39602083 Atlas Interactivo de Pruebas Bioquimicas
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- Klaus Ramirez Suarez
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- Nitrito
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Universidad Nacional Autónoma de México Facultad de Estudios Superiores Zaragoza © 2004 Universidad Nacional Autónoma de México
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Universidad Nacional Autónoma de México
Facultad de Estudios Superiores Zaragoza
Q.F.B LUCÍA BAILÓN LIRA Q.F.B. ROBERTO C. GONZÁLEZ MELÉNDEZ M. en C. ARMANDO CERVANTES SANDOVAL
MEDIOS DE CULTIVO
TÉCNICAS DE INOCULACIÓN
Ingraham J.L.2000. .
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MEDIOS DE CULTIVO
Definición
Medios básicos Medios enriquecidos Pruebas bioquímicas
Medios selectivos diferenciales y de enriquecimiento
Medios especiales Por consistencia Por composición
Otras clasificaciones FINALIZAR
Tipos de asas
TÉCNICAS DE INOCULACIÓN
Medio líquido
Medio sólido
Inoculación en tubo
Medio semisólido
Inoculación en placa
Estría
Estría cruzada
FINALIZAR
Vaciado en placa
Estría simple
Estría en Z
Inoculación masiva
FERMENTACIÓN DE CARBOHIDRATOS
PRUEBA DE CITRATO
REDUCCIÓN DE LA LECHE CON AZUL DE METILENO
PRUEBA DE OXIDACIÓN Y FERMENTACIÓN (O/F)
LICUEFACCIÓN DE GELATINA
PRUEBA DE UREA
LECHE CON TORNASOL
REACCIÓN RMVP
REDUCCIÓN DE NITRATOS FINALIZAR
PRUEBA DE FENILALANINA
S I M
T S I
L I A
M I O
Un medio de cultivo es cualquier sustancia que pueda ser usada para el cultivo de microorganismos.
Los medios sirven para uno de dos propósitos principales: Fomentar el crecimiento microbiano en forma que puedan comprobarse las características de cultivo. Facilitar algunas reacciones bioquímicas que luego puedan ser demostrables por observación directa o bien indirectamente por la reacción en presencia de algunos reactivos adicionales. Todas las reacciones de cultivo así como las bioquímicas, dependen de la composición del medio y de la naturaleza del cultivo que se estudie. Los medios de cultivo se pueden clasificar en:
Koneman,1992
1. Medios básicos 2. Medios enriquecidos 3. Medios selectivos, diferenciales y de enriquecimiento 4. Medios especiales
FINALIZAR
Placas de agar soya tripticasa inoculado con una bacteria que produce un pigmento amarillo, importante característica diferencial para identificar bacilos gram negativos no fermentadores.
MENÚ
MEDIOS DE CULTIVO
Son aquellos medios que solo contienen algún extracto de carne u otra infusión simple, peptona, sal y agua. El extracto o la infusión de carne proporcionan al organismo los aminoácidos, vitaminas, sales, y pequeñas cantidades de carbono, nitrógeno, hidrógeno y otros elementos.
Las sales usualmente cloruro de sodio sirven para obtener isotonicidad requerida para el mantenimiento de presiones osmóticas constantes.
El agua sirve como disolvente, como medio de transporte o para ambos fines.
Los medios de cultivo que solo contienen extracto de carne, peptona, sal y agua, son líquidos; para el estudio de las características de las colonias es indispensable el uso de medios sólidos. La solidificación se consigue agregando agar, gelatina, albúmina de suero o de huevo, a los otros ingredientes.
Es preferible utilizar el agar, ya que es un medio sólido que no se desintegra por los medios físicos usados en el cultivo de la mayoría de los microorganismos. Ejemplos FINALIZAR
MEDIOS DE CULTIVO
Ejemplos de medios básicos 1.
Caldo nutritivo
2.
Agar nutritivo
3.
Caldo de triptona y soya
4.
Caldo de infusión de cerebro y corazón
5.
Agar de infusión de cerebro y corazón
6.
Caldo de infusión de corazón
7.
Agar y extracto de hígado
8.
Dextrosa de Saboraud
Koneman,1992
Agar EMB con crecimiento de E. coli, colonias de color verde birillante, las especies de Shigella no fermentan lactosa, por eso se ven translucidas.
Son aquellos medios básicos que han sido complementados con líquidos corporales, vitaminas específicas, aminoácidos, proteínas y otros nutrientes claramente definidos como tales. Ejemplos: Agar sangre Agar sangre chocolate Caldo de suero Agar con suero Suero de Loeffler con sangre Medios inclinados con suero Agar de Bordet Gengou Medio de Levinthal Agar de Mueller-Hinton Agar infusión de cerebro corazón Agar proteosa Hacer clic
Hemólisis FINALIZAR
MEDIOS DE CULTIVO
Los medios selectivos son usualmente medios de agar básico, o enriquecidos, a los cuales se les han agregado ciertos reactivos que impiden el crecimiento de la mayoría de las bacterias, permitiendo por lo tanto el aislamiento de unas cuantas seleccionadas en los especimenes que contengan grandes números de organismos indeseables. Los medios diferenciales son medios básicos o enriquecidos, a los cuales se les han agregado ciertos reactivos que reaccionarán con algunos tipos específicos de bacterias en cierta forma observable. Los medios de enriquecimiento son por lo general medios líquidos enriquecidos, que contienen algunas sustancias inhibidoras, con lo que se crea un medio ambiente especialmente favorable para límites más bien estrechos de bacterias. Ejemplos
FINALIZAR
MEDIOS DE CULTIVO
Ejemplos de medios selectivos, diferenciales y de enriquecimiento
Medio de Thayer Martin Agar con feniletanol Agar con sangre y bilis al 40% Agar con esculina y bilis Agar con sangre y telurito Medio de Tinsdale modificado Agar con Lowenstein Jensen en tubos inclinados Agar con citrato y desoxicolato Agar de sulfito de bismuto Caldo de selenito de sodio Agar XLD (xilosa, lactosa, desoxicolato)
Agar de Mac Conkey Agar Salmonella – Shigella Agar con eosina y azul de metileno (EMB) Agar de bilis y rojo de violeta Agar dextrosa y tripticaseina Agar entérico Hektoen Agar S-110 Agar tergitol 7 Agar verde brillante Agar Vogel Jhonson Agar Baird-Parker Agar sal y manitol Agar sangre con azida
Son los medios que no pueden ser fácilmente agrupados bajo alguno de los anteriores grupos. La mayoría de ellos serán medios empleados para comprobar una o más a características bioquímicas, lo cual facilita la clasificación, en este caso de las bacterias y hongos. Ejemplos: Pruebas bioquímicas
FINALIZAR
MEDIOS DE CULTIVO
Koneman,1992
Koneman,1992
1.
Medios sólidos. Son útiles para el crecimiento, aislamiento y obtención de cultivos puros de bacterias.
2.
Medios semisólidos. Útiles para la observación de metabolismo, así como la propagación y obtención de cultivos de bacterias anaeróbicas.
3.
Medios líquidos. Permiten la difusión del microorganismo. FINALIZAR
MEDIOS DE CULTIVO
Medios sintéticos Es aquel en el que se conoce la composición química exacta de los ingredientes.
Hacer clic Clasificación de reinos
Medio no sintético
No se conoce de una manera definida la composición precisa de alguna o de todas las sustancias nutritivas. Koneman,1992
FINALIZAR
MEDIOS DE CULTIVO
Por picadura en forma vertical Cuando se inocula agar semisólido en un tubo para pruebas de motilidad (aunque no sea la única prueba que se valora) es importante que el asa de inoculación sea retirada a lo largo del mismo camino que se usó para atravesar inicialmente el medio. Solo se pica el agar con un movimiento uniforme y recto y para ello se utiliza el asa recta. Documento electrónico FINALIZAR
TÉCNICAS DE INOCULACIÓN
Hacer clic
Difusión
Los medios líquidos se inoculan como en el método ilustrado; el tubo debe inclinarse aproximadamente 30°, con un asa de inoculación se toca la superficie interna del vidrio, exactamente por encima del punto donde la superficie del medio forma un ángulo agudo. Se debe utilizar el asa con arillo. Posteriormente se vuelve a colocar el tubo en posición erecta, el área de inoculación queda sumergida en el medio. Agitar suavemente cada tubo. No dejar que el líquido salpique la tapa del tubo. Sí se inocula una batería con una misma especie de bacteria no hay necesidad de pasar por la llama entre cada inoculación. Cuando se utiliza una aguja o asa para inocular una batería con un solo inóculo, el traspaso de azúcares de un tubo a otro es tan infinito que no hay problema de que un tubo contenga una mezcla de carbohidratos. Sí se inocula una batería no es necesario observar en forma apreciable el inóculo en cada uno de los tubos. Un solo inóculo espeso tomado de cultivo contiene millones de bacterias que son suficientes para inocular cada tubo con un número apreciable de bacterias necesarias para que se produzca el metabolismo.
FINALIZAR
TÉCNICAS DE INOCULACIÓN
Documento electrónico Hacer clic
Pico de flauta o cola de pescado (en tubo) a) Por punción (picadura) b) Por estría c) Por punción y estría
b)
Los picos de flauta (planos inclinados) de agar se inoculan de la siguiente forma: primero se atraviesa todo el fondo del agar con el asa recta de inoculación, esto cuando sea necesario ya que no todos los medios lo requieren, posteriormente éste se retira con un movimiento en “S” a través del agar, con lo que se disemina el inóculo. Se utiliza el asa recta.
a)
c)
Documento electrónico
FINALIZAR
TÉCNICAS DE INOCULACIÓN
Hacer clic
FINALIZAR
TÉCNICAS DE INOCULACIÓN
Hacer clic Documento electrónico
Estría simple
Estría en Z
Inoculación masiva Documento electrónico FINALIZAR
TÉCNICAS DE INOCULACIÓN
Hacer clic
MUESTRA POR SER CONTADA
9 ml DE SOLUCIÓN. SALINA
COLONIAS
AGAR FUNDIDO VERTIDO EN PLACA
COLONIAS AISLADAS
Ingraham L.J. 2000, modificado
FINALIZAR
TÉCNICAS DE INOCULACIÓN
Hacer clic Vaciado en placa
Asa en arillo
Asa recta
Hisopo FINALIZAR
TÉCNICAS DE INOCULACIÓN
Documento electrónico Hacer clic
Condiciones de incubación
Medio de cultivo Fundamento
Inoculación
Consistencia del medio
Aplicaciones Reporte de resultados
Interpretación Resultados ATLAS
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
a) b) c) d) e)
Medio de cultivo: Caldo básico rojo de fenol y carbohidratos. Composición: Peptona Extracto de carne Cloruro de sodio Agua destilada Indicador de pH: Rojo de fenol Ácido: Color amarillo (pH = 6.8) Alcalino : Color rojo ( pH = 8.4) Medio no inoculado: Rojo (pH = 7.4)
Tinción de Gram: Micrococcus sp
Se pueden utilizar los siguientes carbohidratos: glucosa, manitol, inulina, lactosa, inositol, sacarosa, salicina y rafinosa, principalmente. FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS MENÚ
Esta prueba determina la capacidad de un organismo de fermentar (degradar) un carbohidrato específico incorporado a un medio básico. La fermentación es un proceso metabólico de oxido-reducción que ocurre en un medio ambiente anaerobio y, en lugar de oxígeno, un sustrato orgánico sirve como el aceptor final de hidrógeno (electrones). En los sistemas de prueba bacteriológicos, este proceso se detecta observando cambios de color en indicadores de pH a medida que se forman productos ácidos. Las bacterias que fermentan un hidrato de carbono son por lo general anaerobios facultativos. Por medio del proceso de fermentación un carbohidrato es degradado y descompuesto en dos moléculas de carbono (triosas) que son nuevamente degradadas en un número de compuestos de 1,2,3 y 4 carbonos. Los productos finales varían con cada especie bacteriana y depende del sistema enzimático existente en la especie y las condiciones del medio ambiente. El más importante ciclo fermentativo de la degradación de la glucosa es el ciclo de Embden - Meyerhof aun cuando éste también puede producirse por la derivación de pentosa o el ciclo de Entner - Duodoroff. Pueden utilizarse diversos hidratos de carbono.
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS MENÚ
Utilizando un indicador de pH con un determinado carbohidrato puede determinarse si una bacteria ha degradado el mismo en varios productos terminales, observando un cambio de color visible en el medio.
bacteria Indicador de pH + CHO
glucólisis
FINALIZAR
H2CO2 (aldehídos) + cambio de color
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Consistencia del medio Líquido
Condiciones de incubación Tiempo: 24 - 48 horas Temperatura: 35 - 37° C
Inoculación Por difusión, inóculo denso
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Interpretación Positiva = Color amarillo (ácido) Negativa = Color rosa – rojizo (alcalina) Color anaranjado
Reporte de resultados Koneman,1992
Agar XLD con crecimiento de E. coli a las 24 horas. El aspecto amarillo alrededor de las colonias indica utilización de lactosa y sacarosa, por que se ha producido una caida suficiente del pH por debajo del punto decisivo del indicador rojo de fenol.
A = ácido K = alcalino G = gas
Identificación de Staphylococcus
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS MENÚ
Hacer clic
MEDIO NO INOCULADO
POSITIVO FINALIZAR
NEGATIVO
NEGATIVO PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Microorganismos Fermentadores de Carbohidratos:
Fermentadores de glucosa: Todos los miembros de las Enterobacteriaceae. Fermentadores de glucosa y lactosa: Escherichia coli, Klebsiella y grupos
Ingraham L.J. 2000
Enterobacter.
de manitol: Staphylococcus aureus Fermentadores de inositiol: Proteus rettgeri Fermentadores de lactosa: Neisseria lactamica Fermentadores de adonitol: Providencia alcalifaciens Fermentadores de inulina: Streptococcus salivarius y Streptococcus sanguis Fermentadores de sacarosa: Yersinia enterocolitica Fermentadores de salicina: Listeria monocytogenes Fermentadores
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
Yersinia enterocolitica. American Museum of Natural History, 1998.
MENÚ
Microorganismos no Fermentadores de Carbohidratos:
No fermentadores de lactosa: Enterobacterias patógenas como Salmonella y Shigella. No fermentadores de manitol: Staphylococcus
No fermentadores de salicina: Especies de
Escherichia coli vista en microscopio electrónico
epidermidis
Corynebacterium No fermentadores de rafinosa: Otras especies de Aeromonas No fermentadores de inositol: P roteus morganii No fermentadores de adonitol: Providencia stuartii No fermentadores de inulina: Streptococcus del grupo D No fermentadores de sacarosa: Otras especies de
Yersinia
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Condiciones de incubación
Medio de cultivo
Fundamento
Inoculación
Consistencia del medio
Interpretación
Reporte de resultados
Aplicaciones
Resultados ATLAS
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
Determina si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como única fuente de carbono para el metabolismo y crecimiento, provocando alcalinidad. El medio incluye citrato de sodio un anión como única fuente de carbono, y fosfato de amonio como única fuente de nitrógeno. Normalmente el metabolismo del citrato comprende una condensación de acetilo con la coenzima A y oxalacetato para entrar en el ciclo de Krebs. El desdoblamiento del citrato comprende un sistema enzimático sin la intervención de la coenzima A. Esta enzima se denomina citritasa o citrato desmolasa. El oxalacetato y el acetato son intermediarios en el metabolismo del citrato.
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Los productos obtenidos del metabolismo del citrato dependen del pH del medio: pH básico: Citrato CO2 + ácido fórmico + 2 ácido acético
pH ácido: 2 Piruvato 2 Piruvato
acetato + CO2 + lactato acetoína + 2CO2
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Medio de cultivo: Citrato de Simmons Composición: a) Sulfato de magnesio b) Monofosfato de amonio c) Fosfato dipotásico d) Citrato de sodio e) Cloruro de sodio f) Agar g) Agua destilada h) Indicador de pH: Azul de bromotimol (pH = 6) Alcalino : color azul de Prusia intenso (pH = 7.6) Medio no inoculado: Color verde (pH = 6.9) Ingraham L.J. 2000
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Consistencia del medio Sólido inclinado (pico de flauta)
Inoculación Se inocula como una estría única en la superficie del pico de flauta.
Black, 1996 Pseudomona sp, (8100x)
Incubación Tiempo = 24 - 48 horas Temperatura = 35 - 37° C
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Interpretación Hacer clic
Características de Corynebacterium diphteriae
Positivo : Crecimiento aunque no exista cambio de color. Crecimiento y el medio de color azul intenso en pico de flauta. Negativo : No se observa crecimiento y medio de color verde. Si se utiliza carbono a partir de citrato de sodio, también se extrae nitrógeno del fosfato de amonio contenido en el medio, liberándose amoniaco. En ocasiones se detecta un crecimiento visible a lo largo de la línea de siembra antes de la aparición de color. Este crecimiento visible también indica resultado positivo.
Reporte de resultados
Ingraham L.J. 2000
Negativo Positivo
FINALIZAR
(-) (+)
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
NEGATIVO
MEDIO NO INOCULADO
POSITIVO POSITIVO
POSITIVO FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Microorganismos positivos
Especies de :
Microorganismos negativos
Salmonella Arizona Citrobacter Enterobacter Klebsiella Serratia licuefaciens Pseudomonas cepacia
Edwarsiella Yersinia enterocolitica Escherichia coli Shigella Yersinia pseudotuberculosis Otras especies de
Moraxella Proteus morganii Black J.G. 1996
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Condiciones de incubación
Medio de cultivo
Fundamento
Inoculación
Consistencia del medio
Interpretación
Reporte de resultados
Aplicaciones
Resultados ATLAS
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
Medio de cultivo : Gelatina nutritiva Composición: a)Extracto de carne b)Peptona c) Gelatina d)Agua destilada Streptococcus sp.
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Determinar la capacidad de un organismo de producir enzimas de tipo proteolítico (gelatinasas) que licuan la gelatina. Las proteínas que se producen naturalmente son demasiado grandes para entrar en una célula bacteriana; por lo tanto, para que una célula utilice las proteínas, primero debe ser catabolizada en componentes más pequeños. Las enzimas exonucleares de tipo protelítico, gelatinasas, son secretadas por ciertas bacterias para desdoblar a las proteínas y esta capacidad ayuda a la identificación bacteriana. gelatinasas
Proteína + H2O
polipéptidos proteasas
gelatinasas Polipéptidos + H2O
aminoácidos individuales peptidasas
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Consistencia del medio Semisólido
Black J.G. 1996
Colonias de Serratia marcescens en agar EMB, produciendo pigmento
Inoculación Picadura en posición vertical hasta una profundidad de 2 - 2.5 cm, inóculo denso.
Condiciones de incubación
Tiempo: 18 - 24 horas Temperatura : 35 - 37° C
Al termino de la incubación se coloca el tubo en un refrigerador o baño de hielo durante dos horas para determinar si se ha producido o no la digestión de la gelatina (licuefacción). Pseudomona aeruginosa University of Missouri-Columbia, 1998: http://www.missouri.edu/~mmiwww/slides.htm
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Interpretación
Hacer clic
Positivo : Medio licuado (estado líquido)
Identificación de Staphylococcus
Negativo : Medio sólido El medio de gelatina nutritiva para punción no es conveniente para las pruebas de rutina de la actividad de la gelatinasa, dado que muchas especies requieren una incubación prolongada antes de que aparezcan muestras de licuefacción. En los métodos diagnósticos de rutina para identificar bacterias, la duración de la incubación deberá alcanzar un período razonable.
Reporte de resultados Positivo
(+)
Negativo
(-)
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
MEDIO NO INOCULADO
NEGATIVO
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
POSITIVO
MENÚ
Microorganismos positivos
Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis (lenta) Serratia liquefaciens Serratia marcescens Pseudomona aeruginosa (rápida) Especies de Flavobacterium
Microorganismos negativos
Listeria monocytogenes
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Condiciones de incubación
Medio de cultivo
Fundamento
Inoculación
Consistencia del medio
Reporte de resultados
Interpretación
Aplicaciones
Resultados ATLAS
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
Medio de cultivo: Medio de leche tornasolada Composición:
1.
2. 3.
Leche descremada Agua destilada Indicador de pH: Tornasol Ácido : Color rojo (pH = 4.5) Alcalino : Color azul ( pH = 8.3) Medio no inoculado: Azul purpúreo (pH = 6. 8)
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
Clostridium perfringens, tinción de Gram.
MENÚ
Permite diferenciar organismos sobre la base de sus múltiples reacciones metabólicas en un medio lácteo como: fermentación de lactosa, caseólisis, y coagulación de la caseína. El tornasol incorporado a la leche es un indicador de pH y de oxidación-reducción que hace que el medio pueda indicar diversas funciones metabólicas. La leche contiene lactosa, caseína, lactoalbúmina y lactoglobulina, por lo tanto, un organismo puede mostrar una o varias propiedades metabólicas en la leche tornasolada ayudando así a la identificación bacteriana:
1. 2. 3. 4. 5.
Fermentación de lactosa Reducción del tornasol Formación de coágulo Peptonización (digestión) Formación de gas
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Fermentación de lactosa
Cuando un organismo es capaz de fermentar lactosa, produce principalmente ácido láctico, con una condición ácida indicada por el cambio de color del medio que se vuelve rojo rosado. A veces el ácido butírico es el producto final. Ciertas bacterias que forman álcalis no fermentan lactosa, pero actúan sobre las sustancias nitrogenadas que se encuentran en la leche liberando amoniaco, y dando en consecuencia un pH alcalino que se manifiesta por un color púrpura azulado. Lactosa
Glucosa
glucosa + galactosa
ácido pirúvico
ácido láctico ácido butírico CO2 + H2
Reducción del tornasol
El tornasol es un indicador de pH y un indicador de oxidación reducción; algunos organismos son capaces de reducir el tornasol a una leucobase. FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS MENÚ
Formación de coágulo
Las enzimas proteolíticas provocan la hidrólisis de las proteínas de la leche lo que resulta en su coagulación. La principal enzima responsable de la formación de coágulo es la renina. La formación del coágulo es causada por la precipitación de la caseína, por la formación de ácidos o por la conversión de la caseína en paracaseína por la enzima renina. La caseína es una fosfoproteína compleja y es la proteína más importante de la leche.
Formación de un coágulo ácido La precipitación de la caseína provocada por los ácidos orgánicos a partir de lactosa en condiciones ácidas produce un coágulo firme, gelatinoso que no se separa de las paredes del tubo. caseasa Lactosa ácido Láctico + caseínato de Ca caseinógeno (pp)
Otra forma de coágulo es el coajo, o sea el proceso de coajado de la leche por la conversión de la caseína en paracaseína por las enzimas renina, pepsina o quimiotripsina contenidas en la leche. La renina provoca el coajado de la leche convirtiendo la sal de caseína soluble en una paracaseína insoluble que es el cuajo o requesón. renina Caseína paracaseína (pp) Ca
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Peptonización (digestión) La hidrólisis de la caseína por la actividad enzimática produce una conversión final del precipitado caseinógeno en un líquido claro; el proceso se denomina peptonización y se manifiesta por una aclaración acuosa del medio causada por una digestión del precipitado (coágulo) y las proteínas de la leche por las enzimas proteolíticas de las bacterias. Sin embargo, solo se produce una peptonización cuando la bacteria que se desarrolla en la leche tornasolada contiene la enzima proteolítica caseinasa.
Formación de gas Los gases CO2 y H2 se forman como resultado final de la fermentación de la lactosa.
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Consistencia del medio
Líquido
Inoculación
Difusión
Condiciones de incubación
Tiempo : 24 - 48 horas Ingraham L.J. 2000
Temperatura : 35 - 37° C
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Hacer clic
Rojo rosado: Ácido; fermentación de lactosa
Azul purpúreo: No fermentación de lactosa; sin cambio del indicador de pH.
Diferencición de especies de Streptococcus
Azul : Alcalino; Ausencia fermentación de lactosa. El organismo ataca las sustancias nitrogenadas que se encuentran en el medio.
Blanco : Reducción del tornasol a una leucobase.
Formación de coágulo : Coagulación de la proteína de la leche.
Aclaración del medio : Digestión; se ha ingerido la proteína de la leche.
Gas : Producción de burbujas en la campana de Durham.
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS MENÚ
En la tabla de resultados solo se escribirán las letras que aparecen dentro del paréntesis.
Rojo rosado (A) Azul purpúreo (SC) Azul ( K) Blanco (Red) Coágulo (C) Digestión (D) Gas (G)
FINALIZAR
Encarta 2002
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
NO FERMENTACIÓN DE LACTOSA
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS MENÚ
REDUCCIÓN DE TORNASOL
COÁGULO
DIGESTIÓN
FERMENTACIÓN DE LACTOSA
MEDIO NO INOCULADO
Ayuda a la diferenciación de especies sobre todo del género
Clostridium.
Sin crecimiento:
Clostridium choleraerium Clostridium difficile Clostridium putrefaciens Clostridium tetanomorphum Streptococcus equinus
Con crecimiento:
Streptococcus bovis FINALIZAR
Características de especies de Bacillus y Clostridium Hacer clic
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Condiciones de incubación
Medio de cultivo
Fundamento
Inoculación
Consistencia del medio
Reporte de resultados
Interpretación
Aplicaciones
Resultados ATLAS
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
Medio de cultivo: Medio de leche Composición:
1.
2. 3.
Leche descremada deshidratada Agua destilada Indicador : Azul de metileno Incoloro : Estado reducido Azul : Estado oxidado ; medio no inoculado (pH= 6.4)
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Diferencía organismos por su capacidad de reducir el azul de metileno en un medio con leche. El sistema citocromo oxidasa activa la oxidación del citocromo reducido por el oxígeno molecular que a su vez actúa como un aceptor de electrones en el periodo terminal del sistema de transferencia de electrones. Cuando existen condiciones aeróbicas el oxígeno es el aceptor final del hidrógeno, produciendo agua o peróxido de hidrógeno según la especie bacteriana y su sistema enzimático. Los sustratos artificiales como el azul de metileno, pueden sustituir a los aceptores de electrones naturales en cualquier lugar de la cadena de transporte de electrones, donde actúan como reductores del sistema citocromo. Cuando se agrega el colorante sintético reducible, azul de metileno a un medio que contenga organismos metabolizantes, los electrones producidos por un sustrato oxidable son desplazados de su ciclo normal, si se produce reductasa y son utilizados para reducir el colorante. Cuando se agrega el colorante a un medio con organismos metabolizantes, los electrones producidos por un sustrato oxidable son desplazados de su ciclo normal, si se produce reductasa y son utilizados para reducir el colorante. Anaerobicamente la forma oxidada del color azul es reducida por un organismo a un compuesto incoloro, hidrogenado, leuco-azul de metileno.
FINALIZAR Custom Medical Stock, 1999.
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
N
El azul de metileno, sal básica, es un indicador de la oxidación reducción que cuando es incorporado a un medio, indica los cambios en el potencial de oxidación-reducción producidos por un organismo. Algunos organismos, utilizando el oxígeno disuelto en un medio, son capaces de reducir el potencial redox, la reducción es catalizada por la enzima reductasa, enzima respiratoria vinculada con la oxidación celular. Diferenciación de especies de Streptococcus
(CH3)2N
Azul de metileno (estado oxidado color azul) Reductasa H N
N(CH3)2
(CH3)2N S Leuco-azul de metileno (estado reducido, incoloro)
Hacer clic FINALIZAR
N(CH3)2
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Consistencia del medio Líquido
Inoculación Difusión, inóculo denso
Black J.G. 1996
Enterococcus feacalis, fisión binaria.
Condiciones de incubación Tiempo: 18 - 24 horas
Black J.G. 1996
Beta hemólisis
FINALIZAR
Temperatura : 35- 37° C PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
MEDIO NO INOCULADO
NEGATIVO
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
POSITIVO
MENÚ
Interpretación Positiva : Incoloro; reducción
Negativa : Azul; no hay reducción
Ingraham L.J. 2000
Streptococcus sp, tinción de Gram
Reporte de resultados R = Reducción (-) = Negativo, sin cambio de color
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Hacer clic Características bioquímicas de especies de Streptococcus
Esta capacidad enzimática se utiliza fundamentalmente para diferenciar los enterococos (especies de Streptococcus del grupo D) de otros miembros del género Streptococcus.
Microorganismos positivos
Enterococos (Streptococcus del grupo D)
Microorganismos negativos
Especies de Streptococcus que por lo general no son Enterococos. La oxidación del azul de metileno reducido produce peróxido de hidrógeno como su producto final. La mayoría de las bacterias contienen la enzima catalasa, que degrada el peróxido de hidrógeno, dado que su acumulación es tóxica. Sin embargo, las especies de Estreptococos no producen catalasa y por lo tanto mueren. Los Enterococos del grupo D si producen catalasa sobreviviendo al medio.
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Condiciones de incubación
Medio de cultivo
Fundamento
Inoculación
Consistencia del medio
Reporte de resultados
Interpretación
Aplicaciones
Resultados ATLAS
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
Medio de cultivo : Medio básico de Hugh Leifson, medio OF Composición: 1.
2. 3. 4. 5. 6. 7.
Peptona Cloruro de sodio Fosfato de potasio Hidratos de carbono ( glucosa, lactosa, sacarosa, maltosa ) Agar Agua destilada Indicador de pH : Azul de bromotimol Ácido : Color amarillo (pH = 6) Alcalino : Azul de Prusia intenso (pH = 7.6) Medio no inoculado : Verde (pH = 7.1)
Se deben tener dos tubos para esta prueba uno abierto y otro con sello de parafina.
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Consistencia del medio Semisólido (también permite la observación de movilidad).
Inoculación Picadura, inóculo poco denso. Picar ambos tubos aproximadamente hasta 0.6 mm de fondo.
Condiciones de incubación Tiempo : 18 - 24 horas Temperatura : 35 - 37° C
Aislamiento de bacterias en heces Hacer clic
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Amarillo: ácido Burbujas : Gas Verde : alcalino
Incubación
Oxidativo
Fermentador
No oxidativo
No fermentador
FINALIZAR
No fermentador
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
METABOLISMO
TUBO CON REACCIÓN
TUBO SIN SELLO
TUBO CON SELLO
Oxidación (O)
Abierto
Amarillo (A)
Verde (-)
Fermentación (F)
Cubierto
Amarillo (A)
Amarillo (A)
Fermentación (F)
Cubierto
Amarillo (AG)
Amarillo (AG)
Ni fermentación ni oxidación (-)
Ninguno
Azul o verde (-)
Verde (-)
Fermentación y oxidación (O+F)
Ambos
Amarillo (A ó AG)
Amarillo (A ó AG)
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
MEDIO NO INOCULADO
OXIDATIVO NO FERMENTADOR
FERMENTADOR
NO OXIDATIVO NO FERMENTADOR
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
1.Fundamentalmente para diferenciar géneros intestinales no entéricos, gram negativos de las Enterobacterias. 2. Ayuda a la diferenciación entre los géneros de la familia Micrococcaceae.
Micrococcus oxida glucosa Staphylococcus fermentan glucosa. 3. Ayuda a Enterobacterias
la
identificación
de
Fermentadoras de glucosa: Escherichia
Oxidativas de glucosa: Pseudomonas
coli
aeruginosa No sacarolítico: Especies de Moraxella
Características de la Familia Micrococcacea Hacer clic FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ World Book, 1991
Condiciones de incubación
Medio de cultivo
Fundamento
Inoculación
Consistencia del medio
Reporte de resultados
Interpretación
Aplicaciones
Resultados ATLAS
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
Medio de cultivo: Agar urea de Christensen Composición:
a) Peptona b) Cloruro de sodio c) Fosfato monopotásico d) Glucosa e) Urea f) Agar g) Agua destilada h) Indicador de pH : Rojo de fenol Ácido: Amarillo (pH = 6.8) Alcalino : Rojo rosado (pH = 8.4) Medio no inoculado : Amarillo (pH = 6.8)
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Determina la capacidad de un organismo de desdoblar la urea formando dos moléculas de amoniaco por la acción de la enzima ureasa produciendo un cambio de color rojo en el medio. La ureasa es una importante enzima microbiana vinculada con la descomposición de los compuestos orgánicos.
H2 N
C=O
+
NH3 (NH4)2CO2 H2 N
2 HOH
CO2 + H2O + 2 Carbonato de amonio
urea
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PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Consistencia del medio Sólido en pico de flauta (cola de pescado)
Inoculación Estría en pico de flauta (no hacer punción).
Koneman,1992
Cultivo mixto de crecimiento de 24 horas en agar sangre de colonias no pigmentadas, mucoides y relativamente grandes de Klebsiella, en comparación de las colonias amarillas más pequeñas de S. aureus.
Condiciones de incubación Tiempo : 18 - 24 horas Temperatura : 35 - 37° C Efecto swarming producido por Proteus vulgaris
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
MEDIO NO INOCULADO
NEGATIVO
POSITIVO
POSITIVO
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Interpretación
Positivo : Rojo rosado intenso en el pico de flauta Negativo: Amarillo
Reporte de resultados
Positivo (+) Negativo (-)
Black J.G. 1996
OBSERVACIONES En muchas especies, la reacción positiva de ureasa se detecta primero por un cambio de color rojo en la parte de pico de flauta, el cual, al principio se vuelve rojo porque la acción alcalina, resultado de la degradación de pequeñas cantidades de urea, es aumentada por las aminas formadas a partir de la descarboxilación oxidativa de los aminoácidos en la parte del medio expuesta al aire.
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PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Se usa para diferenciar los organismos Proteus rápidamente ureasa positivos de otros miembros de las Enterobacterias, otros géneros pueden ser positivos retardados.
Klebsiella sp (+) Escherichia coli (-) Proteus sp (+ rápido) Providencia sp (-) Koneman,1992
Placa de agar sangre que indica un patrón de swarming como ondas de una cepa móvil de Proteus.
Pruebas para la identificación de Enterobacterias Hacer clic
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PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Fundamento
Inoculación
Medio de cultivo Interpretación Consistencia del medio
Reporte de resultados Aplicaciones
Reactivos adicionales
Resultados Condiciones de incubación
ATLAS
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
Medio de cultivo : Medio de Clark y Lubs (caldo RM/VP) Composición: 1. 2.
3. 4. 5.
Polipeptona Dextrosa Fosfato de potasio Agua destilada Indicador: rojo de metilo pH inicial = 6.9, medio no inoculado, color rojo. Ácido: rojo (pH = 4.4) Alcalino: amarillo (pH = 6)
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PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Permite comprobar la capacidad de un organismo de producir y mantener estables los productos terminales ácidos de la fermentación de la glucosa y vencer la capacidad amortiguadora del sistema. Es una prueba cualitativa de la producción de ácido (determinación de pH). Las bacterias que principalmente siguen la vía de fermentación de ácidos mixtos a menudo producen suficiente ácido para mantener un pH menor de 4.4. La prueba de rojo de metilo se basa en el empleo de un indicador de pH para determinar la concentración de iones hidrógeno presentes cuando un organismo fermenta glucosa. Las bacterias RM positivas producen ácidos estables manteniendo una alta concentración de iones hidrógeno hasta alcanzar cierta concentración y entonces cesa toda actividad. Los organismos RM negativo también producen ácidos pero tienen una menor concentración de iones hidrógeno porque hay una reversión hacia la neutralidad debida a la nueva degradación de los ácidos orgánicos en carbonatos. La validez de la prueba de RM depende de un tiempo de incubación suficiente como para permitir que se produzca la diferencia en el metabolismo de la glucosa. Los organismos en estudio se incubarán por lo menos 2 días, lo que permite que todos los organismos con baja proporción gaseosa muestren su límite en la concentración de iones hidrógeno.
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PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Determina la capacidad de algunos organismos de producir un producto final neutro, la acetoína a partir de la fermentación de glucosa.
La reacción de VP se basa en la detección de acetoína como producto final neutro derivado del metabolismo de la glucosa. Esta es metabolizada en ácido pirúvico, intermediario clave en la glucólisis. A partir del ácido pirúvico, una bacteria puede seguir muchas vías. La producción de acetoína (precursor de la producción de 2,3-butanediol) es uno de los ciclos para la degradación de la glucosa en las bacterias. La formación de acetoína y butilenglicol es una vía alternativa del metabolismo del ácido pirúvico. Las bacterias que utilizan esta vía producen solo pequeñas cantidades de ácidos mixtos que son insuficientes para disminuir el pH del medio de rojo de metilo, lo bastante como para producir un cambio de color. Por este motivo muchas de las especies de Enterobacterias son VP positivas, con pocas excepciones son RM negativas y viceversa.
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
El primer reactivo agregado a una alícuota incubada es el catalizador alfa-naftol porque este actúa como intensificador del color, lo que aumenta la sensibilidad de la reacción sin pérdida de su especificidad. El segundo reactivo es el KOH que cuando se agrega al medio de VP contribuye a la absorción de CO2. No debe excederse de un volumen exacto. El KOH reaccionará con la peptona dando un color rosado salmón y con el agregado posterior de alfa-naftol no habrá alteración del color. El hidróxido de potasio actúa como agente oxidante para apresurar la oxidación de la acetoina en diacetilo. El diacetilo es la sustancia reactiva activa por ello esta prueba se basa en la reacción entre el diacetilo y el núcleo guanina presente en la peptona, en condiciones alcalinas. Por lo tanto cuando se mezclan cantidades correctas de diacetilo, la peptona y el alfa-naftol, se produce casi instantáneamente un color rojo en la superficie del medio. La velocidad de desarrollo de color depende del volumen de acetoína que se encuentra en el cultivo de prueba.
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
OH
CH3
CH3
KOH +
C
O
C
O
C
O
O2 OXIDADO CHOH
Alfa-naftol (catalizador) CH2
CH2
Diacetilo
Acetoína
+ NH2
Color rojo rosado
condensación NH
C NH
R
Núcleo de guanidina
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Consistencia del medio
Líquido
Inoculación
Difusión
Condiciones de incubación
Tiempo : 24 - 48 horas Temperatura: 35 - 37° C
Salmonella typhi, tinción de flagelos, observada en microscópio electrónico
Coprocultivo Hacer clic
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Reactivos adicionales para Rojo de Metilo
Rojo de metilo. Adicionar 5 gotas al tubo previamente incubado. Interpretar el resultado del color inmediatamente. Conservación: Guardar el reactivo en refrigeración (4° C) mientras no se usa. Reactivos adicionales para Voges Proskauer Alfa naftol al 5%, intensificador del color Hidróxido de potasio 40%, agente oxidante
Agregar directamente los reactivos al tubo después de la incubación en el siguiente orden : 1) 0.6 ml de alfa naftol 2) 0.2 ml de KOH 3) Agitar el tubo suavemente, dejar reposar de 10 a 15 minutos antes de la interpretación. PRECAUCIONES El orden de adición de los reactivos es importante, ya que la inversión de incorporación dará como resultado un débil positivo o falso negativo. No debe excederse un volumen exacto de KOH ya que el exceso puede ocultar una reacción VP débilmente positiva. FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
MEDIO NO INOCULADO
POSITIVO
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
NEGATIVO
MENÚ
Reacción de rojo de metilo
No debe intentarse interpretar un resultado con el rojo de metilo después de menos de 48 horas de incubación.
Positivo: Rojo rosado en la superficie del medio (presencia de acetoína) Negativo : Amarillo. Puede formarse un color cobrizo pero aún así la reacción es negativa.
Positiva: Rojo en la superficie del medio (pH = 4.4) Algunas bacterias pueden producir menores cantidades de ácido a partir del sustrato por ello es posible que aparezca un color naranja. Esto indica una prueba positiva. Negativo : Amarillo (pH = 6) ó naranja
FINALIZAR
Reacción de VogesProskauer
Reporte de resultados (ambas reacciones) Positivo (+) Negativo (-)
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Prueba de rojo de metilo Microorganismos positivos
Microorganismos positivos
Escherichia coli Especies de Yersinia
Microorganismos negativos
Pruebade Voges Proskauer Klebsiella pneunoniae Yersinia enterocolitica
Microorganismos negativos
Enterobacter aerogenes Enterobacter cloacae Klebsiella
Escherichia coli K. ozaenae
Urocultivo Hacer clic
Encarta, 2002
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Fundamento
Inoculación
Medio de cultivo Interpretación Consistencia del medio
Reporte de resultados Aplicaciones
Reactivos adicionales
Resultados Condiciones de incubación
ATLAS
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
Medio de cultivo: Caldo con nitrato Composición:
Extracto de carne Peptona Nitrato de potasio Agar Agua destilada pH inicial = 7.0
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Determina la capacidad de un organismo de reducir el nitrato en nitritos o en nitrógeno libre. La reducción de nitrato en nitrito y en gas nitrógeno tiene lugar generalmente en condiciones anaeróbias, en las cuales un organismo obtiene su oxígeno del nitrato. El oxigeno sirve como un aceptor de hidrógeno. Esta respiración anaerobica es un proceso de oxidación por el cual las sustancias inorgánicas, especialmente nitrato y sulfato o raramente hidratos de carbono proporcionan oxígeno para que sirva como aceptor de electrones para suministrar energía. Reducción del nitrato en nitrito NO3 + 2 e + 2 H Nitrato
+
NO2
Nitrato en nitrógeno molecular 2 NO3 + 10 e + 12 H+
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
+ H2O Nitrito N2 + 6 H2 O
MENÚ
La reducción de nitrato en nitrito está indicada por la aparición de color cuando el nitrito reacciona con los dos reactivos. La reacción de color resultante se debe a la formación de un compuesto diazoico, p-sulfobenceno-azo-alfa-naftilamina. El enlace del grupo azo –N=N- da como resultado un compuesto coloreado por medio de una reacción nitrosa. El colorante diazoico se forma por acoplamiento a través del enlace azo de una amina aromática con un compuesto de tipo fenólico por lo general en la posición para de un grupo (OH) o amino. La reducción de la sal diazóica por el agente reductor polvo de zinc, en presencia del ácido acético produce un compuesto coloreado, la arilhidracina.
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
N
NH2
N
+ HNO2
SO2H
Ácido sulfanilico
NH2
Alfa-naftilamina
P-sulfobenceno-azo-affanaftilamina (rojo)
(incoloro)
N
NH2
SO2H
N
Zn
+
CH2COOH
(C6H3NHNH3) – OSO3H Arilhidracina
Ácido acético
SO2H
NH2
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Hacer clic Características de Bacterias Gramnegativas no fermentadoras
Consistencia del medio Líquido
Inoculación
Difusión, inóculo denso.
Condiciones de incubación
Tiempo: 18 - 24 horas Temperatura 35 - 37 ° C
Crecimiento de Salmonella thypi en agar sangre, observese la producción de H2S (colonias de color negro).
FINALIZAR
Raramente es necesaria una incubación prolongada de hasta 5 días. La mayoría de los organismos capaces de reducir el nitrato, lo hacen dentro de las primeras 24 horas.
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
1. Alfa - naftilamina 0.05% 2. Ácido sulfanílico 0.8 %
Adicionar directamente al tubo de reacción en el siguiente orden:
1. Alfa - naftilamina 1ml. 2. Ácido sulfanílico 1 ml. Conservación: Guardar ambos reactivos en el refrigerador mientras no se usan. Por lo general se mantienen estables durante tres meses.
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Interpretación
Se interpretan los resultados un minuto después de adicionar los reactivos. Positivo: intenso
Rosado
a
rojo
Reporte de resultados Positivo (+) Negativo (-)
Negativo: Amarillo PRECAUCIONES Una prueba negativa indica que los nitratos, no han sido reducidos o que han sido reducidos a otros productos, como amoniaco, nitrógeno molecular, oxido nítrico u óxido nitroso e hidroxilo. Dado que los reactivos de prueba detectan solo nitritos, este último proceso llevaría a una lectura falso – negativa. Por ende es necesario agregar una pequeña cantidad de polvo de zinc a todas las reacciones negativas. Los iones zinc reducen nitratos a nitritos y la aparición de color rojo después del agregado de zinc indica una reacción positiva.
FINALIZAR
Koneman,1992
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Aplicaciones Ayuda a la identificación de Enterobacterias que por lo general son positivas. Todas las Enterobacterias, con excepción de ciertos tipos de Enterobacter agglomerans y especies de Erwinia, reducen nitratos a nitritos.
MEDIO NO INOCULADO POSITIVO
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
NEGATIVO
Fundamento
Inoculación
Medio de cultivo Interpretación Consistencia del medio
Reporte de resultados Aplicaciones
Reactivos adicionales
Resultados Condiciones de incubación
ATLAS
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
Medio de cultivo: medio de fenilalanina Composición: 1. 2.
3. 4. 5. 6. 7.
D-L-fenilalanina Extracto de levadura Cloruro de sodio Fosfato de sodio Agar Agua destilada pH inicial = 7.3
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
1.
2.
Determina la capacidad de un organismo de desaminar la fenilalanina en ácido fenilpirúvico por su actividad enzimática, con la consiguiente acidez resultante. El aminoácido aromático fenilalanina sufre una desaminación oxidativa catalizada por un aminoácido oxidasa para producir el ácido cetónico.
La desaminación oxidativa da como resultado la extracción del grupo amino del aminoácido para formar un doble enlace alfacetoácido y libre de amoniaco. Este es un proceso en dos etapas: La extracción del hidrógeno dando un aminoácido y un hidrógeno, se combina con el oxígeno para formar agua. El aminoácido es hidrolizado en un cetoácido.
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
CH2
CH
COOH
- 2H NH2
+
1/2 O FLAVOPROTEÍNA
FENILALANINA CH2
C
COOH
O
+
NH2 AMONIACO
ÁCIDO FENILPIRÚVICO
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Como la fenilalanina se encuentra desaminada, el color producido como consecuencia del agregado de cloruro férrico al 10% se debe a la formación de un cetoácido, el ácido fenilpirúvico. La reacción positiva con este reactivo se debe a la formación de una hidrazona. El cloruro férrico actúa como agente quelante actuando con el ácido fenilpirúvico para formar un color verde. Cuando se expone al oxígeno atmosférico un tubo de cultivo con fenilalanina después del agregar el cloruro férrico aumenta la producción y la intensidad de la reacción positiva. CH2
C
COOH
CH2
C
N O + RNH
COOH
NHR
- NH2
Hidracina Ácido fenilpirúvico
Fenilhidrazona
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Consistencia del medio
Reactivos adicionales
Sólido en pico de flauta
Cloruro férrico 10%
Inoculación
Estría en pico de flauta, inóculo denso.
Condiciones de incubación
Tiempo: 18 - 24 horas Temperatura 35 - 37 ° C
Adicionar de 4-5 gotas a un tubo incubado Hacer rotar suavemente el tubo para que el crecimiento se separe. Esperar de 1 a 5 minutos para leer la reacción Guardar los reactivos en refrigeración y colocarlos en frascos oscuros para evitar la descomposición. Características de Bacilos Gramnegativas oxidasa positivas Hacer clic
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
NEGATIVO
POSITIVO
MEDIO NO INOCULADO
NEGATIVO
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Interpretación
Positiva: Verde claro a intenso en el pico de flauta. Negativo: Amarillo
Aplicaciones Esta actividad enzimática es característica de todas las especies de Proteus y del grupo Providencia, y se usa para separar estos dos géneros de otros miembros de las Enterobacterias
Reporte de resultados
Positivo (+) Negativo(-)
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Fundamento
Inoculación
Medio de cultivo Interpretación Consistencia del medio
Reporte de resultados Aplicaciones
Reactivos adicionales
Resultados Condiciones de incubación
ATLAS
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
Medio de cultivo: Medio SIM Composición:
Extracto de carne Peptona Hierro peptonizado (Indicador de SH2) Tiosulfato de sodio (indicador de SH2) Agar Agua destilada pH = 7.3
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Prueba de ácido sulfhídrico La proteolisis de las proteínas en aminoácidos (aa.) individuales, algunas especies bacterianas son capaces de liberar azufre enzimaticamente de los diferentes aa. que las contienen, produciendo el gas ácido sulfhídrico (SH2). La peptona, cisteína y tiosulfato, todos son fuentes de azufre, pero las diferentes especies utilizan distintos compuestos o aa. que contienen azufre para producir SH2. La enzima responsable de esta actividad es la cisteinasa.
Primera etapa La bacteria reacciona con el tiosulfato de sodio por medio de una reacción de reducción que da un sulfito y un sulfato. Este es un proceso de respiración anaeróbica donde el átomo de azufre sirve como aceptor de electrones para la oxidación de los sustratos orgánicos. El tiosulfato reemplaza al sulfato como aceptor de electrones y es una fuente de azufre para el organismo. Segunda etapa El gas incoloro SH2 reacciona con una sal pesada, citrato férrico de amonio para producir un precipitado negro insoluble, sulfuro ferroso. Bacteria (medio ácido) SH2
+
+
iones férricos
FINALIZAR
tiosulfato de sodio
gas SH2
sulfuro ferroso (pp. negro)
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
El triptófano es un aminoácido que puede ser oxidado por ciertas bacterias para formar tres metabolitos principales: indol, escatol e indolacético. Diversas enzimas intracelulares que intervienen en éste proceso reciben el nombre de triptofanasa, lo que implica el sistema completo de enzimas vinculadas con la producción del indol. El principal intermediario en la degradación del triptófano es el ácido indolpírúvico. La degradación del triptófano libera indol, ácido pirúvico, amoniaco y energía. El ácido pirúvico puede ser nuevamente metabolizado por medio del ciclo glucolítico o entrar en el ciclo de Krebs para liberar CO2 y H2O y una gran producción de energía. El NH3 puede ser utilizado para sintetizar nuevos aminoácidos empleando la energía que se encuentra para la reacción anabólica. La formación de indol se produce solamente en aquellos organismos capaces de fermentar los hidratos de carbono. La elevada acidez producida por la fermentación de la glucosa puede impedir el crecimiento del organismo o inhibir la enzima. El agregado de triptófano estimula la producción de indol mientras que la glucosa la inhibe.
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
La prueba de indol se basa en la formación de un complejo de color rojo cuando el indol reacciona con el grupo aldehído de pdimetilaminobenzaldehído (sustancia activa del reactivo de Kovacs). COOH
NH2
Triptofanasa H2O Desaminación
N
H
L - Triptófano
O
+
+ H3C
NH3
COOH
N
H Indol
Amoniaco
Ácido Pirúvico
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Xileno P-dimetilaminobenzaldehído Color rojo
INDOL
PIRUVATO
NH3
Triptofanasa
TRIPTÓFANO
BACTERIAS FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Black J.G. 1996
Monotricas
Black J.G. 1996
Atricas
Black J.G. 1996
Lofotricas
Determina si un organismo es móvil o inmóvil. Las bacterias tienen movilidad por medio de sus flagelos, que se encuentran principalmente entre los bacilos; sin embargo algunas formas de cocos son inmóviles.
Las bacterias móviles pueden contener un solo flagelo o muchos; además su localización varía con su especie bacteriana y las condiciones de cultivo. A veces, las bacterias con movilidad producen variantes no móviles que parecen ser estables y raramente se revierten en formas móviles. Los organismos no móviles carecen de flagelos.
Black J.G. 1996
Peritricas
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Medios para la detección de H2 S
Agar sulfito de bismuto Agar citrato sulfuro Agar desoxicolato-citrato Medio LIA Medio TSI Agar acetato de plomo Agar S-S Agar XLD Medio SIM
FINALIZAR
Medios para la detección de movilidad
SIM MIO
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Consistencia del medio
Semisólido en forma vertical
Inoculación
Picadura en forma vertical Salmonella typhimurium, tinción de Gram.
Condiciones de incubación
Tiempo: 24 - 48 horas Temperatura 35 - 37° C Los cultivos que van a someterse a pruebas de indol deberán ser incubados aeróbicamente el descenso de la tensión de oxígeno disminuye la producción de indol.
FINALIZAR
Klebsiella pneumoniae en sedimento, tinción de Gram
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
a)
b) c)
Reactivo de Kovacs Composición: Alcohol amílico p-dimetilaminobenzaldehído HCl Adicionar 5 gotas directamente al tubo después de la incubación. Agitar suavemente Leer inmediatamente la reacción Coprocultivo FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Hacer clic
H2S NEGATIVO
MEDIO SIN INOCULAR
INDOL NEGATIVO
INDOL POSITIVO GAS
FINALIZAR
H2S POSITIVO
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MOVILIDAD MENÚ
Ácido sulfhídrico
Positivo: Ennegrecimiento del medio Negativo: Sin ennegrecimiento
Streptococcus pneumoniae: las cápsulas se observan de color blanco.
Indol
Positivo: Anillo rojo en la superficie del medio. Negativa: No se produce color Negativa: Color naranja en la superficie del medio. Indica desarrollo de escatol, un compuesto metilado que puede ser el precursor de la formación de indol. La reacción positiva después de 24 horas indica una prueba completa. Si el cultivo de 24 horas es negativo deberá incubarse otras 24 horas y repetirse la prueba. Black J.G. 1996
Movilidad
Positiva. Los organismos móviles migran de la línea de siembra y se difunden en el medio provocando turbiedad. Negativa. Crecimiento bacteriano acentuado siguiendo la línea de siembra.
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Bacteria
Salmonella thypi Salmonella sp. E. coli Klebsiella Enterobacter Citrobacter Shigella
Producción Prouducción de H2S de indol +o-
Movilidad +
+o-
-
+
-
+
+o-
+ +o-
+o+o-
+ + +o-
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Inoculación
Medio de cultivo
Consistencia del medio
Reporte de resultados
Interpretación Condiciones de incubación
Resultados
Aplicaciones
Fundamento ATLAS
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
Medio de cultivo: Agar hierro triple azúcar (Agar Hierro de Kliger, AHK)
1. 2. 3.
4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12.
Composición: Extracto de carne Extracto de levadura Peptona Proteasa Lactosa Dextrosa Sulfato ferroso Cloruro de sodio Tiosulfato de sodio Agar Agua destilada Indicador : Rojo de fenol Ácido: amarillo Alcalino: rojo Medio no inoculado: anaranjado rojizo (pH = 7.4)
FINALIZAR
Koneman,1992
Superficie de agar Mac Conkey con crecimiento de 24 horas de colonias fermentadoras de lactosa rojas.
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
No fermentador No fermentación
O2
Pico de flauta alcalino/profundidad alcalina
O2
Pico de flauta ácido/profundidad ácida
pH = 7.4
No fermentador de lactosa
Dextrosa Ácidos mixtos
Reacción inicial
Dextrosa Ácidos mixtos
O2
Pico de flauta alcalino/profundidad ácida
O2
Pico de flauta ácido/profundidad ácida
Reacción retardada
Fermentador de lactosa (sacarosa) Dextrosa + lactosa Ácidos mixtos
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Consistencia del medio Sólido en pico de flauta
Inoculación Picadura y estría en pico de flauta
Condiciones de incubación Tiempo: 18 - 24 horas Temperatura: 35 - 37 ° C
Urocultivo Hacer clic
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Klebsiella pneumoniae agar Mac Conkey. University of Missouri-Columbia, 1998: http://www.missouri.edu/~mmiwww/slides.htm
1. Rojo en pico de flauta: alcalino; degradación aeróbica de glucosa Amarillo en capa profunda: ácido; degradación anaeróbica de la glucosa 2. Amarillo en pico: ácido Amarillo en capa profunda: ácido
3. Rojo en pico de flauta: alcalino Sin cambio de color en capa profunda: alcalina. Producción de H2S: precipitado negro Producción de gases: Producción de burbujas, descomposición del medio, ligera muesca del medio sobre el costado del tubo o desplazamiento del medio del fondo dejando un espacio libre.
OBSERVACIONES Una bacteria productora de H2S puede dar tal cantidad de precipitado negro de sulfuro ferroso que oculte completamente la acidez producida en la capa profunda. Sin embargo, si se forma H2S es que existe en la capa profunda una condición ácida, aun cuando no se observe, y debe ser registrada como tal. Es esencial que se interprete la fermentación al término de 18 – 24 horas de incubación, ya que una interpretación prematura o demorada dará formas de fermentación no válidas que llevarán a errores en el agrupamiento del género o especie.
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
1. K / A (Fermentación de glucosa solamente) 2. A / A (Fermentación de glucosa y lactosa) 3. K / K (No fermentación de glucosa y lactosa). Los resultados se escriben siempre siguiendo un patrón. Primero la reacción del pico de flauta seguida por la reacción de la capa profunda, separadas por una barra. Reacciones de TSI Pico de flauta alcalino / profundidad alcalina (K/K). No fermentación de hidratos de carbono. Característico de bacterias no fermentadoras como Pseudomonas
aeruginosa.
Pico de flauta alcalino / profundidad ácida (K/A). Glucosa fermentada, lactosa no fermentada. Característico de bacterias no fermentadoras de lactosa como especies de Shigella. Pico de flauta alcalino / profundidad ácida (negra) (K/A/H2S). Glucosa fermentada, lactosa no fermentada; producción de H2S. Característico de bacterias no fermentadoras de lactosa y productoras de H2S como: Salmonella, Arizona, Citrobacter y algunas especies de Proteus.
Pico de flauta ácido / profundidad ácida (A/A). Glucosa y lactosa fermentadas. Característico de coliformes que fermentan lactosa como: E. coli y grupo Klebsiella-
Enterobacter.
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Este tipo de pruebas se utilizan principalmente para la identificación primaria de los miembros de las Enterobacterias.
Especie bacteriana
Superficie inclinada
Fondo
Gas
H 2S
Enterobacter
A
K
++
-
Hafnia
K
A
+
-
Klebsiella
A
A
++
-
E. coli
A
A
+
-
Shigella
K
A
-
-
Salmonella thypi
K
A
-
+
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
S. parathypi
K
A
+
-
S. choleraesuis
K
A
+
-
Otras Salmonellas
K
A
+
+++
Citrobacter
K
A
+
+++
Edwarsiella
K
A
+
+++
Serratia
K
A
-
-
Proteus vulgaris
K
A
+
+++
P. mirabilis
K
A
+
+++
P. morganii
K
A
-
-
P. retgeri
K
A
-
-
Providencia
K
A
+o-
-
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Inoculación
Medio de cultivo
Consistencia del medio
Reporte de resultados
Interpretación Condiciones de incubación
Resultados
Fundamento ATLAS
Aplicaciones FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
Medio de cultivo: base de descarboxilasa de Moller Crecimiento de Pseudomona aeruginosa en
1. 2.
3. 4. 5. 6. 7. 8. 9.
10.
agar sangre.University of MissouriComposición: Columbia,1998: http://www.missouri.edu/~mmiwww/slides.htm Peptona Extracto de carne Piridoxal L-lisina Citrato de amonio Tiosulfato de sodio Glucosa Agua destilada Agar Indicador de pH: Púrpura de bromocresol Ácido: color amarillo (pH = 5.2) Alcalino: color púrpura (pH = 6.8) Medio no inoculado: color púrpura intenso brillante (pH = 6.0)
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Mide la capacidad enzimática de un organismo para descarboxilar un aminoácido (lisina y arginina) para formar una amina, con la consiguiente alcalinidad. La descarboxilación es el proceso mediante el cual las bacterias que poseen enzimas descarboxilasas específicas son capaces de atacar a los aminoácidos en su grupo carboxilo dando una amina o una diamina y anhídrido carbónico. La descomposición de los aminoácidos se produce anaeróbicamente. El proceso de descarboxilación es irreversible, no oxidativo y requiere una coenzima común, el fosfato de piridoxal. El aminoácido L-lisina sufre la descarboxilación para dar cadaverina y CO2 por acción de la enzima específica lisina-descarboxilasa. El aminoácido L-arginina es catabolizado a través de dos sistemas que pueden ocurrir simultánea o separadamente. Estos sistemas son de arginina deshidrolasa y arginina descarboxilasa.
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Consistencia del medio Sólido en pico de flauta
Inoculación Por picadura y estría, inóculo liviano
Condiciones de incubación
Koneman,1992
Superficie de placa de agar EMB que ilustra el brillo verde producido por miembros de Enterobacterias fermentadoras de lactosa, como Escherichia coli.
Temperatura: 35 – 37° C Tiempo: 18 – 24 horas
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
K/K = azul de Prusia /azul de Prusia Desaminación oxidativa / descarboxilación K/A= azul de prusia / lila No desaminación Producción de H2S = Ennegrecimiento del medio Producción de gas = Burbujas o levantamiento del medio del tubo. FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
A = Ácido K = Alcalino N = Neutra R = Rojo ( desaminación oxidativa)
Encarta, 2002
Hacer clic Clasificación y pruebas para Streptococcus
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
K/K
H2S
K/A
GAS MEDIO NO INOCULADO
PRODUCCIÓN DE H2S
FINALIZAR
K/K
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Especie bacteriana
Superficie inclinada
Fondo
Gas
H2S
E. coli
K
KoN
-o+
-
Shigella
K
A
-
-
Salmonella thypi
K
K
-
+o-
S. parathipy
K
A
+o-
-o+
Otras Salmonellas
K
KoN
-
+
Arizona
K
KoN
-
+
Citrobacter
K
A
-o+
+o-
Edwarsiella
K
K
- o+
+
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
FINALIZAR
Klebsiella
K
K oN
+o-
-
Enterobacter cloacae
K
A
+o-
-
E. aerogenes
K
KoN
+
-
E. hafniae
K
KoN
-o+
-
Proteus vulgaris
R
A
-
-
P. mirabilis
R
A
-
-
P. morganii
KoR
A
-
-
P. rettgeri
R
A
-
-
Providencia
R
A
-
-
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Fundamento
Inoculación
Medio de cultivo Interpretación Consistencia del medio
Reporte de resultados Aplicaciones
Reactivos adicionales
Resultados Condiciones de incubación
ATLAS
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
Medio de cultivo Composición: Extracto de levadura Peptona L- ornitina Dextrosa Agar Agua Indicador de pH: púrpura de bromocresol Ácido: color amarillo (pH = 5.2) Alcalino: color púrpura (pH = 6.8) Medio no inoculado: color púrpura intenso brillante (pH = 6.0)
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
La prueba MIO se utiliza para la identificación de Enterobacterias sobre la base de movilidad, la producción de ornitina descarboxilasa y de indol.
Mide la capacidad enzimática de un organismo para descarboxilar un aminoácido (ornitina) para formar una amina, con la consiguiente alcalinidad.
La descarboxilación es el proceso mediante el cual las bacterias que poseen enzimas descarboxilasas específicas son capaces de atacar a los aminoácidos en su grupo carboxilo dando una amina o una diamina y anhídrido carbónico. La descomposición de los aminoácidos se produce anaeróbicamente. El proceso de descarboxilación es irreversible, no oxidativo y requiere una coenzima común, el fosfato de piridoxal. El aminoácido L-lisina sufre la descarboxilación para dar cadaverina y CO2 por acción de la enzima específica lisina-descarboxilasa.
El aminoácido L-ornitina es descarboxilado por la enzima ornitina descarboxilasa para dar la diamina putrescina y CO2, producidos en condiciones anaerobias.
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Consistencia del medio
Semisólido en forma vertical Inoculación Por picadura, en forma vertical
Condiciones de incubación
Reactivos adicionales
Prueba de indol Reactivo de Kovacs
Adicionar 5 gotas y agitar suavemente el tubo Interpretar
Temperatura: 35 – 37° C Tiempo: 24 – 48 horas
inmediatamente.
Conservación: Los reactivos deberán guardarse en el refrigerador (4° C) mientras no se usan su estabilidad es variable, por lo tanto se hará todas las semanas un control de calidad, desechándolos si muestran una reacción débil o negativa con un organismo positivo conocido.
Black J.G. 1996
Exudado faringeo Hacer clic
Bacteria flagelar mostrada por la técnica de anticuerpo fluorescente
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
ORNITINA NEGATIVO MOVILIDAD POSITIVO (turbidez)
ORNITINA POSITIVO MOVILIDAD NEGATIVO
INDOL NEGATIVO
INDOL POSITIVO
MEDIO NO INOCULADO
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Ornitina descarboxilasa Positivo: color púrpura del medio Negativo: Color amarillo en el fondo del tubo que puede ser púrpura al final Indol Positivo: Anillo rojo en la superficie del medio. Negativa: No se produce color Negativa: Color anaranjado en la superficie del medio. Indica desarrollo de escatol, un compuesto metilado que puede ser el precursor de la formación de indol. La reacción positiva después de 24 horas indica una prueba completa. Si el cultivo de 24 horas es negativo deberá incubarse otras 24 horas y repetirse la prueba.
Movilidad Positiva. Los organismos móviles migran de la línea de siembra y se difunden en el medio provocando turbidez. Negativa. Crecimiento bacteriano acentuado siguiendo la línea de siembra. Se leen las reacciones de movilidad y de ornitina descarboxilasa antes de agregar el reactivo de Kovacs para la prueba de indol.
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Prueba
Movilidad
Positivo
Negativo
+
-
Bacterias
Indol
Movilidad
H2S
Salmonella thypi
-
+
+o-
Otras
-
+
+o-
+
+
-
+o-
-
-
Enterobacter
-
+
-
Citrobacter
-
+
+
+o-
+o-
-
Salmonellas E. coli
Indol
Ornitina
+
+
-
-
Klebsiella
Shigella FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Microorganismos ornitina positivos
Especies de
Enterobacter Proteus mirabilis Proteus morganii Yersinia enterocolitica
Microorganismos ornitina negativos
Especies de Klebsiella
Enterobacter aglomerans Proteus vulgaris Proteus rettgeri Yersinia pestis Yersinia pseudotuberculosis
Urocultivo Hacer clic
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Robert Koch (1843-1910), científico alemán galardonado con el premio Nóbel iniciador de la bacteriología médica moderna; aisló varias bacterias patógenas, incluida la de la tuberculosis, y descubrió los vectores animales de transmisión de una serie de enfermedades importantes. Nacido en Klausthal-Zellerfeld el 11 de diciembre de 1843, Koch se incorporó a la Universidad de Gotinga en 1862, donde estudió botánica, física y matemáticas e inició la carrera médica, que ocuparía el resto de su vida. Tras breves estancias en el Hospital General de Hamburgo y en una institución para niños discapacitados psíquicos, comenzó a ejercer la medicina privada. Sus actividades profesionales no le impidieron desarrollar otros intereses como la arqueología, la antropología, las enfermedades ocupacionales, como el envenenamiento por plomo, y el emergente campo de la bacteriología. Su primer descubrimiento importante se produjo en la década de 1870, cuando demostró que el carbunco infeccioso, también conocido como ántrax, sólo se desarrollaba en los ratones cuando el material inyectado en su torrente sanguíneo contenía bastones o esporas viables del Bacillus anthracis. El aislamiento del bacilo del carbunco por parte de Koch constituyó un hito histórico, ya que por primera vez pudo demostrarse sin duda cuál era el agente causante de una enfermedad infecciosa. Quedó claro que las enfermedades infecciosas no estaban causadas por sustancias misteriosas, sino por microorganismos específicos, en este caso bacterias. Koch mostró también cómo debe trabajar el investigador con dichos microorganismos, cómo obtenerlos a partir de animales infectados, cómo cultivarlos artificialmente y cómo destruirlos. Koch comunicó sus observaciones al gran patólogo alemán Julius Friedrich Cohnheim y sus colaboradores, uno de los cuales era el bacteriólogo Paul Ehrlich, pionero de la inmunología moderna.
Prueba Prueba Prueba Medios Medios
del ácido sulfhídrico de indol de movilidad para la detección de H2S para la detección de movilidad
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
PRUEBA
POSITIVO
NEGATIVO
Sulfuro
+
-
Indol
+
-
Movilidad
+
-
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
K/A
K/K
MEDIO
GAS
H2S
A/A
NO INOCULADO
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
En 1880, tras finalizar un importante trabajo bacteriológico sobre infecciones en las heridas, fue nombrado consejero del gobierno en el Departamento Imperial de la Salud en Berlín, donde, a partir de entonces, llevó a cabo la mayoría de sus investigaciones. En 1881 dio a conocer sus estudios sobre la tuberculosis y al año siguiente anunció que había aislado el bacilo responsable de tan terrible enfermedad. Sus hallazgos fueron confirmados por investigadores de todo el mundo. El descubrimiento permitió mejorar las técnicas diagnósticas mediante la identificación del bacilo en las excreciones corporales, especialmente en los esputos. Koch dedicó entonces su atención al cólera, que en 1883 había alcanzado niveles de epidemia en la India. Se desplazó allí, identificó el bacilo causante de la enfermedad y descubrió que era transmitido a los seres humanos sobre todo a través del agua. Más tarde viajó a África, donde estudió las causas de las enfermedades transmitidas por insectos. En 1891 Koch fue nombrado director del Instituto de Enfermedades Infecciosas de Berlín (que en la actualidad lleva su nombre), creado para la investigación médica especializada. Permaneció al frente del mismo hasta el día de su jubilación en 1904. En 1905 obtuvo el Premio Nobel de Fisiología y Medicina. Murió el 27 de mayo de 1910 en el balneario alemán de Baden-Baden.
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Determina el metabolismo oxidativo o fermentativo de un hidrato de carbono. La utilización que una bacteria hace de los hidratos de carbono tiene lugar por alguno de dos procesos, de fermentación o de oxidación. Algunas bacterias son capaces de metabolizar un carbohidrato solo en condiciones aeróbicas, mientras que otras producen ácido tanto aeróbica como anaeróbicamente. La diferencia principal entre el metabolismo fermentativo y oxidativo depende de los requerimientos de oxígeno atmosférico y de la fosforilación inicial. La fermentación es un proceso anaeróbico que requiere la fosforilación inicial de la glucosa previamente a su degradación, mientras que la oxidación, en ausencia de compuestos inorgánicos como nitrato y sulfato, es un proceso estrictamente aeróbico que comprende la oxidación directa de una molécula de glucosa no fosforilada (inicialmente). La fermentación produce una acidez más elevada que el proceso metabólico oxidativo. FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
Tamaño: diámetro en mm. Forma: puntiforme, circular, filamentosa, irregular, rizoide. Elevación: plana, sobreelevada, convexa, pulvinada, umbonada, umbilicada. Margen (borde): entero, ondulante, lobulado, lacerado, filamentoso, rizado. Color: blanco, amarillo, negro, marrón, naranja, etc. Superficie: brillante, opaca, erizada, rugosa Densidad: opaca, translúcida, transparente, etc. Consistencia: cremosa, seca, mucoide (viscosa), membranosa, quebradiza. http://www.austin.cc.tx.us/microbugz/labindex.html
FINALIZAR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
Hacer clic
Los tres tipos generales de reacciones producidas por bacterias que crecen en agar hierro de Kligler. En A se ilustran bacilos no fermentadores que son incapaces de producir ácidos a partir de la fermentación de glucosa o lactosa; no existe ningún cambio en el medio.
B ilustra una acidificación inicial de la profundidad y el pico de flauta del medio por bacterias que fermentan glucosa, pero el pico de flauta retorna a un pH alcalino a medida que se forman aminas alcalinas a partir de la descarboxilación oxidatíva de péptidos (derivados de proteínas en el medio) cerca de la superficie. C ilustra la completa acidificación permanente de la profundidad y el pico de flauta por bacterias que fermentan lactosa.
Black J.G. 1996
Beta hemólisis. Zona de aclaramiento total de sangre alrededor de las colonias debido a la lisis de los eritrocitos.
Black J.G. 1996
Alfa hemólisis. Aclaramiento parcial de sangre alrededor de las colonias con coloración verde del medio, contorno de los eritrocitos intacto.
Prueba con Rojo de Metilo
Prueba de Voges - Proskauer
Bases bioquímicas
FINALIZAR
Reacciones
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
http://www.mco.edu/depts/micro/awards.html
Hacer clic
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REINO
PRINCIPALES CARACTERÍSTICAS
EJEMPLOS DE ORGANISMOS
Monera
Organismos procariotas unicelulares.
Bacterias
Protistas
Organismos eucariotas unicelulares y sus descendientes más inmediatos.
Algas, protozoos
Hongos
Organismos heterótrofos que obtienen su alimento por absorción. No realizan la fotosíntesis. La pared celular contiene generalmente quitina.
Levaduras, setas
Vegetal
Organismos inmóviles que realizan la fotosíntesis. Pared celular compuesta de celulosa.
Musgos, helechos, árboles
Animal
Organismos móviles sin pared celular. Ingieren el alimento. Presentan tejidos diferenciados.
Moluscos, peces, aves
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COPROCULTIVO MEDIOS
PARA AISLAMIENTO Agar entérico Hektoen Agar de eosina y azul de metileno Agar ENDO Agar XLD Agar Salmonella Shigella Agar verde brillante
PARA ENRIQUECIMIENTO Base de caldo tetrationato Caldo de selenito y cistina
AISLAMIENTO
PARA IDENTIFICACIÓN Agar de hierro y triple azúcar Caldo rojo de fenol y carbohidratos Medio urea Medio SIM Agar hierro y lisina Medio MIO Agar citrato de Simmons
ENRIQUECIMIENTO PLACAS: Agar S-S, verde brillante, sulfito de bismuto.
TUBOS: Caldo tetrationato y/o caldo selenito
Agar sangre INCUBACIÓN 24 hs – 37° C PLACA: Agar EMB ó ENDO, XLD, Mac Conkey
IDENTIFICACIÓN BIOQUÍMICA TSI, MIO, LIA, SIM, fenilalanina, RMVP,Citrato de Simmons, urea
PLACAS: Agar verde brillante,sulfito de bismuto,XLD,EMB, ENDO, Mac Conkey.
Principales Pruebas para la identificación de Enterobacterias BACTERIA
OXIDASA
INDOL
VP
RM
CITRATO
SH2
UREA
MOVIL IDAD
GELA TINA
LISINA DESC.
ARGI NINA DESC .
E. coli
-
+
-
+
-
-
-
-
-
-
-
Shigella
-
+
-
+
-
-
-
-
-
-
+
Edwardsiella
-
+
-
+
-
+
-
-
-
+
-
Salmonella
-
-
-
+
-
+
-
-
-
+
+
Arizona
--
-
-
+
+
+
-
+
+
+
+
Citrobacter
-
-
-
+
+
+
-
-
-
-
-
Klebsiella
-
+
+
-
+
-
+
-
-
+
-
Enterobacter
-
-
+
-
+
-
-
+
+
+
-
Serratia
-
-
+
+
+
-
-
+
+
+
-
Proteus vulgaris
-
+
-
+
+
+
+
+
+
-
-
Providencia
-
+
-
+
+
-
-
-
-
-
-
http://www.missouri.edu/~mmiwww/slides.html Hacer
Bacterias Gramnegativas no Fermentadoras O/F glucosa
Oxida sa
Catala sa
Reducci ón de NO2
Red.ucc ión de N2
Movilida d
Mac Conkey
SS
Agar pseudo cel
Pseudonomas
O
+
+
Variable
Variable
+
(excepto P. mallei)
+
+
+
Acinetobacter
O
--
+
-
-
-
+
V
-
Achromobacter
O
+
+
+
-
+
+
+
-
Alcaligenes
Inactivo
+
+
Variable
-
+
+
V
V
Eikenella corrodens
Inactivo
+
-
+
-
-
-
-
-
Flavobacterium
O
+
+
-
-
-
-
-
-
Grupos del CDC
Variable
+
+
Variable
Variable
Variable
-
V
V
Moraxella
Inactivo
+
+
Variable
Variable
-
-
-
-
Prueba bioq.
Géneros
ESTAFILOCOCOS MEDIOS
PARA AISLAMIENTO Agar S-110 Agar sal y manitol Agar de Vogel Johnson
1.Examen directo
2. Siembra
PARA IDENTIFICACIÓN Medio CTA Caldo rojo de fenol Caldo SF Tinción de Gram
Agar S-110
3. Frotis
Agar sal y manitol
4. Pruebas bioquímicas
Agar de Vogel Johnson
Coagulasa Catalasa Fermentación de
manitol Susceptibilidad a http://www.ccsf.edu/Departments/Biology/gmposcocci.htm
Hacer clic
novobiocina
FAMILIA MICROCOCCACEA MICROCOCCUS
STOMATOCOCCUS
PLANOCOCCUS
STAPHYLOCOCCUS
Racimos irregulares
+
+
+
+
Tetradas
+
-
-
-
Cápsula
-
+
-
-
Movilidad
-
-
+
-
Crecimiento Gfurazolidona
+
-
-
-
Fermentación de glucosa
-
+
-
+
Oxidasa
+
-
No desarrolla
-
Resistencia de lisostafina
R
R
R
S
Glicina de péptidoglicana
-
-
-
+
Ácidos teicoicos en pared celular
-
-
-
+
CARACTERÍSTICA
Identificación de Staphylococcus S. aureus
S. epidermidis
S. saprophyticus
Pigmento colonial
+
-
10-90% cepas +
Coagulasa
+
-
-
Factor de agregación
+
-
-
Nucleasa termoestable
+
-
-
Fosfatasa alcalina
+
+
-
Ornitina descarboxilasa
-
10-90% cepas +
-
10-90% cepas +
+
+
Beta-galactosidasa
-
-
+
Producción de acetoína
+
+
+
Resistencia a novobiocina
-
-
+
Resistencia a polimixina
+
+
-
Trehalosa
+
-
+
Manitol
+
-
10-90% cepas +
Manosa
+
+
-
Xilosa
-
-
-
Celulosa
-
-
-
Maltosa
+
+
+
Sacarosa
+
+
+
PRUEBA
Ureasa
ESTREPTOCOCOS Especie
Susceptibili
Susceptibili
dad
dad
bacitraci na
optoquin a
Hidrólisi s hipúrat o
Hidrólisi s esculina
S R
R R
+ -
Enterococos No enterococos
R
R
R
S. viridans
S. pneumoniae
Estreptococos betahemolíticos Grupo A Grupo B
Crecimient o en bilis
Crecimient o en NaCl 6.5%
CAM P
Fenómen o satelitism o
+
-
+
+
-
+
-
+
+
-
-
R
-
-
+
-
-
-
R
R
-
-
-
-
-
+
R
R
-
-
-
-
-
http://www.medschool.lsumc.edu/Micr/COURSES/DMIP/dmex16.htm
Hacer clic
Diferenciación de especies de Streptococcus Especie
Crecimieto en Litmus milk
Lactosa
Trehalosa
Sorbitol
Manitol
Sacarosa
-
+ -
+ + -
+ + -
-
-
+ + -
-
+
+ + -
+ -
+
+ +
+
+ + +
+ +
+ +
+ +
+
+
Reducción
de Azul de metileno
HEMOLÍTICO PIOGÉNICO
S. pyogenes S. agalactiae S. equi ORALES
S. salivarius S. Mutanm S. termophilus DEL ÁCIDO LÁCTICO
S. lactis S cremoris
-
ENTEROCOCOS
E. feacalis S. liquefaciens S zymogenes
+
Características Morfología
S. pneumoniae
Streptococcus sp.
Diplococo lanceolado
Pequeñas cadenas de cocos
+
-
Alfa
Alfa
Turbio uniforme
Crecimiento granuloso
Solubilidad en bilis
+
-
Fermentación de inulina
+
-
Sensibilidad a Optoquina
+
-
Virulencia para ratón
+
-
Cápsula Hemólisis Crecimiento en caldo
http://catalog.cmsp.com/datav3/it010019.htm Hacer clic
HEMOLISINAS DE STHAPYLOCOCCUS Tipo serológico
Eritrocitos susceptibles
Leucocitos susceptibles
Toxicidad
ALFA
Conejo Borrego
Conejo Humano
Dermonecrótica para conejo
BETA
Borrego Humano
Ninguno
Letal para conejo en grandes dosis
GAMMA
Conejo, humano, borrego, cobayo, rata
DELTA
Conejo, humano, borrego, cobayo, rata
Dermonecrótica para conejo y cobayo; letal para conejo Conejo, humano, ratón, cobayo
Edema en conejo y cobayo
BACILLUS Y CLOSTRIDIUM Bacillus
Clostridium
Bacilos
Bacilos
Esporas
+
+
Movilidad
+
+
Crecimiento en: Aerobiosis Anaerobiosis
+ -
+
Catalasa
+
-
Ácido de glucosa
+
+
CARACTERÍSTICA Forma
Diferencias de especies de Bacillus B. anthracis
B. cereus
B. megaterium
B. subtilis
Ácido de: Arabinosa Glucosa Manitol Salicina
+ -
+ +/-
+ + + -
+ + + +/-
Cápsula
+
-
Crecimiento en: Agar penicilina Anaerobiosis
+
+ +
-
-
Citrato
+
+
+
+
Glucosa O/F
F
F
O
O
Hemólisis ASC
-
BETA
-
+/-
Hidrólisis de: Almidon Gelatina
+ +
+ +
+ +
+ +
Indol
-
-
-
-
Movilidad
-
+
+
+
Peptonización LT
-
+
+/-
+
Reducción de Nitratos
+
+
-
+
Virulencia de ratón
+
-
-
-
Voges-Proskauer
+
+
-
+
Características
-
Diferencias de especies de Clostridium C. perfringes
C. botulinum
C. tetani
+ + + + Variable
+ Variable Variable Variable Variable
-
-
-
-
Subterminal
Subterminal
Terminal
Hemólisis ASC
+
+/-
+
H2S
-
+/-
Variable
Indol
-
-
Variable
ACG
-
Variable
-
+
+
Reducciónd de nitratos
Variable
-
-
Voges - Proskauer
Variable
-
-
Características Ácido de: Glucosa Lactosa Maltosa Manitol Sacarosa Sorbitol Trehalosa Crecimiento aeróbico Esporas
Leche tornasolada Movilidad
CORYNEBACTERIUM DIPHTERIAE Especie
Morfología celular
Morfología en ASC
Crecimiento en caldo
Hemólisis
Fermentación
Glu
Sac
Alm
Variedad gravis
Bacilos cortos
Colonias 2-4mm, grises, cabeza de margarita, planas
Película
-
+
-
+
Variedad mitis
Bacilos largos, con granos en los extremos
Colonias 1-2mm, negras, convexas, lisas y brillantes
Difuso
+
+
-
-
Variedad intermedius
Bacilos largos en bastón
Colonias >0.5mm, negras, planas, secas, duras
Sedimento granular
-
-
-
-
EXUDADO FARINGEO MEDIOS PARA AISLAMIENTO Agar sangre
Agar S-110
Agar eosina y azul de metileno
Medio de transporte Stuart
Agar sal y manitol
Agar BIGGY
Tinción de Gram Hemolítico grupo A
Agar sangre
Streptococcus
Disco de bacitracina
Neumococos
Disco de optoquina
Solubilidad de bilis
Agar eosina y azul de metileno
Enterobacterias
Agar S-110, sal y manitol
Staphylococcus aureus y otros Micrococcus
Agar BIGGY
Candida albicans
TSI, LIA, MIO, citrato y urea
Catalasa y coagulasa
Tubos germinales y clamidiosporas
UROCULTIVO PARA IDENTIFICACIÓN
MEDIOS
TSI, Caldo rojo de fenol
PARA AISLAMIENTO
Urea, SIM, MIO, LIA, Citrato de simmons
Agar sangre
PARA SENSIBILIDAD A ANTIBIÓTICOS Agar de Mueller Hinton Agar soya tripticaseína
Agar EMB Agar S-110 Agar sal y manitol
Orina
Agar Biggy
AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN
Tinción de Gram
Agar sangre, identificación de: Estafilococos
Estreptococos Neumococos Observación de hemólisis
Agar EMB Identificación de: Enterobacterias Pseudomonas Salmonella y Shigella
Agar S-110 ó sal y manitol Identificación de Staphylococcus y otros Micrococos
Aislamiento de bacterias patógenas en heces Salmonella, Shigella, Escherichia coli, Y. enterocolitica
Materia fecal Mac Conkey
EMB o XLD
Seleccionar colonias lactosa (-)= Salmonella Lactantes: colonias lactosa (+)= E. coli y
Sulfito de bismuto
Colonia negra = Salmonella
Caldo de selenito
Sulfito de bismuto
XLD, VB
Shigella
Certifique Y. enterocolitica
Colonia negra
Salmonella
Hacer clic http://endeavor.med.nyu.edu/courses/microbiology/coursew are/infect-disease/Gram_Neg_Bacilli5.html
Colonia lactosa
(-)=Salmonella typhi
Clasificación y pruebas para Streptococcus Grupo de Lancefi eld
Especie
Hemóli Habitat sis humano
Enfermedades
Pruebas de laboratorio
A
S. pyogenes
beta
Faringe, piel
Infecciones primarias: Faringitis aguda, erisipela, celulitis, impétigo, septicemia Secuelas postinfecciosas: Fiebre reumática, glomerulonefritis, endocarditis reumática.
Disco de bacitracina A Aglutinacion en látex
B
S. agalactiae
beta
Faringe, vagina
Sepsis puerperal, endocarditis, neumonitis, neumonía, meningitis, septicemia.
Prueba de CAMP Bilis esculina Aglutinación en látex
C
S. equi S. equisimilis S. dysgalactiae
beta beta alfa
Faringe, vagina, piel
Infecciones en heridas, sepsis puerperal, celulitis, endocarditis.
Hidrólisis de hipurato, Fermentación de glicerol, trehalosa, sorbitol Aglutinación al látex
Grupo de Lancefi eld
Especie
D
Enterococos:
Hemóli Habitat sis humano
E. faecalis E. faecium E. turans
Alfa Beta
No enterococos:
Gama Alfa
S. bovis S. equinus
Enfermedade s
Pruebas de laboratorio
Intestino grueso
Infecciones en tracto urinario, abcesos pelvianos, peritonitis, infecciones en heridas, endocarditis.
Hidrólisis de bilis esculina Aglutinación al latex Tolerancia a 6.5% NaCl
F
S. anginosus
Beta
Boca, dientes, faringe
Sinusitis, caries dental, meningitis, abceso cerebral, neumonía
Producción de ácido a partir de glucosa, maltosa, salicina y sacarosa Aglutinsación al latex
H
S. sanguis
Alfa
Boca, dientes, faringe
Caries endocarditis, septicemia
Fermentación de inulina
K
S. salivarius
Alfa
Faringe, boca
Endocarditis, septicemia, sinusitis, meningitis
Ácido aprtir de glucosa, sacarosa y maltosa
S. pneuomoniae
Alfa
Faringe, boca, traquea
Neumonía septicemia, meningitis, endocarditis
Serotipíficación Reacción de quellung Solubilidad en bilis Susceptibilidad a optoquina
dental,
lobar, otitis,
la
BACILOS GRAM NEGATIVOS OXIDASA POSITIVOS Prueba
Aeromonas
Plesiomonas
Vibrio
Pseudomonas
Fermentación de glucosa
+
+
+
-
Crecimiento en NaCl 6.5%
-
-
+
-
Ácido de inositol
-
+
-
No aplicable
Ácido de manitol
+
-
+
No aplicable
Crecimiento en TCBS
-
-
+
-
Licuefacción de gelatina
+
-
+
Variable
Bacteria con forma de bastón (bacilo), que pertenece a la familia de las Enterobacteriaceas; está considerada como el material biológico más utilizado en experimentación. Esta bacteria se encuentra en el tracto intestinal de los mamíferos. La especie comprende varios grupos que se establecen según su actividad. Las especies de Escherichia coli oportunistas producen infecciones sólo si abandonan el colon. Otros grupos producen hasta el 90% de las diarreas infantiles y la denominada diarrea del viajero. Esta última no es grave, pero la gastroenteritis aguda de los niños puede provocar la inflamación de la mucosa intestinal, dando lugar a deshidratación grave y heces purulentas. La Escherichia coli es un organismo adecuado para la investigación por su crecimiento rápido y porque su cultivo es sencillo. Ha facilitado descubrimientos muy importantes sobre metabolismo, reproducción celular e ingeniería genética. Biblioteca de Consulta Microsoft® Encarta® 2002. © 1993-2001 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos.
Hacer clic http://www.ccsf.edu/Departments/Biology/gmposcocci.htm
Streptococcus, bacteria Gram positiva de forma esférica. Los estreptococos aparecen en pares o cadenas, y algunas especies son patógenas en los seres humanos. Las infecciones estreptocócicas comprenden la faringitis, la escarlatina, erisipelas, fiebre puerperal y algunas neumonías. Los fármacos de elección en el tratamiento de estas infecciones son la penicilina y la eritromicina. Los cultivos de los estreptococos no patogénicos lácticos se emplean en la fermentación de productos lácteos como el queso y la mantequilla. Biblioteca de Consulta Microsoft® Encarta® 2002. © 1993-2001 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos.
La bacteria Staphylococcus aureus es un patógeno común en el ser humano que se localiza principalmente en las mucosas y la piel. Puede originar abcesos y forúnculos en la piel además de provocar osteomielitis, endocarditis y otro gran número de infecciones. Enciclopedia Microsoft ® Encarta ® 2002. © 1993-2001 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos. Lester V. Bergman/Corbis
La bacteria Salmonella typhi es responsable de la fiebre tifoidea, una enfermedad infecciosa que origina fiebre alta, erupción de manchas rojas en tórax y abdomen y a veces diarrea y hemorragia intestinal. Enciclopedia Microsoft ® Encarta ® 2002. © 1993-2001 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos. Tektoff-Merieux, CNRI/Science Photo Library/Photo Researchers, Inc.
Estructura proteica de un microtúbulo Los microtúbulos son tubos finos y huecos que ayudan al soporte de ciertas estructuras celulares como cilios y flagelos. Éstos son orgánulos filamentosos, destinados a la locomoción y a la obtención de alimento, que están incrustados en la membrana celular de algunos organismos eucariotas. Las paredes del tubo están formadas por dos tipos de subunidades de una proteína globular, la alfa y la beta tubulina, que se reúnen para formar un dímero. Los dímeros se ensamblan, se enrollan y componen un tubo de la longitud necesaria. Dentro de cada cilio (corto) o flagelo (largo), aparecen nueve pares de microtúbulos que rodean a un décimo par central. Enciclopedia Microsoft ® Encarta ® 2002. © 1993-2001 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos. © Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos.
El ciclo de Krebs empieza y acaba con la combinación de la acetil coenzima A (acetil Co A) y el oxalacetato para formar ácido cítrico. Este compuesto ácido tiene seis átomos de carbono y experimenta una serie de reacciones químicas catalizadas por enzimas que separan dos de estos átomos. Las enzimas también modifican la estructura del compuesto, que se transforma en oxalacetato al final del ciclo. Éste se combina a continuación con la acetil Co A para iniciar de nuevo la cadena de reacciones. Cada ciclo genera una molécula de ATP rico en energía (que se forma por liberación de cuatro electrones) y otra de GTP. Enciclopedia Microsoft ® Encarta ® 2002. © 1993-2001 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos. © Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos
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Esta micrografía electrónica ilustra la bacteria Vibrio cholerae, causante del cólera, una grave enfermedad infecciosa del hombre. Produce una toxina que induce la secreción de grandes cantidades de líquido en el intestino delgado, lo cual determina un cuadro de vómitos, diarrea, calambres musculares y, a veces, la muerte. Hay una vacuna preparada con bacterias muertas que proporciona protección parcial. Enciclopedia Microsoft ® Encarta ® 2002. © 1993-2001 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos. Moredun Animal Health LTD/Photo Researchers, Inc.
Bacilos Gram positivos grandes que se agrupan formando cadenas, forman esporas y son aerobios La mayor parte de las especies de Bacillus producen catalasa, y la esporulación no es inhibida por la incubación aerobia característica positiva que ayuda a la diferenciación del género Bacillus del Clostridium. El Bacillus anthracis causa antráx en animales y humanos. El Bacillus cereus ha sido asociado con brotes de intoxicación alimentaría.
Ingraham L.J. 2000
Black, 1996
Ingraham L.J. 2000
Diplococos Gram positivos, frecuentemente lanceolados y agrupados en cadenas, poseen una cápsula formada por polisacáridos que permite una fácil tipificación con antisueros específicos. Pueden ser lisados con facilidad por agentes tensoactivos, como las sales biliares. Estos organismos son habitantes del aparato respiratorio superior del hombre, y pueden causar neumonía, sinusitis, otitis, bronquitis, meningitis entre otros.
Corynebacterium diphteriae en tinción de Gram. University of Missouri-Columbia, 1998: http://www.missouri.edu/~mmiwww/slides.htm
Son bacilos Gram positivos, inmóviles y no esporulados, que frecuentemente presentan sus extremos en forma de mazas, así como gránulos irregularmente teñidos. A menudo se encuentran formando asociaciones características, semejando letras chinas o palizadas. Algunas especies forman parte de la flora normal del aparato respiratorio del hombre. C diphtheriae produce una poderosa exotoxina que causa la difteria en el hombre.
Corynebacterium diphtheriae en medio Tinsdale. University of Missouri-Columbia, 1998: http://www.missouri.edu/~mmiwww/slides.htm
Streptococcus
faecalis
en fisión binaria, coco Gram positivo, flora normal del intestino grueso, sin embargo causa infecciones en el tracto genitourinario y en sistema cardiovascular. Los enterococos se pueden desarrollar típicamente en medios con concentraciones de NaCl al 6.5% o bilis al 40%, son inhibidos pero no destruidos por las penicilinas.
http://www.uphs.upenn.edu/bugdrug/antibiotic_manual/Gram3.htm
Estafilococo, nombre común de un género de bacterias parásitas (Staphylococcus) de forma redondeada, que se encuentran habitualmente en el aire, el agua, la piel (especialmente en zonas con pelo o vello) y la parte alta de la faringe humana. Son de naturaleza patógena, y cuando abandonan su localización en la piel y pasan a invadir otras estructuras pueden producir procesos como los forúnculos, infecciones de heridas (abscesos; neumonía; meningitis; septicemia). Casi siempre existe una puerta de entrada a través de la piel o la faringe. El tratamiento de las infecciones estafilocóccicas se realiza mediante antibióticos, como los de la familia de las penicilinas y sulfamidas, pero es frecuente la existencia de cepas resistentes a los antibióticos habituales, que requieren antibióticos más específicos para su control. Biblioteca de Consulta Microsoft® Encarta® 2002. © 1993-2001 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos.
Helicobacter pylori, bacteria implicada en el desarrollo de gastritis y úlceras pépticas. Se asocia también con algunos cánceres de estómago. Con toda probabilidad, la infección por Helicobacter pylori se produce en la edad infantil. Es un bacilo Gram negativo corto, helicoidal, con múltiples flagelos, microaerófilo (con preferencia por medios escasos en oxígeno), que coloniza las capas profundas del moco de recubrimiento gástrico y duodenal y se adhiere a las células epiteliales superficiales de la mucosa del estómago y duodeno, sin invadir la pared. La bacteria segrega amoníaco, alcalinizando el medio; así se protege de la acción acídica del jugo gástrico (pH 3). El amoníaco además irrita la mucosa, ayudado por proteasas y fosfolipasas bacterianas que destruyen el moco protector. La mucosa y su lámina propia son invadidas por un denso infiltrado de células inflamatorias, especialmente neutrófilos. Se ha relacionado con el 95% de las úlceras duodenales, el 70% de las úlceras gástricas, el 100% de las gastritis crónicas activas y el 100% de las gastritis crónicas tipo B. DIAGNÓSTICO Las pruebas que se utilizan para diagnosticar esta infección pueden ser directas, si se basan en la identificación del microorganismo (histología y cultivo) e indirectas, cuando estudian alguna característica del germen (prueba de la ureasa y pruebas en aire espirado) o bien los anticuerpos producidos por el paciente (serología). Las muestras utilizadas para el diagnóstico pueden obtenerse por métodos invasivos (biopsia durante la endoscopia) o no invasivos (suero, saliva, aliento). Biblioteca de Consulta Microsoft® Encarta® 2002. © 1993-2001 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos.
Beyong,2001:http://beyond2000.com/news/Nov_00/story_901.html
Salmonella, género de bacterias patógenas descubiertas por el veterinario americano Daniel Elmer Salmon en 1885. El organismo se transmite por determinados alimentos contaminados como carne de ave, huevos u otras carnes. Se divide en tres especies: Salmonella typhi, S. choleraesuis y S. enterititis. Ésta última presenta más de 1.400 variedades antigénicas distintas. La S. typhi produce la fiebre tifoidea. Las diferentes S. enteriditis, la más típica de las cuales es la S. typhimurium, producen gastroenteritis (salmonelosis) que son intoxicaciones alimentarias que producen dolor abdominal, fiebre, náuseas, vómitos y diarrea. El periodo de incubación varía entre 8 y 48 horas y la duración de los síntomas oscila entre 3 y 7 días. Los casos leves se tratan con dieta y limonada alcalina (preparado rehidratante y reponedor de las pérdidas de electrolitos); no se deben usar antidiarreicos porque pueden transformar al enfermo en portador crónico de salmonelas. Los casos graves deben hospitalizarse y tratarse con rehidratación intravenosa y, en ocasiones, con antibióticos. La prevención de estas infecciones pasa por extremar la higiene, la limpieza cuidadosa y el aumento del tiempo y la temperatura en la preparación culinaria de los alimentos. Biblioteca de Consulta Microsoft® Encarta® 2002. © 1993-2001 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos.
Las arquebacterias constituyen un grupo de bacterias adaptado a vivir en condiciones extremas. La especie Methanospirillum hungatii es una arquebacteria metanogénica Gram negativa presente en ambientes carentes de oxígeno. Estas bacterias producen metano a partir de dióxido de carbono e hidrógeno. En la fotografía aparece la bacteria en fase de escisión, es decir, mientras se está dividiendo para dar lugar a dos células hijas. Enciclopedia Microsoft ® Encarta ® 2002. © 1993-2001 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos. Dr. Kari Lounatmaa/Science Photo Library/Phot Researchers, Inc.
Las espiroquetas son bacterias con una morfología y mecanismo de movilidad únicos. Se encuentran diseminadas en ambientes acuáticos y en los cuerpos de animales. Algunas de ellas causan enfermedades como la sífilis, originada por Treponema pallidum. La célula espiroqueta es delgada, flexuosa y de forma helicodal. Enciclopedia Microsoft ® Encarta ® 2002. © 1993-2001 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos. Omikron/Science Source/Photo Researchers.
bacteria Neisseria meningitidis que muestra esta imagen, produce meningitis bacteriana así como otras enfermedades. Su carácter Gram negativo se debe a su incapacidad para captar un tipo específico de colorante bacteriano denominado tinción de Gram. La
Enciclopedia Microsoft ® Encarta ® 2002. © 1993-2001 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos. TektoffMerieux/CNRI/Science Source/Photo Researchers, Inc
Neiseria meningitidis University of MissouriColumbia, 1998: http://www.missouri.edu/~mmiwww/slides.htm
COOH
NH 2 N
H L - Triptofano
COOH
O N
N
DESAMINACIÓN
H
H
Indolpiruvico
Indol
H C O N
H Indolacetaldehído
CH3 COOH N
H
N
H Ácido Indolacético(indolacetato). Incubación de corto tiempo
FINALIZAR
Escatol (metilindol) incubación de largo término
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
MENÚ
G L U C O L I S I S 2 ADP
Glucosa
2
fosfoenolpiruvato
2 ATP ADP
ATP
2
piruvato H2O 2 2-fosfoglicerato
Glucosa-6-fosfato
2 3-fosfoglicerato
Fructosa-6-fosfato ATP
ADP
Fructosa-1,6-bifosfato
2 ADP
2 1,3-bifosfoglicerato 2 NAD 2 PO4
Dihidroxiacetona fosfato
2 ATP
3-fosfogliceraldehído
2 NADH
NADH
NAD
CoA
Piruvato
CoA
CO2
Acetil CoA
CICLO
DE KREBS
oxalacetato
citrato
NADH NAD
malato isocitrato NAD
H2O
CO2 NADH
fumarato
Alfa-cetoglutarato
FADH2
NAD
FAD
NADH
succinato
CO2 CoA
Succinil CoA CoA
GTP
GDP
VIA HEXOSA MONOFOSFATO NADP
Fructosa-5-P
Ribulosa-5-P Gliceraaldehído-3-P
CO2
Eritrosa-4-P
NADPH
Fructosa-5-P
5-P-gluconato
Sedoheptulosa-7-P
NADPH
Gliceraldehído-3-P
NADP
Xilosa-5-P
Glucosa-6-fosfato
Ribosa-5-p
Glucosa GLUCOLISIS
Microbial Systematics,2002 http://www.umanitoba.ca/faculties/science/microbiology/staff/cameron/60_347.htm
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
Microbial Systematics,2002 http://www.umanitoba.ca/faculties/science/microbiology/staff/cameron/60_347.htm
Microbial Systematics,2002 http://www.umanitoba.ca/faculties/science/microbiology/staff/cameron/60_347.htm
Microbial Systematics,2002 http://www.umanitoba.ca/faculties/science/microbiology/staff/cameron/60_347.htm
Microbial Systematics,2002 http://www.umanitoba.ca/faculties/science/microbiology/staff/cameron/60_347.htm
Bacillus subtillis
Microbiology lab index, 2002: http://www.austin.cc.tx.us/microbugz/03morphology.html
Proteus vulgaris
Streptococcus pyogenes
Microbiology lab index, 2002: http://www.austin.cc.tx.us/microbugz/03morphology.html
Staphylococcus aureus
University of Missouri-Columbia, 1998: http://www.missouri.edu/~mmiwww/slides .htm
Staphylococcus aureus
Streptococcus viridans
Staphylococcus epidermidis Streptococcus pyogenes
Streptococcus faecalis
Homepage of Microbiologia clínica, 2000 http://www.saudetotal.com/microbiologia/colcocos.htm#topo
Streptococcus pneumoniae
En algunos casos es necesario sembrar una muestra para conocer el número de células viables o vivas, en este caso bacterias. Para ello se realiza entre otros métodos el vaciado en placa. Para obtener el número apropiado de colonias, usualmente se debe diluir la muestra a contar. Es común usar varias diluciones decimales de la muestra. Para la dilución se toma 0.1 ml de muestra problema y 9.9 ml de diluyente. En la mayor parte de los casos se necesita realizar diluciones seriadas. Cuando se hacen diluciones es importante que se utilice una pipeta diferente para cada dilución, aun cuando sea de la misma muestra. Las cuales deben estar esterilizadas previamente al igual que todo el material que se utilizará. Esto se debe a que la muestra inicial, que contiene la mayor cantidad de organismos, no se expulsó a todos los microorganismos de la pipeta al expulsar el contenido de esta. Los organismos que se adhieren a las paredes de la pipeta pueden ser arrastrados fuera en diluciones posteriores y ocasionar un serio error en la cuenta final que se obtiene. El número de colonias obtenidas sobre una placa no depende solamente de la cantidad del inóculo, sino también de los adecuado del medio de cultivo y de las condiciones de incubación. No todas las células depositadas sobre la placa formarán colonias a la misma velocidad y si se usa un tiempo corto de incubación, se puede obtener menos del máximo de colonias. El recuento de viables está sujeto a gran error. Si se desean cuentas exactas, se debe tener gran cuidado y se deben preparar muchas placas por duplicado. Para expresar el resultado, el recuento de viables se expresa como el número de unidades formadoras de colonias (UFC).