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INFORME DE PRUEBAS BIOQUÍMICAS LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

ENSAYOS MICROBIOLÓGICOS LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA IES A SARDIÑEIRA ANALISIS Y CONTROL DE CALIDAD Responsable: Isabel Marfany Medín Fecha: 21/01/2014

Cepa: Escherichia coli. Pruebas de Identificación de Enterobacteriáceas (IMViC y otras pruebas).

PRUEBA

Resultados

Indol

+

Rojo de metilo y Voges-Proskauer

+/-

KLIGER

Producción de gas

Nitratos

+

Citratos

-

Catalasa

+

Oxidasa

-

Manitol movilidad

+

Isabel Marfany Laboratorio de análisis y control de calidad 21/01/2014

INFORME DE PRUEBAS BIOQUÍMICAS LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

ENSAYO

Prueba del Indol Detección de la encima triptofanasa. Medio de cultivo: Agua de triptona. Tipo de siembra: transferencia aséptica con asa curva. Incubación: 24h 37ºc Reactivos: Kovac´s (4 ó 5 gotas). Resultados:

Agua de triptona inoculada.

Añadimos al cultivo el reactivo de Kovac´s y se forma un anillo púrpura en la superficie del medio. El microorganismo contiene la encima triptofanasa. Indol positivo.

Isabel Marfany Laboratorio de análisis y control de calidad 21/01/2014

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Prueba del Rojo de Metilo y Voges-Proskauer -Rojo de Metilo. Detección de la presencia de fermentación acido-mixta. Medio de cultivo: caldo MRVP. Tipo de siembra: transferencia aséptica con asa curva. Incubación: 24h 37ºc Reactivos: Rojo de metilo (4 ó 5 gotas). -Voges-Proskauer. No presenta fermentación butanodioica. Medio de cultivo: caldo MRVP. Tipo de siembra: transferencia aséptica con asa curva. Incubación: 24h 37ºc Reactivos: Alfa-naftol y KOH (4 ó 5 gotas de cada uno). Resultados:

Cultivo en caldo MRVP

Dividimos el cultivo en dos tubos diferentes y en uno añadimos el reactivo rojo de metilo (tubo derecho) y en el otro el reactivo alfa-naftol seguido de KOH (tubo izquierdo). Rojo de metilo: color rojo intenso (positivo). Voges-Proskauer: No se vuelve rojo (negativo).

Isabel Marfany Laboratorio de análisis y control de calidad 21/01/2014

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Prueba del KLIGER Detección de gas. Medio de cultivo: KIA (Slant) Tipo de siembra: transferencia aséptica con asa recta. Picadura y estría. Incubación: 16h-24h 37ºc Resultados:

Medio sin inocular (derecha) y medio inoculado (izquierda).

Medio inolulado. No se añaden reactivos. Producción de ácidos de la lactosa (y de la glucosa): En la superficie del medio las enterobacterias respiran utilizando la glucosa y luego la lactosa en condiciones aeróbicas y anaeróbicas. En el fondo producen una elevada cantidad de ácidos y difunden hasta la superficie (todo el medio amarillo). El color del medio indica el PH ácido (Baja el PH del medio de cultivo). *Producción de gas ácido-ácido.

Isabel Marfany Laboratorio de análisis y control de calidad 21/01/2014

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Prueba de Nitratos Detección de nitritos. Medio de cultivo: Caldo nutritivo con campana de Durham (lleva como suplemento nitrato potásico). Tipo de siembra: transferencia aséptica con asa curva. Incubación: 24h 37ºc Reactivos: Reactivos A y B de Griess-Ilosvay. Polvo de Zinc. Resultados:

Medio inoculado (izquierda) y medio sin inocular (derecha).

Añadimos los reactivos A y B de GriessIlosvay. Al no cambiar el medio de color, añadiremos polvo de Zinc, ya que no podemos confirmar que sea negativo. Al añadir polvo de Zinc, el color sigue sin cambiar, y por lo tanto la prueba es positiva y hay presencia de nitritos.

Isabel Marfany Laboratorio de análisis y control de calidad 21/01/2014

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Prueba de citratos Medio de cultivo: Agar Citrato de Simmons (Slant). Tipo de siembra: transferencia aséptica con asa recta. Estría. Incubación: 24h 37ºc Resultados:

Medio de cultivo antes de inocular

Medio de cultivo después de inocular. No es necesario añadir ningún reactivo. No se ha obtenido crecimiento y el agar no ha cambiado de color a azul, por tanto la prueba es negativa.

Isabel Marfany Laboratorio de análisis y control de calidad 21/01/2014

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Prueba de la catalasa Detección de catalasa. Medio de cultivo: Agar Nutritivo (Slant). Tipo de siembra: transferencia aséptica con asa curva. Estría. Incubación: 24h 37ºc Reactivos: Agua Oxigenada. Resultados:

Medio de cultivo inoculado.

En un portaobjetos, colocamos una gota de agua oxigenada y depositamos con el asa curva (de plástico) una muestra de una colonia. El agua oxigenada se ha disociado en agua y oxígeno (se observa el burbujeo del oxígeno). La prueba es positiva (hay presencia de catalasa).

*Observaciones: Utilizar asa de siembra de plástico para evitar falsos positivos.

Isabel Marfany Laboratorio de análisis y control de calidad 21/01/2014

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Prueba de la oxidasa Detección de oxidasa. Medio de cultivo: Agar Nutritivo (Slant). Tipo de siembra: transferencia aséptica con asa curva. Estría. Incubación: 24h 37ºc Reactivos: Reactivo de la oxidasa/reactivo de Kovac´s. Resultados:

Medio de cultivo inoculado.

En el papel de filtro depositamos una gota de reactivo de Kovac´s. Con el asa curva (de plástico), restregamos una muestra de una colonia sobre la gota. No se ha obtenido coloración púrpura. No hay cambio de color y por tanto, hay ausencia de oxidasa. La prueba es negativa.

*Observaciones: Utilizar asa de siembra de plástico para evitar falsos positivos.

Isabel Marfany Laboratorio de análisis y control de calidad 21/01/2014

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Prueba de Manitol movilidad Detección de fermentación del manitol y determinación de la movilidad de nuestro microorganismo gracias a ser un medio semisólido.

Medio de cultivo: Manitol movilidad (agar recto, superficie líquida). Tipo de siembra: transferencia aséptica con asa recta. Picadura. Incubación: 24h 37ºc Resultados:

Medio de cultivo sin inocular.

Medio de cultivo antes (derecha) y después (izquierda) de inocular. Tras la incubación, el medio ha cambiado a color amarillo, lo cual indica que el resultado es positivo. El microorganismo es capaz de fermentar el manitol. Hay movilidad ya que el crecimiento va más allá de la picadura, tomando una dirección determinada.

Isabel Marfany Laboratorio de análisis y control de calidad 21/01/2014