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• Elvis Huanca Ortiz

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UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO

FACULTAD: Facultad de Ingeniería Química CURSO: Microbiología AÑO Y SEMESTRE: 2018 – II

TITULO: ANALISIS MICROBIOLOGICO DE AGUA POTABLE Profesor: HERRERA SANCHEZ, Sonia Integrantes:

   

ZACARIAS RODRIGUEZ, Leandro Justo CASTILLO QUIJADA , Ángela VEGA TOSCANO, Roger Fiel VARA AYERBE, David

05 de noviembre del 2018

I.

INTRODUCCION

La mayoría de las bacterias en el grupo de coliformes no causan la enfermedad, pero cuanto mayor sea su número, mayor será la probabilidad de que las bacterias causantes de enfermedades pueden estar presentes. Puesto que las bacterias coliformes suelen persistir en el agua como la mayoría de organismos que causan enfermedades, la ausencia de bacterias coliformes conduce a la suposición de que el suministro de agua es microbiológicamente segura para beber. Por lo tanto, la norma de agua potable requiere que no haya bacterias coliformes presentes en el agua potable. Los coliformes fecales y E. coli también deben estar totalmente ausentes en el agua potable.

La E.coli es una bacteria que se encuentra comúnmente en el sistema digestivo de los seres humanos y animales de sangre caliente. Debido a su alta presencia en el intestino, la E. coli se utiliza como el indicador principal para detectar y medir la contaminación fecal en la evaluación de la inocuidad del agua y de los alimentos. Consideradas comensales inofensivos, las cepas de E. coli constituyen alrededor Del 1% de la población microbiana normal del intestino. Si bien la mayoría de las cepas dentro del intestino son agentes patógenos gastrointestinales beneficiosos para el ser humano, otros son perjudiciales. El objetivo de este proyecto fue investigar la presencia de eschericha coli en una muestra de agua con nutrientes para cultivo, por medio del cultivo microbiológico, usando el agar Endo

Los resultados permitirán confirmar o no la presencia de una variedad de agentes bacterianos implicados en contaminación microbiológica.

II. OBJETIVO  Analizar los microorganismos (escherichia coli y coliformes) de nuestra muestra problema (agua potable de casa en ATE) e identificarlo mediante el Agar Endo. 

Comparar nuestros resultados con a R.M N° 591-2008/MINSA, interpretarlos y considerarlos si dicha muestra es apta o no para el consumo humano.

III.

MARCO TEORICO

La E. coli es casi exclusivamente de origen fecal y se transmite a través de la contaminación fecal de los alimentos y del agua, así como también a través de la contaminación cruzada o por contacto humano directo durante la preparación de los alimentos. Mientras tanto, la principal vía de exposición pareciera ser el consumo de alimentos contaminados, como carne molida cruda o mal cocida, leche cruda y productos frescos. A pesar de la gravedad o ausencia de los síntomas de la enfermedad, las personas y animales infectados pueden liberar entre 106 a 109 unidades formadoras de colonias (UFC) por gramo de heces y la liberación de la E. coli también se puede producir a través de portadores asintomáticos.

Fig. 1.- Vía de contaminación con E. coli a través de la interacción entre animales, humanos, cultivos y medioambiente

3.1.- Qué alimentos podrían contaminarse

Una amplia gama de alimentos pueden ser un vehículo para la E. coli patógena en conjunto con sus respectivas ecologías. Los alimentos pueden contaminarse de manera directa o por contaminación cruzada durante el crecimiento y cultivo (hortalizas), recolección (leche) o faenado (carne). Se puede producir una contaminación adicional durante la manipulación pos cosecha, transporte, elaboración y manipulación no higiénica de alimentos durante su preparación. Los factores que contribuyen a la persistencia de la E. coli en los sistemas alimentarios incluyen el control inadecuado de los parámetros de procesamiento (p. ej., temperatura de cocción, valor del pH, actividad del agua y almacenamiento a altas temperaturas que permiten el crecimiento de estas bacterias). Entre los ejemplos de alimentos contaminados se encuentran: carne cruda/mal elaborada (carne fermentada, carne molida mal cocida, etc.), productos lácteos no pasteurizados (queso, leche, etc.), jugos de frutas no pasteurizados y hortalizas crudas (semillas germinadas, lechuga, espinaca, melones, hongos, etc.).

3.2.- Productos frescos y semillas germinadas

La E. coli liberada por los animales y los seres humanos en sus heces puede ingresar a los agro ecosistemas a través del estiércol, aguas de riego, semillas contaminadas, plagas de insectos y animales silvestres, o vectores nematodos. De esta manera, los productos frescos contaminados han cobrado mayor importancia como causantes de epidemias de bacterias patógenas humanas, que incluyen las diferentes variedades de E. coli. Se ha comprobado la supervivencia y crecimiento de poblaciones de E. coli en plantas y suelos de los campos de cultivo. Se ha demostrado además que la E. coli puede sobrevivir en suelos contaminados hasta por 20 meses y, de esa manera, puede permanecer como contaminante ambiental por un período de tiempo prolongado. Más aún, la sobrevivencia en las hojas y raíces de los cultivos puede ser mayor que en el suelo. Las hojas más tiernas tienden a proporcionar un mejor hábitat que las

hojas más maduras y las hojas con mayores niveles de nitrógeno, hojas y frutas deterioradas, permiten una multiplicación más rápida y un aumento de la supervivencia de la E. coli. En los últimos años, ha aumentado significativamente la popularidad de las semillas germinadas debido a su valor nutricional. Sin embargo, los informes de brotes de enfermedades transmitidas por los alimentos, asociados con dichos productos vegetales crudos, han aumentado la preocupación de los organismos de salud pública y de los consumidores.

3.3.- Alimentos procesados

Los alimentos procesados pueden contaminarse a través de las materias primas, un tratamiento y manipulación inadecuados del agua, así como también a través de la contaminación cruzada. Las bacterias pueden continuar creciendo en los alimentos, a menos que se controlen los parámetros de los procesos pertinentes, como valor del pH, actividad del agua, temperatura y tiempo. Sólo unas pocas células bacterianas que sobrevivan en los alimentos pueden ser suficientes para provocar enfermedades.

3.4.- Control de la E. coli patógena en los alimentos y el agua Es necesario identificar los puntos de control a lo largo de la cadena alimentaria para reducir al mínimo los riesgos para la salud pública. Se deben seguir pasos para la mitigación de los riesgos de acuerdo con los códigos reconocidos de buenas prácticas y las recomendaciones pertinentes de los servicios veterinarios y de salud pública. Para las variedades STEC/ EHEC, es necesario analizar la senda desde la granja al consumidor. En la etapa precosecha, dichos pasos incluyen reducir al mínimo la colonización en los rebaños de ganado y evitar la contaminación con estiércol en los cultivos. En la etapa poscosecha, se incluye la higiene y manipulación en los mataderos y establos de ordeño durante el embalaje de los productos. Las E. coli patógenas se comportan de manera similar que las E. coli genéricas y son capaces de persistir y crecer en muchos alimentos. Crecen de manera prolífica durante la producción de semillas germinadas, por lo cual reducir al

mínimo la contaminación inicial de dichas semillas y limitar su posterior crecimiento son importantes medidas de control. Algunas cepas de E. coli pueden desencadenar respuestas en condiciones difíciles que mejoran su crecimiento y persistencia, p. ej., la STEC puede tolerar condiciones ácidas en jugos de frutas y en carnes y lácteos fermentados.

Dado que los puntos principales de control tienden a ser diferentes según la variedad, es esencial conocer la epidemiología de las enfermedades transmitidas por los alimentos a nivel local para establecer un programa de inocuidad

alimentaria

apropiado

y

efectivo.

Esto

exige

un

enfoque

interdisciplinario orientado a las interacciones que se producen entre los humanos, animales y plantas dentro de sus ecosistemas.

Fig. 2.- Agentes patógenos entéricos humanos en las plantas de cultivos extensivos

IV.

MATERIALES Y EQUIPOS DE LABORATORIO AGUA POTABLE

AGAR ENDO

AGAR EBM

BOLSA SIMPLOX

PIPETAS

TUBOS DE ENSAYO

INCUBADORA

PROPITA

V.



PARTE EXPERIMENTAL

Se desinfecta el lugar de trabajo con lejía la mesa y el uso del mechero de bunsen.



Se prepara 1L se solución salina a 0.8%, de la cual se agrega 75 ml a una probeta de 100ml.



En un vaso de precipitado de 250 ml, se agrega 100ml agua y añadimos el Agar Endo o el Agar EMB destapado, colocamos el vaso sobre la cocina eléctrica el agar y pase al estado líquido hasta llegar a una temperatura aproximada de 60-75°C.



Se toma 90ml de la muestra problema (agua con nutrientes para cultivo) en una probeta.



En un vaso de precipitado se agrega la muestra (agua potable) y la solución salina, con ayuda de una bagueta se diluye la solución.



Se extrae 1 ml de la solución del vaso de precipitado con ayuda de una pipeta y se agrega a la placa Petri ya teniendo el Agar Endo o el Agar EMB listos para depositarlos en la placa Petri.



Se agrega el Agar Endo o el Agar EMB y se cierra la placa Petri, finalmente cuando este solido nuestro agar con la muestra pasamos a ponerlo en la incubadora por aprox. 2 dias que es lo recomendable ya que si se deja más tiempo las bacterias se mueren poco a poco.

LECTURA 

Tomar todas las precauciones necesarias al manipular las placas Petri, para evitar contaminarlas y modificar el estado inicial de nuestra muestra.



Llevar la placa al contador de colonias y determinar la cantidad de Escherichia coli.

   

Análisis : Agua de casa Lugar : Universidad Nacional del Callao, Laboratorio de Microbiología, Mesa N° 2 Fecha de Muestreo : 14/06/2016 Fecha de Ejecución : 14/06/2016 RESULTADOS OBTENIDOS Microorganismo Resultado(UFC/g) Lmp.(m) Apto para consumo Escherichia coli Coliformes totales

VI. 

3 ufc

0 ufc/ml

NO APTO

13 ufc

0 ufc/ml

NO APTO

CONCLUSIONES El número de colonias de Escherichia Coli en la muestra fue 3 ufc / ml y el número de colonias de Coliformes en la muestra fue 13 ufc.



Comparando los resultados con la norma 591-2008/MINSA se puede decir que nuestra muestra: agua potable de casa No es apto para el consumo humano ya que sobrepasa los límites de ESCHERICHIA COLI y COLIFORMES

VII.



RECOMENDACIONES

Desinfectar apropiadamente el área de trabajo, así como los instrumentos a usar



Usar todos los elementos de higiene como cofia, guantes y mascarillas



La precisión y el cuidado de no contaminar la muestra al momento de hacer la práctica de laboratorio

VIII.

BIBLIOGRAFIA



http://www.adiveter.com



Publicación de investigación de la revista Applied and Environmental Microbiology.



Prats, G. (Editor). 2001. Guia per a la prevenció i el control de la infección per Escherichia coli O157:H7 i altres Echerichia coli verotoxigenes. Barcelona: Direcció General de Salut Pública.



R.M N° 591-2008/MINSA.

CUESTIONARIO

1. ¿Cuáles son los microorganismos que se encuentran presentes en el agua para consumo humano? De los muchos microorganismos infecciosos que se encuentran en el medio ambiente, en el agua se pueden hallar bacterias (como Shigella, Escherichia coli, Vibrio y Salmonella), virus (como el virus Norwalk y rotavirus) y protozoos (como Entamoeba, Giardia y Cryptosporidium). Estos microorganismos pueden provocar síntomas como náuseas, vómitos, diarrea y calambres estomacales. En las personas adultas con un buen estado de salud, estas enfermedades suelen ser leves y duran poco tiempo. En bebés, niños, ancianos y personas con el sistema inmunológico deprimido, pueden revestir mayor gravedad. Debido a su resistencia a la desinfección, la Giardia y el Cryptosporidium son, en la actualidad, las causas más frecuentes de enfermedades transmitidas por el agua

2. ¿Cuáles son los análisis microbiológicos que se deben realizar de forma obligatoria para cumplir con las exigencias legales? Toda agua destinada para el consumo humano, como se indica en el Anexo I, debe estar exenta de: 1. Bacterias coliformes totales, termotolerantes y Escherichia coli, 2. Virus; 3. Huevos y larvas de helmintos, quistes y ooquistes de protozoarios patógenos; 4. Organismos de vida libre, como algas, protozoarios, copépedos, rotíferos y nemátodos en todos sus estadios evolutivos; y 5. Para el caso de Bacterias Heterotróficas menos de 500 UFC/ml a 35°C. Son parámetros de control obligatorio para todos los proveedores de agua, los siguientes: 1. Coliformes totales 2. Coliformes termotolerantes 3. Color 4. Turbiedad 5. Residual de desinfectante 6. pH.

En caso de resultar positiva la prueba de coliformes termotolerantes, el proveedor debe realizar el análisis de bacterias Escherichia coli, como prueba confirmativa de la contaminación fecal. Control por contaminación microbiológica Si en una muestra tomada en la red de distribución se detecta la presencia de bacterias totales y/o coliformes termotolerantes, el proveedor investigará inmediatamente las causas para adoptar las medidas correctivas, a fin de eliminar todo riesgo sanitario, y garantizar que el agua en ese punto tenga no menos de 0.5 mgL-1 de cloro residual libre. Complementariamente se debe recolectar muestras diarias en el punto donde se detectó el problema, hasta que por lo menos en dos muestras consecutivas no se presenten bacterias coliformes totales ni termotolerantes.