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• Patricia Pardos Ramirez

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Medios de cultivo

Según su estado físico: Líquidos, solidos o semisólidos. Según los nutrientes: -

Definidos: medios de los cuales conocemos su composición química exacta. Se obtienen de extractos puros.

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Complejos: medios de los que no conocemos su composición química exacta ya que se obtienen de extractos naturales.

Según el tipo de cultivo: -

GENERALES: Cultivos para el crecimiento de una amplia variedad de m.o.. No son selectivos, pero pueden estar enriquecidos con sangre,suero hemoglobina…

Agar infusión cerebro-corazón (BHI) Agar sangre (AS) Agar chocolate (si añadimos antibióticos obtenemos el medio selectivo de Thayer Martin)

Medio muy nutritivo con extractos de buey, glucosa y peptona. Sirve para el cultivo de bacterias aerobias y anaerobias exigentes como estreptococos, neumococos y otros de difícil desarrollo.

Medio en el que crecen la mayoría de los m.o. Es un medio compuesto por extractos de cerebro, corazón y el 5-10% de sangre(cordero,caballo,conejo…). Permite visualizar reacciones de hemolisis. Este medio utiliza la misma base que el Ágar Sangre. Antiguamente se añadían los hematies a la base fundida y se elevaba la temperatura (65-80°) para lisarlos parcialmente y que soltasen al medio sus componentes. Esto daba al medio su habitual color pardo chocolate.El Agar chocolate es un medio destinado principalmente al aislamiento de gonococos y meningococos, pero en el que pueden crecer muchos otros microorganismos exigentes.La siembra de líquidos cefalorraquídeos, pus, resiembra de hemocultivos, etc., es favorable en este medio, pero está particularmente indicado para aislamiento de las Neisserias patógenas y de los Haemophilus.

Agar Schaedler

Schaedler + 5% sangre de cordero. Este medio reductor está particularmente adaptado al cultivo de los gérmenes anaerobios.La presencia de factores de crecimiento tales como el extracto de levadura, la hemina y la vitamina K, así como la adición de la sangre de cordero, permiten el crecimiento de especies exigentes

Medios de cultivo

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SELECTIVOS: Permite el crecimiento de unos m.o. mientras suprime el de otros y asi aislar especies particulares a partir de mezclas complejas.

Agar Gardnerella Legionella (BCYE) Lowestein-Jensen Sabouraud Glucosa Agar Thayer-Martin

Agar nutritivo con sangre humana y antibióticos (ac. Nalidixico y colistina). Permite el crecimiento de Gardnerella vaginalis inhibiendo el de la microflora genital.Se visualiza reacciones de hemólisis. Permite el aislamiento de Legionella spp a partir de muestras respiratorias. El tipo mas usado es el BCYE que contiene suplementos y antimicrobianos contra flora acompañante. Medios destinados al aislamiento, cultivo y diferenciación de micobacterias. Contiene glicerol, sales, patata y huevo que solidifica el medio. También contiene verde de malaquita para inhibir el crecimiento de m.o. acompañantes. Medio enriquecido para el crecimiento de hongos saprofitos y patógenos. Contiene peptona y dextrosa y un pH ligeramente acido (5.6). Si añadimos cloranfenicol se inhibe el crecimiento bacteriano y con cicloheximida el de hongos saprofitos. Medio selectivo para el aislamiento de neisserias patógenas. Las dificultades que presenta la recuperación de N. gonorrhoeae y N. meningitidis de los materiales clínicos, se deben a las exigencias nutricionales de estos microorganismos, y en los materiales de origen genital, oral o anal, al desarrollo invasor de la abundante flora saprófita. El medio de Thayer-Martin permite el correcto aislamiento y recuperación de las neisserias patógenas dentro de las 24 h, con una ausencia casi total de contaminantes. El medio de cultivo se prepara a partir del Agar Base GC, con el agregado de hemoglobina, un suplemento de enriquecimiento (Britalex) y una mezcla antimicrobiana (VCNT: Vancomicina, colistina, nistatina y trimetoprima).

Medios de cultivo

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SELECTIVO-DIFERENCIALES: ponen de manifiesto características distintivas de las colonias.

MEDIO Agar Lebine o EMB

Agar McConkey

CARACTERISTICAS Este medio es utilizado para el aislamiento selectivo de bacilos Gram negativos de rápido desarrollo y escasas exigencias nutricionales. Permite el desarrollo de todas las especies de la familia Enterobacteriaceae.La eosina y el azul de metileno inhibe el crecimiento de Gram positivos.La fermentación de la lactosa precipita ambos colorantes cuando acidifican. Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fácil desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos. Permite diferenciar bacterias que utilizan o no, lactosa en muestras clínicas, de agua y alimentos. Todas las especies de la familia Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo.

ASPECTO DE LAS COLONIAS - E.coli: oscuras con brillo metálico verdoso. - Klebsiella, Enterobacter y Serratia aparecen moradas - Salmonella, Yersinia y Shigella transparentes.

En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la mezcla de sales biliares y el cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora Gram positiva. Por fermentación de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro), la absorción en las colonias, y la precipitación de las sales biliares. Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras.Los que si aparecen rojas o rosas. Resultados Colonias Microorganismos Escherichia coli Rojas con halo turbio Klebsiella Rosadas mucosas Salmonella Incoloras, transparentes Shigella Incoloras, transparentes Proteus Incoloras, transparentes Yersinia Incoloras

Medios de cultivo

MEDIO Agar Hektoen entérico (HE)

Agar bismuto-sulfito (BS)

CARACTERISTICAS Aislamiento selectivo de Salmonella y Shigella spp., a partir de heces y alimentos. El medio de cultivo contiene sales biliares que inhiben el desarrollo de la flora acompañante, y un sistema indicadore: azul de bromotimol y fucsina ácida como indicadores de la fermentación de carbohidratos.(vira a amarillo a pH acido) El desarrollo de Shigella spp. es adecuado debido a que la inhibición de estos microorganismos por las sales biliares está disminuida por la adición de cantidades relativamente elevadas de peptona y carbohidratos. El medio de cultivo, permite una buena diferenciación de las colonias e inhibe el desarrollo de algunos coliformes y otras bacterias no fermentadoras de lactosa, facilitando así la identificación de Salmonella y Shigella a partir de la muestra. Es un medio selectivo utilizado para el aislamiento de Salmonella typhi y otros bacilos entéricos. El sulfato ferroso actúa como indicador en la producción de sulfuro de hidrógeno que se manifiesta en el centro de la colonia por un precipitado negro y un halo negro grisáceo con brillo metálico por la reducción de los iones bismuto en presencia del sulfuro de hidrógeno. El sulfito de bismuto y el verde brillante inhiben considerablemente el crecimiento de bacterias contaminantes.

ASPECTO DE LAS COLONIAS Microorganismos

Colonias

Shigella Salmonella Proteus Escherichia coli

Verdes, sin centro negro

coliformes

por un precipitado biliar

Klebsiella

Verde-azuladas, con centro negro Pequeñas, transparentes Rosa salmón rodeadas en algunas ocasiones

Rosa salmón rodeadas en algunas ocasiones por un precipitado biliar

Las colonias aparecen en forma de ojo de pez: centro negro por el SH2 con el borde claro y halo metálico.

Medios de cultivo

MEDIO Agar telurito

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CARACTERISTICAS El telurito potásico inhibe las bacterias gram negativas y diversas gram positivas y permite detectar la reducción de telurito, que se encuentra por lo general en las corinebacterias

ASPECTO DE LAS COLONIAS Las colonias aparecen de color gris oscuro-negro.

DE ENRIQUECIMIENTO: Se añaden aditivos para favorecer el crecimiento de algunos m.o. y neutralizantes para inhibir el de otros.

Medio Hajna para Gram (-)

Es un medio de transporte para el aislamiento de Salmonella y Shigella.

Caldo de Tetrationato

Medio de cultivo utilizado para el enriquecimiento selectivo de Salmonella spp

Caldo de peptona alcalino

Medio de enriquecimiento utilizado para la búsqueda de Vibrio cholerae

El Manitol y la Dextrosa son los carbohidratos fermentables aportan carbono y energía. El Manitol está en concentración más alta lo que favorece el crecimiento de las especies fermentadoras de manitol como Salmonella y Shigella, y limita el crecimiento de Proteus y otras bacterias fermentadoras de dextrosa. El Desoxicolato sódico y el citrato sódico inhiben el crecimiento de organismos Gram-positivos. La selectividad está dada por la presencia de tiosulfato de sodio, tetrationato (generado en el medio por el agregado de la solución iodoiodurada) y sales biliares, los cuales permiten el desarrollo de bacterias que contienen la enzima tetrationato reductasa, como ser la Salmonella spp. inhibiendo Gram (+) y coliformes. Vibrio cholerae crece normalmente en medios alcalinos en los cuales no crece el resto de bacterias.