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• Fabiana Torres

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PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA BIOQUÍMICA BÁSICA

IDENTIFICACIÓN Y SEPARACIÓN LÍPIDOS INTEGRANTES:​Luis Miguel Bohorquez,Andrea Camila Abril,Laura Esperanza Cuesta

RESUMEN En la práctica de laboratorio de bioquímica se realizaron dos importantes pruebas, primero para separar e identificar lípidos mediante cromatografía de capa delgada la cual se realizaban mediante la extracción de lípidos con un solvente orgánico debido a su baja polaridad, y como segunda prueba que fue exitosa erra la acidez de una grasa donde hay que mencionar que las grasas almacenadas pueden enranciarse debido a los siguientes procesos: oxidación de sus dobles enlaces que forma peróxidos y hidrólisis por microorganismos que es lo que libera los ácidos grasos, gracias a estas pruebas se logró realizar el laboratorio, es importante resaltar que la cromatografía de capa delgada se realizó con huevo cocido y se utilizaron elementos importantes tales como la cama para cromatografía, cromatoplacas y plancha de calentamiento que influyeron en la separación para lograr identificar los lípidos​. MARCO TEÓRICO Los lípidos son moléculas orgánicas solubles en solventes diferentes al agua. Se componen en su mayoria de carbono e hidrógeno, y en menor medida, de oxigeno, nitrogeno y fosforo. Estas moléculas se caracterizan por su solubilidad en diferentes solventes orgánicos debido a su baja polaridad, como el éter o la acetona. Según su estructura y ciertas características se pueden clasificar como: ácidos grasos, triglicéridos, fosfolípidos, esteroides, eicosanoides, esfingolípidos, entre otros. Su papel a nivel biológico es fundamental para llevar a cabo ciertos procesos, por ejemplo, almacenamiento de energía, estructuras celulares, señalización celular, entre otros. los lípidos son un grupo de biomoléculas que se caracterizan por ser poco o nada solubles en agua y, por el contrario, muy solubles en disolventes orgánicos no polares. Aunque químicamente heterogéneos, todos presentan un denominador común estructural: la totalidad, o al menos una parte significativa, de su molécula es de naturaleza hidrocarbonada, y por lo tanto apolar. Este rasgo estructural común es el responsable de su insolubilidad en agua y de su solubilidad en disolventes no polares. ​Existen dos tipos principales de ácidos grasos: los ​saturados​, que no poseen dobles enlaces, y los ​insaturados​, que poseen uno o más dobles enlaces a lo largo de su cadena hidrocarbonada

METODOLOGÍA 1. Cromatografía en capa delgada Se puso en un mortero yema de huevo cocida y adiciona 5 ml de la solución extractora (etanol - éter - cloroformo (2:1:2); macero suavemente y se adicionaron otros 5ml de la misma solución extractora para disolver mejor los lípidos. Se filtró a través de papel filtro, recogiendo el filtrado en Erlenmeyer. Previamente se activaron las cromatoplacas de silica gel – G a 100°C durante 20 minutos. Cuando estuvieron frías, marcamos suavemente con un lápiz los puntos donde iban las muestras y los patrones, con una distancia prudencial. En cada punto coloque con mucho cuidado con un capilar entre 3 y 6 gotas de cada muestra Patrones: Colesterol ; Ácido oleico; Ácido palmítico; Ácido esteárico. Muestr as: Huevo, Aceite vegetal cero colesterol dejando que cada gota se seque antes de colocar la siguiente . Se preparó 20 ml de la fase móvil (n - hexano:éter etílico:ácido acético glacial y adiciónela a la cámara de cromatografía. Pusimos la cromatoplaca en la cámara. Saque la cromatoplaca y marque rápidamente el frente hasta donde migró el solvente; déjela secar en la cabina de extracción. Aplique la solución reveladora ( H 2 SO4 - Vainillina ) para la sílica utilizando un atomizador y deje secar la placa (por lo menos 3 minutos) . Coloque la cromatoplaca en una plancha de calentamiento para que se desarrolle el color y después mida la distancia de migración de los diferentes componentes. 2. Acidez de una grasa Se tomó 5 ml de la muestra problema y se agregaron 0,5 ml de fenolftaleína. De esta muestra tome 5 mL y adiciónese 0,5 mL de fenolftaleína. Se titula esta mezcla con KOH 0,1M hasta que color rosado pálido permanezca por más de 30 segundos. RESULTADOS

DISCUSIÓN Por medio de la práctica del laboratorio se analiza compara e identifica las muestras utilizadas,las cuales por medio de la cromatografía de placa delgada vemos que hubo un cambio de distancia por ende son lípidos diferentes es decir tienen un Rrf diferente, si por el contrario hubieran tenido un un Rf nos indican que son muestras iguales.Podemos con la cromatoplaca observar la polaridad de las sustancias,los menos polares son los que se desplazan más rápidamente a comparación de los más polares al verlos en la cromatoplaca.

ANEXOS 1. Que es el enracimiento? El enracimiento de lípidos, también conocido como autooxidación de los ácidos grasos insaturados se relaciona a la reacción que ocurre en los dobles enlaces con moléculas de oxígeno entonces la molécula se escinde formando aldehídos. es un proceso irreversible de oxidación de los ácidos grasos insaturados. Esta etapa autooxidación se divide a su vez en tres: – Iniciación. Se inicia el enranciamiento por la luz, el calor y por la materia mineral que se encuentra en los alimentos, formando hidroperóxidos. – Propagación. Los hidroperóxidos son compuestos muy inestables y se descomponen en radicales, aldehídos, cetonas y alcoholes, que son los causantes del mal olor. – Terminación. Toda esta cantidad de compuestos reactivos que se forman comienzan a interaccionar entre ellos acelerando aún más el proceso de enranciamiento. 2. Cómo se relaciona el enracimiento y los microorganismos? El proceso de deterioro de naturaleza microbiana es un fenómeno variable, dado que está condicionado por el tipo y número de especies microbianas presentes, que a su vez está condicionado por la composición química del sustrato y de las condiciones de conservación, sobre todo la temperatura y la presencia o ausencia de oxígeno.

Las lipasas microbianas y lácteas, desarrollan aromas típicos de quesos. Presentes en el alimento o tambien posible contaminación microbiana. 3. Fundamento de la técnica de cromatografía? La cromatografía comprende un conjunto de técnicas que tienen como finalidad la separación de mezclas basándose en la diferente capacidad de interacción de cada componente en otra sustancia. De forma general, consiste en pasar una fase móvil (una muestra constituida por una mezcla que contiene el compuesto deseado en el disolvente) a través de una fase estacionaria fija sólida. La separación de los diferentes componentes de una mezcla que se encuentran en un líquido o gas es el resultado de las diferentes interacciones de los solutos a medida que se van desplazando sobre la sustancia líquida (llamada fase estacionaria). Las técnicas de separación de mezclas se fundamentan así mismo en la afinidad de los compuestos ya sea por fase móvil gas o líquido y/o entre su fase estacionaria por donde están atravesando. 4. Cálculos de RF y su análisis. 5. Índice de acidez para cada una de las muestras? Acidez del huevo: Acidez del aceite vegetal: -

Huevo + colesterol: Huevo + ácido oleico: Huevo + ácido palmítico: Huevo + ácido esteárico: Aceite vegetal cero colesterol + Aceite vegetal cero colesterol + Aceite vegetal cero colesterol + Aceite vegetal cero colesterol +

PROCESO

CONCLUSIONES ● Gracias a las propiedades físicas y químicas que presentaron las biomoléculas trabajadas, se pudo conocer los comportamientos y las incidencias en la cromatografía en capa delgada. además, se conoce el fundamento de las pruebas de acidez de ácidos grasos. ● Este tipo de cromatografía nos permite de una manera más fácil poder separar y diferenciar los diferentes tipos de lípidos usados en la práctica ● Se cumplio el objetivo propuesto de separar e identificar los lípidos mediante cromatografía en capa delgada, aparte de que ahora se conoce el fundamento de las prueba de acidez de ácidos grasos.

BIBLIOGRAFÍA ● Lípidos y sus procesos, tomado de: Procesos de Conservación de los Alimentos. Ed Mundi-Prensa (España). ● Cromatografía: http://www.ub.edu/oblq/oblq%20castellano/cromatografia_fonament.html ● Alemany M, Font S, Prácticas de Bioquímica. Madrid: Editorial Alambra. 1985. ● Shrine R.L., Fuson R.C. Identificación sistemática de compuestos orgánicos.