gardnerella Selectiva con un 5% de sangre humana, está basada en un Agar Columbia CNA, donde la Colistina y el Ácido Nalidíxico inhiben a las bacterias Gram negativas pero no a las Gram positivas. La inclusión de la Amphotericina B reduce el crecimiento de levaduras como por 15

ejemplo las Candidas, las cuales son habituales en las muestras vaginales , y la presencia de la sangre humana pone de manifiesto la característica beta hemólisis difusa de G. vaginalis

Es un medio con sangre y vitamina K muy adaptado para el cultivo de anaerobios.

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Se utiliza para el aislamiento de bacterias del género Legionella

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EL medio Cetrimide Agar ( Pseudosel Agar), es un medio selectivo para el aislamiento e identificación del Pseudomonas aeruginosa. Es un medio denominado Medio A con el fin de poner en evidencia la producción de Piocianina por la Pseudomonas. El Cetrimide Agar es una modificación donde se ha incorporado la Cetrimida (Bromuro de Cetiltrimetilamonio), compuesto de amonio cuaternario, como agente inhibidor de la mayoría de la flora acompañante de Pseudomonas. Las cepas de Pseudomonas son diferenciadas de otras especies por la producción de Piocianina, pigmento azul, soluble en agua , que unido a la morfología de las colonias y la producción de un característico olor a Aminoacetofenona, permite la identificación de la P. aeruginosa.

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Permite el crecimiento de estafilococos coagulasa positivos, a la vez que los diferencia del resto.

Es un medio específico para el cultivo de Corynebacterium difteriae.

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Es un medio selectivo para el aislamiento primario de Salmonella y Shigella a partir de muestras fecales y de orina. Los organismos gram positivos, coliformes y Proteus están total o parcialmente inhibidos por el citrato de sodio, el tiosulfato de sodio y el desoxicolato de sodio. La mayoría de los organismos de Shigella producen colonias incoloras, pero algunas cepas de S. flexneri, así como otras especies de Shigella, crecen rápidamente, dando colonias que son de un rosa débil pero se distinguen fácilmente de Proteus o los coliformes. Si se sospecha de Salmonella o Shigella, las colonias deben subcultivarse en otros medios para su identificación 20

El agar medio de Kligler (TSI, Triple Sugar Iron) es un medio diferencial que puede ayudarnos a distinguir entre especies de enterobacterias de acuerdo a su capacidad. El tinte amarillo indica un pH bajo debido a la producción de ácidos en grandes cantidades por la fermentación de la lactosa y/o sacarosa. Si la bacteria no fermenta lactosa y/o sacarosa la producción de ácidos es nula o, en caso de las enterobacterias, mínima (ya que todas fermentan la glucosa, generando ácidos en pequeñas cantidades) 21

aunque no lo suficiente para contrarrestar la alcalinidad del medio, la cual se manifiesta con un intenso color rojo.

BIBLIOGRAFÍA: 1.- Maldonado, E. Medios de cultivo en un laboratorio de Microbiología, PDF. (2012). 22

(consulta: 25-11-2019). Disponible en: https://libroslaboratorio.files.wordpress.com/2012/09/ medios-de-cultivo-en-un-laboratorio-demicrobiologc3ada.pdf

2.- Cuevas, M. Tipos de cultivo. Academia. (2017). (consulta: 25-11-2019). Disponible en: https://www.academia.edu/10801055/Tipos_de_agar 3.- Barrero, L. Microbiología Clínica. PDF. (2018). (consulta: 25-11-2019). Disponible en: https://www.sintesis.com/data/indices/9788490773185. pdf

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