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TAMIZAJE FITOQUÍMICO PRELIMINAR DE LA ESPECIE MANGIFERA INDICA DEL GENERO MANGIFERA Martínez Aura1, Padilla Yaquelin1, Villamizar María1, Díaz Fredyc2 1. Estudiantes de química farmacéutica V semestre, Universidad de Cartagena, Facultad de ciencias Farmacéuticas, sede Zaragocilla. 2. Docente de Laboratorio de Farmacognosia y fotoquímica, Universidad de Cartagena, Facultad de Ciencias Farmacéuticas, Programa de Química Farmacéutica RESUMEN La especie mangifera indica, se utilizan tradicionalmente como diurético y para el tratamiento de enfermedades gastrointestinales, también la usan para preparar tinturas para pigmentar la piel en enfermedades como el carate o vitíligo. El objetivo del presente trabajo fue determinar la composición fitoquímica de extractos etanólicos del endospermo de dicha especie. Las muestras a estudiar se recolectaron y trasladaron al laboratorio de Farmacognosia y Fitoquímica de la Universidad de Cartagena para su tamizaje fitoquímico. Los principales grupos encontrados fueron: flavonoides, triterpenos/esteroides, taninos, alcaloides y esteroles. Los que le confieren a la planta propiedades antibacterianas, antivirales y anti fúngicas, así como también en la utilización del tratamiento de enfermedades como el cáncer y diabetes. Palabras clave: mangifera indica, tamizaje fitoquimico, endospermo. ABSTRACT The mangifera indica species, we use traditionally as a diuretic and for the treatment of gastrointestinal diseases, we also use to prepare dyes to pigment the skin in diseases such as carate or vitiligo. The objective of this work was to determine the phytochemical composition of ethanolic extracts of the endosperm of said species. The samples to be studied were collected and transferred to the Pharmacognosia and Phytochemical Laboratory of the University of Cartagena for phytochemical screening. The main groups found were: flavonoids, triterpenes / steroids, tannins, alkaloids and sterols. Those that give the plant antibacterial, antiviral and anti fungal properties, as well as in the use of the treatment of diseases such as cancer and diabetes. Keywords: mangifera indica, phytochemical screening, endosperm.

INTRODUCCIÓN Mangifera indica, comúnmente mango o melocotón de los trópicos, es una especie arbórea frutal del género perteneciente a la familia Anacardiaceae. Es un árbol siempre verde que puede alcanzar los 45 m de altura con una copa de 30 m de diámetro. Hojas alternas, simples, coriáceas, de lanceoladas a oblongas. El fruto es una drupa que destaca entre sus principales características su buen sabor. Dicha pulpa puede ser o no fibrosa. Es una fruta normalmente de color verde en un principio, y amarillo, naranja e incluso rojo-granate cuando está madura, de sabor medianamente ácido cuando no ha madurado completamente. Es originario del subcontinente indio (India) y de la Indochina; introducida y cultivada en países de clima tropical además de algunos de clima templado o mediterráneo. Mangifera indica, en varias regiones de Colombia presentan usos tan diversos como: la decocción de las raíces que se toma como diurético y para el tratamiento de enfermedades gastrointestinales. Esta decocción también la usan para preparar tinturas para pigmentar la piel en enfermedades como el carate o vitíligo. El masticar las hojas fortalece los dientes y actúa contra ampollas bucales. La infusión de la corteza se utiliza en el tratamiento del paludismo y los enjuagues en el cabello. El uso del fruto como alimento es ampliamente distribuido. El mango es conocido además por ser una especie melífera. El tamizaje fitoquímico consiste en un conjunto de pruebas microquímicas sencillas y rápidas. Estas pruebas permiten detectar la presencia de determinados grupos químicos mediante la formación de reacciones de precipitación o cambios de coloración. Estas reacciones se caracterizan porque son selectivas para las clases o grupos de compuestos que se investigan, son simples y rápidas, detectan la mínima cantidad posible y utilizan un mínimo de equipo de laboratorio. El tamizaje fitoquímico determina cualitativamente los principales grupos de constituyentes químicos o metabolitos secundarios presentes en una planta. Los metabolitos secundarios son compuestos químicos sintetizados por las plantas para realizar determinadas funciones, dispersión de semillas, defensa frente a determinadas agresiones o la captación de los insectos polinizadores, son un elemento importante y necesario ya que en el reino vegetal representan una ventaja competitiva. Los principales grupos de constituyentes químicos o metabolitos secundarios presentes que son determinados en un tamizaje fitoquímico son Alcaloides, Taninos, Saponinas, Flavonoides, Cumarinas, Quinonas. La mangiferina es un compuesto importante que se extrae de las hojas y corteza del mango, al igual que de la piel y el fruto, con propiedades antioxidantes, antimicrobianas, antidiabéticas, antihistamínico, anticancerígeno, hipocolesterolémico e inmunomodulatorio. El presente estudio se enfoca en la identificación de metabolitos secundarios en la semilla del mango, mediante pruebas colorimétricas.

TABLA 1. Aplicaciones generales de cada fitoconstituyentes Fitoconstituyentes Alcaloides Esteroles

Triterpenos

Glicósidos cardiotónicos

Saponinas

Fenoles simples

Flavonoides

Taninos

Cumarinas

Aplicaciones Medicinal. Por su actividad fisiológica diversa constituyen materias primas para la fabricación de medicamentos Medicinal. Forman parte de hormonas animales y vitaminas Medicinal e industrial. Constituyen los llamados aceites esenciales, útiles en perfumería, farmacia y en la preparación de determinados alimentos Medicinal e industrial. Constituyen los llamados aceites esenciales, útiles en perfumería, farmacia y en la preparación de determinados alimentos Medicinal e industrial. Precursores de hormonas esteroidales y corticosteroides. Por su actividad tensoactiva son útiles como emulgentes y hemolizantes Medicinal e industrial. Poseen actividad antifúngica, desinfectante y aromatizante Medicinal e industrial. Reducen fragilidad capilar, protegen frente a estados tóxicos, antiinflamatorios y colorantes Medicinal e industrial. Propiedades astringentes y antisépticas. Utiles en la fabricación de tintas y otros colorantes, para curtir pieles Medicinal e industrial. Anticoagulante y aromatizante

MATERIALES Y METODOS Preparación del extracto etanólico en frio del endospermo de la especie mangifera indica. Principalmente se recolectó unos aproximados 500 gramos de semilla de mango las cuales deben estar completamente secas, de lo contrario estas deben colocarse ya sea en contacto directo con el sol o en un horno a temperaturas bajas. Se procedió a separar la almendra del endospermo de la semilla de mango con la ayuda de un objeto corto punzante, obtenido el material vegetal este se trituró con una licuadora industrial, dejando el material lo más pequeño posible. Luego se llevó el material vegetal a un recipiente de vidrio con su respectiva tapa para agregarle el etanol, realizando así la maceración en frio. Dicha mezcla se dejó por varios días (3 aproximadamente), agitando el recipiente varias veces, extrayendo de tal manera todos los compuestos solubles en dicho solvente. Pasados los días se procedió a filtrar la mezcla con la ayuda de un montaje para filtrado, el cual incluye soporte universal, pinzas, aros, papel filtro y algodón de refuerzo para garantizar un buen

filtrado. Una vez terminado dicho proceso se concentró el extracto con la ayuda de un rota evaporador, llevando el extracto ya rota evaporado a un recipiente de vidrio tapado con papel aluminio el cual contenía orificios en la parte superior para evaporar todo el etanol, dejando el extracto seco en su totalidad. Preparación de las placas para cromatografía y pruebas realizadas. Para realizar el montaje de las placas para la cromatografía, se tomaron aproximadamente 0,4g del extracto seco, llevándose a un vial de 1,5mL y se disolvieron en etanol. Obtenida esta mezcla se inyectaron las muestras con la ayuda de un capilar en las placas de sílice gel de 5cm de largo y 1cm de ancho, con un frente y fondo de 0,5cm en cada placa. Posteriormente se preparó una cámara de cromatografía con una mezcla de cloroformo y acetona 1:1 como fase móvil, logrando así la separación de las bandas de la muestra del endospermo inyectada a lo largo de toda la placa. Se realizaron varias placas dependiendo del número de pruebas a realizar para cada metabolito, observándose en el ultravioleta a una longitud de onda de 254 y 365nm. Para la lectura de los resultados de las pruebas se tuvo en cuenta la siguiente simbología. Presencia abundante [+++], presencia moderada [++], presencia leve [+], ausencia [-]. RESULTADOS Y DISCUSIÓN Los resultados de la determinación de la composición fitoquímica para el endospermo de la especie mangifera indica estudiada muestran la presencia de varias familias de metabolitos secundarios. Se destacan los flavonoides, triterpenos/esteroides, taninos, alcaloides y esteroles. En la tabla 1 se presentan los resultados del tamizaje fitoquímico realizado al endospermo de la especie mangifera indica. Y en la diferentes figuras se pueden apreciar los resultados arrojados para para cada prueba que se realizó.

Fig 1. Extracto etanolico del endospermo de la Mangifera indica, con una fase móvil de cloroformo: acetona en proporción 1:1. Vista en UV-254 nm y UV-365nm.

Fig 2. Extracto etanolico del endospermo de la Mangifera indica, con una fase móvil de cloroformo: acetona en proporción 1:1. Revelado con reactivo de Vainillina/ H2SO4, marcando una coloración roja, posterior prueba positiva para esteroles.

Fig 3. Extracto etanolico del endospermo de la Mangifera indica, con una fase móvil de cloroformo: acetona en proporción 1:1. Revelado con reactivo de solución de KOH al 5% en EtOH, marcando una coloración marrón, posterior prueba negativa para Cumarinas. Vista en UV-254 nm y UV-365nm.

Fig 4. Extracto etanolico del endospermo de la Mangifera indica, con una fase móvil de cloroformo: acetona en proporción 1:1. Revelado Dragendorff, no hubo coloración roja o naranja, posterior prueba negativa para alcaloides.

Fig 5. Extracto etanolico del endospermo de la Mangifera indica, con una fase móvil de cloroformo: acetona en proporción 1:1. Revelado con reactivo de Wagner, marcando una coloración naranja, posterior prueba positiva para alcaloides.

Fig 6. Extracto etanolico del endospermo de la Mangifera indica, con una fase móvil de cloroformo: acetona en proporción 1:1. Revelado con reactivo citroborico y calentado a 100°C en estufa durante 5 minutos., marcando una fluorescencia azul, posterior prueba positiva para flavonoides. Vista en UV-254 nm y UV-365nm.

Fig 7. Extracto etanolico del endospermo de la Mangifera indica, con una fase móvil de cloroformo: acetona en proporción 1:1. Revelado con Revelado con Vainillina/ H2SO4, marcando una coloración roja, posterior prueba positivatriterpenos y esteroides.

Fig 8. Extracto etanolico del endospermo de la Mangifera indica, reacción en tubo con dos gotas de solución de cloruro férrico al 10%.Coloración azul indicando posible presencia de taninos hidrolizables, posterior prueba positiva para taninos.

Fig 9. Extracto etanolico del endospermo de la Mangifera indica, reacción en tubo, no se observó presencia de espuma, posterior prueba negativa para saponina.

Tabla 2. Resultados de los fitoconstituyentes encontrados en la semilla de mango. Metabolito Alcaloides Cumarinas Volatiles Flavonoides Taninos Saponinas Triterpenos y esteroides Alcaloides Esteroles Cardiotónicos.

Prueba Revelado con Dragendorff Revelado con reactivo de KOH al 5% en etanol Revelado con reactivo citroborico Prueba en tubo con FeCl3 Prueba en tubo Revelado con Vainillina/ H2SO4 Revelado con Wagner. Revelado con Vainillina/ H2SO4 reactivo de Baljet

Extracto etanolico ++ +++ +++ + + -

En el endospermo de la especie Mangifera Indica, se encontraron metabolitos secundarios como: Alcaloides, flavonoides, taninos, esteroles y, triterpenos y esteroides, resultados que coinciden con los encontrados por Raja( 2011), quienes además reportaron la identificación de compuestos como, compuestos fenólicos y gomas o mucilagos. Se considera favorable la presencia de esteroles en la planta estudiada, debido a que estos actúan sobre la hipertrofia de la próstata, la diabetes y la inflamación en pacientes con enfermedades autoinmunes. Los triterpenos y/o esteroides son compuestos de interés, debido a sus potencialidades farmacológicas, ya que se emplean como diuréticos, expectorantes, cicatrizantes y antiinflamatorios (illalba 2005). Los resultados obtenidos en el presente trabajo mostraron que estos compuestos se encontraron de forma notable. La actividad biológica de los alcaloides es muy diversa, algunos de ellos se caracterizan por su toxicidad y su empleo en enfermedades como el cáncer. Los taninos se caracterizan por poseer acciones antidiarreicas, astringentes, cicatrizantes y hemostáticas. La presencia notable de los flavonoides le confiere a la especie estudiada propiedades antibacterianas, antivirales y anti fúngicas. La prueba para la identificación de alcaloides se hizo por duplicado con dos reactivos diferentes, cuando se utilizó el reactivo de Dragendorff la prueba marco negativa al no aparecer ninguna coloración, sin embargo al realizar la prueba con el reactivo de Wagner, la prueba marcó positiva, pudo ocurrir esto como un falso positivo o que algunas sustancias oxigenadas con alta densidad electrónica pueden dar negativo con Dragendorff.

CONCLUSIÓN Los resultados obtenidos en el tamizaje fitoquímico demostraron la presencia de sustancias fitoquímicas con potencial bioactivo (esteroles, triterpenos, glucósidos cardiotónicos, flavonoides y taninos) en el extracto en fril endospermo de la semilla de mango. Los alcaloides resultaron ser los metabolitos menos frecuentes en las pruebas de detección realizadas solo la prueba con el reactivo de Wagner dio resultado positivo. BIBLIOGRAFÍA 

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Triana, Estefannia, E,. SELECCIÓN DEL MÉTODO DE EXTRACCIÓN EN BASE AL RENDIMIENTO Y LOS RESULTADOS DEL TAMIZAJE FITOQUÍMICO EN EXTRACTOS DE LAS HOJAS DE MANGIFERA INDICA L. Guayaquil, 6 de marzo 2016. Wikipedia la enciclopedia libre (2020). Mangifera indica. Dirección: https://es.wikipedia.org/wiki/Mangifera_indica Armando Payo, Marledis Oquendo, y Ramona Oviedo (2020). Tamizaje fitoquímico preliminar de plantas que crecen en Holguín. Rev Cubana Farm v.30 n.2 Ciudad de la Habana Mayo-ago. 1996. Rajan S1 , Thirunalasundari T2 , Jeeva S3. Anti-enteric bacterial activity and phytochemical analysis of the seed kernel extract of Mangifera indica Linnaeus against Shigella dysenteriae (Shiga, corrig.) Castellani and Chalmers. (2011). Volume 4, Issue 4 páginas 294-300. illalba JJ, Proenza FD. Foraging in chemical diverse environments: energy, protein and alternative foods influence ingestion of plant secondary metabolites by lambs. J Chem Ecol. 2005; 31(1):123.