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• Jesús Nequis

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Prueba

Hidrolisis de almidón

Degradación de la caseína

Medio de cultivo

Agar almidón

Agar Leche Descrem ada

Sustrato

Enzima/Vía Metabólica

Almidón

Amilasa

Caseína Caseinasa

Productos degradación

Indicador

Malto triosas, maltosa, glucosa, dextrinas, etc.

Lugol

Peptonas, péptidos, aminoácidos.

Interpretación

Inoculaci ón

Estría recta El Lugol con el almidón forman un complejo color café-púrpura que desaparece cuando el almidón ha sido degradado.

No requiere

Las proteasas son excretadas al medio para la degradación de proteínas, la caseína es la proteína de la leche que le confiere el color blanco, cuando la caseína es hidrolizada desaparece el color blanco alrededor del crecimiento microbiano.

Estría recta

Hidrólisis de sangre

Biliverdina (degradación parcial) o bilirrubina (degradación total)

Agar Sangre

Hemoglobina

Hemolisina

Hidrólisis de DNA

Agar DNA

DNA

DNAsa

Nucleótidos y nucleósidos

Verde de metilo, HCl

Licuefacción de la gelatina

Gelatina Nutritiva

Gelatina (proteína)

Gelatinasa (Proteasa, exoenzima)

Aminoácidos

No requiere o puede emplearse el carbón activado en polvo

Por agotamie nto en estría

No requiere

Estría recta

La gelatina es una proteína que tiene la capacidad de gelificar, cuando es hidrolizada por la gelatinasa en los aminoácidos que la componen pierde su característica de gelificar. Se

Suspenci ón

pueden emplear varios medios que permiten la visualización macroscópica como la gelatina adherida a carbón activado. Kygler

Agar hierro de Kligler

Glucosa 0.1%, lactosa 1% y Tiosulfato o grupos –SH de la cisteína

Vía Fermentati va y Enzimas: Tiosulfato reductasa y cisteína desulfurilas a

Ácidos mixtos y H 2S.

Rojo de fenol y sales de Fe2+

Prueba de Rojo de metilo

RM-VP

Glucosa

Fermentaci ón ácida o neutra

Acido orgánicos o acetoína

Solución de Rojo de Metilo, Alfa Naftol y KOH 40%.

Estría recta

Fermentación ácido mixta: Los productos finales son ácidos orgánicos que provocan un descenso brusco del pH inicial del medio (viraje del indicador de amarillo pH por encima de 5,1) y rojo (pH por debajo de 4,4). Fermentación butilenglicólica: en ésta, parte del piruvato se metaboliza produciendo cantidades menores de ácido láctico, fórmico y acético, la mayor parte del piruvato se condensa formando acetilmetilcarbinol, que es reducido a 2,3-butilenglicol, productos que son neutros. Para determinar la

Suspensi ón

presencia de los productos neutros (prueba de Voges-Proskauer): Se agrega un poco de α-naftol al 5% en etanol (medio adquiere aspecto lechoso), luego se le añade (KOH 40%) que desaparece el aspecto lechoso, se agita fuertemente. (Prueba positiva color rosado - violáceo en la parte superior del tubo; Prueba negativa no tiene coloración).

Caldo Rojo de fenol más carbohidratos

Medio base rojo de fenol

carbohidratos enzimas de la glucólisis

Acido pirúvico

rojo de fenol

Si hay

Suspensi ón

fermentación del carbohidrato el caldo tornara de color amarillo , puede observarse gas en forma de burbujas. Si no hay fermentación el caldo tiene una coloracion naranja rojiza.

Oxidación/Ferme ntación

Hugh and Leifson

Carbohidrato s

Descarboxilasas

LIA o M IO

Aminoácidos (lisina, ornitina o arginina)

Vías fermentati va y/u oxidativa Descarboxil asas

Acido pirúvico

Azul de bromotimol

Amoníaco

Púrpura de bromocresol

Picadura

Los aminóacidos al perder el grupo carboxilo se convierten en diaminas lo que incrementa el pH del medio y el indicador (púrpura del

Picadura

bromocresol) vira a violeta. Las descarboxilasas son útiles en la diferenciación de enterobacterias

Prueba de SIM (Sulfhídrico Indol Movilidad)

SIM (medio semisólid o)

Tiosulfato o grupos –SH de la cisteína y triptófano.

Tiosulfato reductasa, cisteína desulfurilas ay tiptofanasa

H2S e Indol.

Sales de Fe2+ y pDimetilaminobenza ldehído (DMABA)

Picadura

En presencia de tiosulfato en el medio o la degradación de proteínas liberando aminoácidos azufrados, algunos microorganismos forman H2S gaseoso por medio de las enzimas tiosulfato reductasa y cisteína desulfurilasa. El gas incoloro H2S reacciona con el citrato de amonio férrico para producir un precipitado negro insoluble de sulfuro ferroso metálico

Utilización del citrato

Citrato de Simmons

Citrato de sodio

Citrato permeasa

(NH4 )2CO2

Azul de bromotimol.

Estria recta y picadura

Un microorganismo que puede utilizar el citrato como única fuente de carbono también utiliza las sales de amonio del medio como única fuente de nitrógeno. La extracción de nitrógeno de las sales de amonio producen amoniaco y se alcaliniza el

Utilización de urea

Caldo urea, urea de Christens ens, caldo surraco

Urea

ureasa

NH4

rojo de fenol, (azul de bromotimol)

Reducción de nitratos

Medio caldo nitrato

nitrato de sodio

nitrato reductasa

nitritos, NO, N2O N2

anaftil-amina y ácido sulfanílico

medio virando el indicador al alcalino. La hidrólisis Estria de la urea por recta la enzima ureasa libera dos moléculas de amoniaco que alcaliniza el medio, entonces se vira el indicador de pH, en el caso del rojo de fenol una prueba positiva es color bugambilia. Suspenci ón

Prueba de la oxidasa

Cultivo de medio nutritivo

N,N,N,Ntetra metilpfenilendiami na

citocromo oxidasa c

N,N,N,Ntetra metilpfenilendiami na oxidado

Reactivo de Kovacs

Estria recta

Prueba de catalasa

No es nesesario

H2O2

catalasa

H2O + O2

No requiere

NO es necesari o