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• Jersson Jamil Flores Foraquita

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1. MEDIOS DE CULTIVO ESPECIALIZADOS .

1.1. AGAR CISTINA-TELURITO Serum Tellurite Agar (agar suero de telurito) es un medio selectivo y de diferenciación utilizado principalmente para el aislamiento y la identificación de Corynebacterium diphtheriae 1.1.1. COMPONENTES Fórmula aproximada por litro de agua purificada Paptona de proteosa 20,0 g Cloruro sódico 5,0 g Agar 20,0 g Suero de Cordero 50.0 mL Solución de Telurito Potásico 1% 10.0 mL 1.1.2. FUNDAMENTO Serum Tellurite Agar, que contiene suero de cordero y telurito potásico, fue desarrollado para su uso en el examen de cultivos nasales, faríngeos y vaginales con el fin de aislar la especie Corynebacterium. Los organismos diferentes de Corynebacterium diphtheriae; es decir, las especies Staphylococcus, pueden reducir el telurito y producir colonias de color negro en Serum Tellurite Agar. Algunas pruebas diagnósticas pueden realizarse desde la placa de aislamiento primario. Sin embargo se recomienda un cultivo puro para realizar las pruebas bioquímicas y otros procedimientos de identificación. Consultar los textos correspondientes para obtener información detallada y procedimientos recomendados79.Sólo en raras ocasiones es posible detectar en un único medio todos los organismos de importancia potencial en una muestra. Los cultivos de muestras cultivadas en medios selectivos consiguiente deben compararse con muestras cultivadas en medios no selectivos para obtener información adicional y favorecer la recuperación de patógenos potenciales.

1.2. CALDO DE CULTIVO LIM Lim Broth (caldo Lim) se utiliza para el enriquecimiento selectivo de estreptococos del grupo B (Streptococcus agalactiae).

1.2.1. COMPONENTES Fórmula aproximada* por litro de agua purificada

Infusión de corazón de (sólidos Peptonas Dextrosa Cloruro sódico Carbonato sódico Fosfato disódico Extracto de levadura Colistina Acido nalidíxico

3,1 g 20,0 g 2,0 g 2,0 g 0,4 g 2,5 g 10,0 g 0,01 g 0,015 g

1.2.2. FUNDAMENTO Desde su aparición en los años 70, la enfermedad neonatal estreptocócica del grupo B se ha convertido en la causa infecciosa más importante de enfermedad y fallecimiento entre los recién nacidos. Antes de 1994, aproximadamente 7.600 casos de enfermedad invasiva estreptocócica del

grupo B, principalmente sepsis y meningitis, ocurrían en los recién nacidos cada año en Estados Unidos, siendo precoces alrededor del 80% de dichos casos (dentro de la primera semana de vida)1. La enfermedad se propaga a los recién nacidos por transmisión vertical de madre portadora de estreptococos del grupo B en el recto o los genitales. Lim y colegas combinaron el uso de un medio de caldo selectivo enriquecido y la prueba de coaglutinación en portaobjetos para detectar rápidamente dichas pacientes. Los Centers for Disease Control and Prevention (CDC) han propuesto directrices para la detección y el uso de la quimioprofilaxis intraparto para la prevención de la enfermedad neonatal estreptocócica del grupo B6. El uso de Todd Hewitt Broth con colistina y ácido nalidíxico se recomienda para maximizar las posibilidades de recuperación de estreptococos del grupo B en placas de agar sangre de carnero1. Lim Broth se prepara a partir de Todd Hewitt Broth añadiendo colistina y ácido nalidíxico, en las concentraciones recomendadas, más extracto de levadura para favorecer el crecimiento de los estreptococos del grupo B2.También se han detectado estreptococos del grupo B en casos de sepsis en mujeres no parturientas, hombres, infección de las articulaciones, osteomielitis, infección de las vías urinarias e infección de heridas. Se asocian con endocarditis, neumonía e infecciones cutáneas y de tejidos blandos en pacientes inmunodeprimidos.

1.3. AGAR SORBITOL DE MacCONKEY Medio selectivo y diferencial para la detección, aislamiento y enumeración de coliformes a partir de muestras diversas.

1.3.1. COMPONENTES FORMULA EN g/L Peptona Lactosa Sales biliares Cloruro sódico Cloruro sódico Cristal violeta Agar - agar

20.0 10.0 2.5 5.0 0.005 0.001 15

pH del medio a punto de uso aprox. 7.2 Añadir 52,5 g. de polvo a un litro de agua destilada y Llevar a ebullición. Esterilizar al autoclave durante 15 minutos a 121 0 C.

1.3.2. FUNDAMENTO Los medios de McConkey gozan de un gran prestigio como sistemas de enriquecimiento para bacterias coliformes. McConkey formula su caldo a principio de siglo e inicialmente incluyo bilis bovina como inhibidor de la flora gram-positiva y tornasol como indicador de la producción de ácido cuando fermenta la lactosa. Posteriormente el mismo autor cambia el indicador por rojo de fenol que permitía unas lecturas más fáciles y precisas. A medida que se han incrementado los conocimientos sobre la fisiología bacteriana, se han producido modificaciones en el medio original para adaptarlo cada vez más a la finalidad que se destina: la

detección de coliformes. Las modificaciones más sustanciales han sido las siguientes: La sustitución de sales biliares en lugar de la bilis 10 cual confiere una mayor selectividad al medio, al misrno tiempo que elimina la turbidez inherente a las sustancias grasas de la bilis entera. La concentración de este inhibidor es muy variable, dependiendo esencialmente de la riqueza en taurocolato y desoxicolato. Otra nidificación importante ha sido la inclusión de otros inhibidores como el cristal violeta y/o el verde brillante. Esta versión que goza de mayor popularidad en América que en Europa donde se prefiere el medio con menor selectividad debida solamente a las sales biliares. Durante la década de los sesenta se puso de manifiesto que el rojo neutro resultaba toxico para ciertas cepas de coliformes y en especial para Escherichia coli, por 10 que los especialistas buscaron otro indicador de pH del mismo 0 parecido rango de viraje. Encontrando en el purpura de bromocresol cuya toxicidad es muy inferior a la del rojo neutro. Aunque no debe considerarse como una verdadera modificación de todas las formulaciones Líquidas se han hecho medios solidos añadiendo Ia cantidad suficiente de agar-agar para ello. Se consigue así un medio diferencial de baja selectividad en el que las bacterias fermentadoras de lactosa producen colonias rojas debido a la gran acidificación y, concretamente Escherichia coli Ilega a precipitar las sales biliares que forman un halo alrededor de sus colonias que se distingue fácilmente. En su programa de fabricación ADSA- MIC RO incluye las siguientes variaciones de los medios de McConkey.

1.4. AGAR REGAN LOWE El medio Regan-Lowe Agar es un medio selectivo utilizado para el aislamiento de Bordetella pertussis de muestras clínicas 1.4.1. COMPONENTES COMPOSICION POR LITRO DE MEDIO EN AGUA PURIFICADA

Extracto de carne Hidrolizado pancreático de caseína Almidón soluble Cloruro sódico Carbón (activado) Niacina ( ácido nicotínico) Sangre desfibrinada de caballo Cefalexina Agar

10 ,0g 10 ,0g 10 ,0g 5,0 g 4,0 g 0,01 g 10 % 0,04 g 12,0 g

pH : 7,4 +/- 0,2 1.4.2. FUNDAMENTO Todas las especies Bordetella son patógenos de las vías respiratorias y residen en las células epiteliales ciliadas del sistema respiratorio. B. pertussis y B. parapertussis son patógenos exclusivamente humanos. B. pertussis es la causa principal de la tos convulsa (o tos ferina). B. parapertussis se asocia con la forma más leve de esta enfermedad. B. bronchiseptica es principalmente un patógeno de animales, pero puede producir bronquitis, neumonía e infecciones de las vías respiratorias externas en los seres humanos. Este medio fue desarrollado por Regan y Lowe como un medio de transporte de muestras, utilizado

posteriormente como un medio enriquecido para aislamiento selectivo de B. pertussis y parapertussis. En este medio, el extracto de carne y la peptona de gelatina proporcionan nutrientes. El almidón y el carbón adsorben los ácidos grasos tóxicos, los radicales y peróxidos, reemplazando la infusión de patata por el agar del Bordet-Gengou. La Niacina es una vitamina que favorece el crecimiento. La sangre de caballo proporciona factores de crecimiento complejos y reduce aún más el efecto tóxico de los peróxidos. Se añade Cefalexina como agente selectivo para suprimir parcialmente la flora normal de las vías respiratorias

1.5. AGAR SACAROSA,SALES BILIARES, TIOSULFATO Y CITRATO (TCBS) EI agar TCBS está especialmente recomendado para el aislamiento selectivo de vibrios que provocan afecciones coléricas, diarreas disentéricas. El examen de alimentos sospechosos de portadores de los mismos.

1.5.1. COMPONENTES FORMULA EN g/L Peptona de caseina

5.0

Peptona de carne

5.0

Extracto de levadura

5.0

Citrato sódico

10.0

Tiosulfato sódico

10.0

Bilis bovina

5.0

Colato sódico

3.0

Sacarosa

20.0

Cloruro sódico

10.0

Citrato Férrico

1.0

Azul de timol

0.04

Azul de bromotimol

0.04

Aga~agar

14

Suspender 88 g. de polvo en un litro de agua destilada y llevar a ebullición y hervir durante un minuto. Enfriar a 45-50° C y verter en placas. NO AUTOCLAVAR

1.5.2. FUNDAMENTO EI agar TCBS actualmente esta aceptado de forma universal como el mejor para el aislamiento diferencial de vibriones enteropatóqenos.

Consiguiendo una fuerte inhibición de toda la flora acompañante. Su formulación permite un abundante crecimiento de Vibrio cholerae y V. parahaemolyticus. También crecen en el V.alginoliticus y los vibrios NAG. Las enterobacteriaceas quedan fuertemente reprimidas por las elevadas concentraciones de citrato, tiosulfato, bilis y cloruro sódico, Aunque puedan aparecer aIgunas colonias entéricas su tamaño y aspecto es fácilmente discernible de los vibrios. Los únicos gérmenes que pueden prestarse a confusión son algunos biotipos de Proteus y Pseudomonas. Excepcionalmente pueden aparecer colonias muy pequeñas y amarillas que corresponden a enterococos resistentes. En la tabla adjunta se ofrece el aspecto colonial típico en este medio. Normalmente, de este medio se seleccionan las colonias y se identifican con las pruebas primarias (oxidasa, reacciones en Aqar de Kligler (Ref. 1-103), VogesProskauer (Ref. 2-207) y antibiograma) antes de pasar a la seroidentificación y fagotipado. Debido a su alta selectividad el medio admite inóculos masivos del material patológico. EI medio solidificado y frio queda turbio. Aunque esto no afecta luego a las lecturas. Este medio es muy termolábil por lo que además de la esterilización al autoclave deben evitarse los sobrecalentamientos y refundidos.

ASPECTO COLONIAL SOBRE AGAR TCBS A LAS 24 HORAS A 37O C ASPECTO COLONIAL MICROORGANISMO Grandes, amarillas Medianas, amarillas sucias con halo amarillo en el medio Pequeñas, amarillas sin halo y con núcleo verdoso Muy pequeñas y convexas, amarillas con halo amarillo, Pequeñas transparentes y Medianas azules

Vibrio alginolyticus Vibrio parahaemolyticus Vibrio cholerae Vibrio parahaemo/yticus Streptococus tecelis Enterobacteriaceas Pseudomonas, Aeromonas. Proteus