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Protocolo de validación Diclofenaco potásico, tabletas 50mg Estudiantes Uniatlantico

Gisela Hernández Oquendo Bernando Polo Flórez Brenda Suarez Paternina Angélica Tovar Jiménez Kelly Valderrama UNIVERSIDAD DEL ATLÁNTICO

2014-2

PROTOCOLO DE VALIDACIÓN Protocolo de validación del método analítico para la valoración de Diclofenaco potásico, tabletas por 50mg

Código: PVD-14 Versión: 001 Página: 2 de 33

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Elaborado por: Brenda Suarez Paternina Fecha: 29/11/14

Revisado por: Gisela Hernández Oquendo Fecha: 29/11/14

Aprobado por: Armando Bermúdez Fecha: 29/11/14

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Tabla de contenido 1.

OBJETIVO .................................................................................................................... 5

2.

ALCANCE ..................................................................................................................... 5

3.

RESPONSABLES ....................................................................................................... 5

4.

FUNDAMENTO DEL MÉTODO ............................................................................... 5

5.

PARÁMETROS DE DESEMPEÑO DEL MÉTODO ANALÍTICO ........................ 6

6.

MATERIALES .............................................................................................................. 6

7.

MUESTRA .................................................................................................................... 8 7.1 Productos ................................................................................................................... 8 7.2 Placebos ..................................................................................................................... 8

8.

EQUIPOS ...................................................................................................................... 8

9.

METODO DE ANALISIS ............................................................................................ 8 9.1

Método de análisis del producto final. .......................................................... 8

9.1.1 Preparación de soluciones ............................................................................... 8 10.

PARÁMETROS A EVALUAR .............................................................................. 11 10.1 SELECTIVIDAD ................................................................................................ 11 10.2 SELECTIVIDAD – INDICADORES DE ESTABILIDAD ......................... 13 10.2.2

Solución Stock de Preparación del Placebo .............................. 13

10.2.3

Solución Stock muestra............................................................... 13

10.2.4

Solución Stock materia prima ..................................................... 14

10.3 LINEALIDAD ......................................................................................... 16 10.3.1

Soluciones .................................................................................... 16

10.3.2

Procedimiento .............................................................................. 19

10.3.3

Cálculos. ....................................................................................... 20

10.3.4

Criterio de aceptación .................................................................. 21

10.3.5

Reportar los resultados ............................................................... 21

10.4 EXACTITUD…………………………………………………………………..21 Elaborado por: Brenda Suarez Paternina Fecha: 29/11/14

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10.5 PRECISIÓN……..……………………………………………………………24 10.5.1 PRECISIÓN INSTRUMENTAL ..................................................... 24 10.5.2

REPETIBILIDAD ............................................................................ 25

10.5.3

PRECISIÓN INTERMEDIA ............................................................ 26

10.6 ROBUSTEZ…………………………………………………………………...28 ANEXOS…………………………………………………………………………...….3029 TABLA 16. Reporte de linealidad ................................................................................... 29 TABLA 17. Reporte de exactitud .................................................................................... 30 TABLA 18. Reporte de repetibilidad .............................................................................. 31 TABLA 19. Reporte precisión intermedia ...................................................................... 31 TABLA 21. Reporte de robustez..................................................................................... 32

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1. OBJETIVO Validar el método analítico utilizado para la valoración de Diclofenaco Potásico, en tabletas por 50mg.

2. ALCANCE El protocolo describe la validación del método analítico de valoración por Cromatografía Liquida de Alta Resolución (HPLC), para el principio activo Diclofenaco potásico, en la forma farmacéutica de tabletas de 50 mg.

3. RESPONSABLES El personal descrito a continuación será responsable de:  Analista:  Ejecutar los pasos establecidos en el protocolo de validación y dejar evidencia documentada de las pruebas desarrolladas.  Documentar todos los resultados que se encuentren fuera de las especificaciones.  Coordinador de validación de métodos analíticos:  Elaborar y verificar el cumplimiento del protocolo.  Elaborar el reporte de validación.  Jefe de desarrollo analítico:  Conocer el procedimiento establecido en el protocolo y vigilar el cumplimiento del mismo.  Jefe de cumplimiento:  Aprobar el protocolo y el reporte de validación. 

4. FUNDAMENTO DEL MÉTODO Para la cuantificación de Diclofenaco potásico en tableta, se utilizará la técnica de Cromatografía Liquida De Alta Resolución, comparando con un estándar de concentración conocida.

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5. PARÁMETROS DE DESEMPEÑO DEL MÉTODO ANALÍTICO Las características de desempeño a valorar en el método analítico corresponden a la categoría I y se relacionan a continuación:  Selectividad  Especificidad  Linealidad  Exactitud  Precisión  Repetibilidad  Precisión intermedia  Robustez

6. MATERIALES 6.1 Reactivos Los reactivos utilizados durante la validación del método de valoración de Diclofenaco potásico tabletas son los siguientes: Tabla 1. Reactivos

REACTIVOS Solución amortiguadora de fosfato Fase móvil

Diluyente Solución de resolución

       

Ácido fosfórico Acido monobásico de sodio Metanol Solución amortiguadora de fosfato. Metanol Agua ftalato de dietilo ER Compuesto relacionado A de Diclofenaco USP

6.2 Materias primas Las materias primas que se utilizaran durante la ejecución del este protocolo, son las siguientes: Elaborado por: Brenda Suarez Paternina Fecha: 29/11/14

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FORMULACIÓN Tabla 2. Formulación Del Producto

Forma farmacéutica: Tabletas Código

Sustancias

20140921 20142511

Diclofenaco potásico Lactosa monohidrato Glicolato sódico de almidón (pH 5.5 – 7.5) Povidona Almidón de maíz alcohol isopropílico, anhidro refinado Estearato de magnesio

20142703 20141128 20145623 20148952 20146289

Concentració n: 50mg/ tableta Cantidades (mg/tableta) 50 85 22 5 4 0.073 mL 2

Figura 1. Estructura del diclofenaco de potasio

6.3 ESTÁNDAR Nombre: Código: Registro: Concentración: Fecha de Análisis Fecha de re-análisis: NOTA: conservar en envases impermeables, resistentes a la luz, almacenar a temperatura ambiente controlada.

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7. MUESTRA 7.1 Productos:

Tabla 3. Producto Nombre

Código

DICLOFENACO POTÁSICO 50 mg

7.2 Placebos: Los placebos a utilizar durante la valoración serán suministrados por el Departamento de Investigación y Desarrollo

8. EQUIPOS - Cromatógrafo liquido de alta resolución (HPLC) marca VWR HITACHI cromaster, modelo CM5210, serial 1102-005, bomba modelo 5110, automuestreador 5210, horno 5310, detector de arreglo de diodos 5430. - Centrifugadora - Balanza analítica -Agitador mecánico de vaivén

9. METODO DE ANALISIS 9.1 Método de análisis del producto final. 9.1.1 Preparación de soluciones 

Solución amortiguadora de fosfato de pH 2,5: Mezclar volúmenes iguales de ácido fosfórico 0,01 M y fosfato monobásico de sodio 0,01 M.

NOTA: Si fuera necesario, ajustar con porciones adicionales de los componentes adecuados a un pH de 2,5 +0,2. 

Fase móvil: Preparar una mezcla filtrada y desgasificada de metanol y una solución amortiguadora de fosfato de pH 2,5 en una proporción de 70: 30.

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NOTA: Hacer ajustes si fuera necesario; por lo que es necesario remitirse al capítulo Aptitud del sistema en Cromatografía 

Diluyente: Preparar una mezcla de metanol y agua en una proporción de 70: 30.



Preparación estándar: Disolver una cantidad pesada con exactitud, de ER Diclofenaco Potásico USP en Diluyente, y diluí r cuantitativamente, en diluciones sucesivas si fuera necesario, para obtener una solución con una concentración conocida de aproximadamente 0.5mg por mL.



Preparación de valoración: Pesar y pulverizar finamente no menos de 20 Tabletas. Transferir una porción del polvo, pesada con exactitud, que equivalga aproximadamente a 50 mg de Diclofenaco potásico, a un matraz volumétrico de 100 mL. Agregar aproximadamente 70 mL de Diluyente, mezclar durante 60 minutos, diluir a volumen con Diluyente, mezclar y centrifugar.



Solución de resolución: Preparar una solución en Diluyente que contenga 0.4 mg por mL de ftalato de dietilo, 0,5 mg por mL de ER Diclofenaco Potásico USP y 37,5 mg por mL de ER Compuesto Relacionado A de Diclofenaco USP.

9.1.2 Sistema cromatográfico El cromatógrafo debe tener las siguientes condiciones: Detector: 254 nm Columna: 4,6 mm x 6,25 cm con material de relleno L7 (Octadecilsilano) de 5 mm Velocidad de Flujo: 1 mL por minuto

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9.1.3 Procedimiento Tabla 4. Orden de Inyección y test de idoneidad del sistema ORDEN SOLUCIÓN NUMERO DE TEST DE ESPECIFICACIÓN INYECCIONES ADECUABILIDAD Solución N/A N/A 1 diluyente 1 2

Solución de resolución

1

Resolución

5

RSD de las áreas.

3

Solución estándar

4

Muestra (3 1 por réplicas) replica

cada RSD de las áreas.

La resolución, R, entre el ftalato de dietilo y el compuesto relacionado A de Diclofenaco no es menor de 2,5, y la resolución, R, entre el compuesto relacionado A de Diclofenaco y el Diclofenaco no es menor de 3,5. La desviación estándar relativa para inyecciones repetidas (5) no es más de 2,0%. La desviación estándar relativa para inyecciones repetidas (5) no es más de 2,0%.

9.1.4 Cálculos Para determinar la cantidad, en mg, de Diclofenaco potásico en cada Tableta tomada, se debe aplicar la siguiente formula: Elaborado por: Brenda Suarez Paternina Fecha: 29/11/14

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(

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𝑽𝑪 𝒓𝒖 )( ) 𝟐𝟎 𝒓𝒔

En donde: V: es el volumen del matraz empleado para preparar la preparación de valoración. C: es la concentración, en mg por mL, de ER Diclofenaco Potásico USP en la Preparación Estándar. 𝑟𝑢 : Área de pico de Diclofenaco en el cromatograma de la Solución muestra. 𝑟𝑠 : Área de pico de Diclofenaco en el cromatograma de la Solución Estándar. 10. PARÁMETROS A EVALUAR En esta validación se tendrán en cuentan aquellos parámetros sugeridos por el capítulo de la USP 37 NF 32 Validación de procedimientos farmacopeicos con relación a la categoría uno “Procedimientos analíticos para la cuantificación de los compones principales de fármacos a granel o ingredientes activo en productos farmacéuticos terminados”. Estos parámetros son: Selectividad, Linealidad, Exactitud (Porcentaje recuperado), precisión (Precisión instrumental, repetibilidad y precisión intermedia), estabilidad de la muestra y robustez. 10.1 SELECTIVIDAD Para el desarrollo de la prueba de selectividad se elaborará un placebo de acuerdo a la formulación del producto como se indica a continuación:

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Tabla 5. Formulación Del Producto Forma farmacéutica: Tabletas Código 20140921 20142511 20142703 20141128 20145623 20148952 20146289

Sustancias Diclofenaco potásico Lactosa monohidrato Glicolato sódico de almidón (pH 5.5 – 7.5) Povidona Almidón de maíz alcohol isopropílico, anhidro refinado Estearato de magnesio

Concentración: 50mg/ tableta Cantidades (mg/tableta) 50 85 22 5 4 0.073 mL 2

10.1.1 Solución estándar de Diclofenaco potásico: Remitirse al numeral 9.1.1 10.1.2 Solución Stock de Preparación del Placebo (Diclofenaco potásico 50 mg) Tomar un peso equivalente a 20 tabletas del placebo y trasferir a un matraz aforado de 100 mL sonicar

y agitar constante hasta la disolución total de la

cantidad de placebo. Dejar reposar y posteriormente aforar a volumen con la mezcla metanol /agua. -Solución Placebo (Diclofenaco potásico 50 mg): Tomar una alícuota de 2ml de la solución stock de la preparación del placebo y transferirla a un matraz volumétrico de 100 mL, aforar a volumen con la solución de diluyente y mezclar, filtrar la solución con filtros GHP. De esta forma se obtiene soluciones con concentraciones teóricas de 0.67mg/ml Elaborado por: Brenda Suarez Paternina Fecha: 29/11/14

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10.1.3 Procedimiento El proceso de inyección de las soluciones se realizara atendiendo al siguiente orden: Tabla 6. Orden de inyección Solución diluyente Solución de resolución Solución estándar Solución diluyente Solución Placebo (Presentación de 50mg) Solución diluyente Solución estándar

1 Inyección 1 Inyección 3 Inyección 2 Inyección 2 Inyección 2 Inyección 1 Inyección

10.2 SELECTIVIDAD – INDICADORES DE ESTABILIDAD 10.2.1 Solución estándar de Diclofenaco potásico: Remitirse al numeral 9.1.1 10.2.2 Solución Stock de Preparación del Placebo Tomar un peso equivalente a 20 tabletas del placebo y trasferir a un matraz aforado de 100 mL sonicar y agitar constante hasta la disolución total de la cantidad de placebo. Dejar reposar y posteriormente aforar a volumen con la mezcla metanol /agua. 10.2.3 Solución Stock muestra Tomar un peso equivalente a 20 tabletas del producto y trasferir a un matraz aforado de 100 mL sonicar y agitar constante hasta la disolución total de la cantidad del producto. Dejar reposar y posteriormente aforar a volumen con la mezcla metanol/ agua.

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10.2.4 Solución Stock materia prima Pesar 1000 mg de diclofenaco potásico y transferir a un matraz volumétrico de 100mL agitar constante hasta la disolución total de la cantidad de materia prima. Dejar reposar

y posteriormente aforar a volumen con

la mezcla

metanol / agua. Una vez preparadas las soluciones stock se tomaran alícuotas tal y como se enuncia en las siguientes tablas para la realización de la evaluación respectiva: Tabla 7. Condiciones de degradación Solución Stock Placebo Código de Identificación

Solución Stock

Alícuota (mL)

Condición

5.0

100

Normal

5.0

100

Medio ácido

5.0

100

Medio básico

5.0

100

Oxidativas

100

Calor

100

Luz solar

Placebo de tabletas de 5.0 50 mg de diclofenaco 5.0

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Volumétrica final (mL)

5.0

100

5.0

100

4.0

100

Tratamiento Ninguno Adicionar 10mL HCl 0.1N, y calentar a 70°C en baño de agua, por 24 horas Adicionar 10mL NaOH 0.1N, y calentar a 70°C en baño de agua, por 24 horas Adicionar 10mL de Peróxido de Hidrogeno al 3% (v/v) y calentar a 70°C por 48 horas. Calentar a 70°C por 48horas

Exponer por 24 horas en una volumétrica transparente, a la luz solar directa. Exponer por 24 horas en una Luz 254nm volumétrica transparente, a la luz solar directa. Exponer por 24 horas en una Luz 365nm volumétrica transparente, a la luz solar directa. Adicionar 1mL de solución de Oxidativas tricloruro férrico al 1% (w/v) y calentar a 70°C por 12 horas.

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Tabla 8. Condiciones de degradación Solución Stock muestra Código de Identificación

Solución Stock

Muestra de 50mg

Alícuota (mL)

Volumétrica final (mL)

Condición

Tratamiento

5.0

100

Normal

Ninguno

5.0

100

Medio ácido

5.0

100

Medio básico

5.0

100

Oxidativas

5.0

100

Calor

5.0

100

Luz solar

5.0

100

Luz 254nm

5.0

100

Luz 365nm

4.0

100

Oxidativas

Adicionar 10mL HCl 0.1N, y calentar a 70°C en baño de agua, por 24 horas Adicionar 10mL NaOH 0.1N, y calentar a 70°C en baño de agua, por 24 horas Adicionar 10mL de Peróxido de Hidrogeno al 3% (v/v) y calentar a 70°C por 48 horas. Calentar a 70°C por 48horas Exponer por 24 horas en una volumétrica transparente, a la luz solar directa. Exponer por 24 horas en una volumétrica transparente, a la luz solar directa. Exponer por 24 horas en una volumétrica transparente, a la luz solar directa. Adicionar 1mL de solución de tricloruro férrico al 1% (w/v) y calentar a 70°C por 12 horas.

Tabla 9. Condiciones de degradación Solución Stock Materia prima Código de Identificación

Solución Stock

Muestra de 50mg

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Alícuota (mL)

Volumétrica final (mL)

Condición

Tratamiento

5.0

100

Normal

Ninguno

5.0

100

Medio ácido

Adicionar 10mL HCl 0.1N, y calentar a 70°C en baño de agua, por 24 horas

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Aprobado por: Armando Bermúdez Fecha: 29/11/14

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5.0

100

Medio básico

5.0

100

Oxidativas

5.0

100

Calor

5.0

100

Luz solar

5.0

100

Luz 254nm

5.0

100

Luz 365nm

4.0

100

Oxidativas

Adicionar 10mL NaOH 0.1N, y calentar a 70°C en baño de agua, por 24 horas Adicionar 10mL de Peróxido de Hidrogeno al 3% (v/v) y calentar a 70°C por 48 horas. Calentar a 70°C por 48horas Exponer por 24 horas en una volumétrica transparente, a la luz solar directa. Exponer por 24 horas en una volumétrica transparente, a la luz solar directa. Exponer por 24 horas en una volumétrica transparente, a la luz solar directa. Adicionar 1mL de solución de tricloruro férrico al 1% (w/v) y calentar a 70°C por 12 horas.

10.2.5 Reporte de Resultados Reportar los resultados obtenidos en la tabla 20. 10.3 LINEALIDAD 10.3.1 Soluciones Solución Stock Estándar 1: Transferir aproximadamente 250 mg del Estándar de diclofenaco potásico, exactamente pesados, a una volumétrica de 100 mL. Aforar a volumen con Solución Diluyente y mezclar. Rotular como Solución Stock Estándar 1. (Esta solución contiene una concentración teórica de aproximadamente 2.5 mg ó 2500 µg de diclofenaco por mL). Elaborado por: Brenda Suarez Paternina Fecha: 29/11/14

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Solución Stock Estándar 2: Transferir aproximadamente 80 mL del Solución Stock Estándar 1 de diclofenaco potásico, exactamente pesados, a una volumétrica de 100-mL. Aforar a volumen con Solución Diluyente y mezclar. Rotular como Solución Stock Estándar 2. (Esta solución contiene una concentración teórica de aproximadamente 2 mg ó 2000 µg de diclofenaco por mL).

Solución Estándar: Transferir una alícuota de 25 mL de la Solución Stock Estándar 2 a la respectiva volumétrica de 100 mL, aforar a volumen con Solución Diluyente y mezclar. No usar la solución después de 7 días de preparada. Filtrar una porción de cada solución, a través de filtro GHP de 0.45 µm de tamaño de poro. (Esta solución contiene una concentración teórica de aproximadamente 0.50 mg ó 500 µg de diclofenaco por mL).

Solución Nivel (50%): Transferir una alícuota de 5.0 mL de la Solución Stock Estándar 1 a la respectiva volumétrica de 50-mL, aforar a volumen con Solución Diluyente y mezclar. No usar la solución después de 7 días de preparada. Filtrar una porción de cada solución, a través de filtro GHP de 0.45 µm de tamaño de poro. (Esta solución contiene una concentración teórica de aproximadamente 0.25 mg ó 250 µg de diclofenaco por mL).

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Solución Nivel (80%): Transferir una alícuota de 10 mL de la Solución Stock Estándar 2 a la respectiva volumétrica de 50 mL, aforar a volumen con Solución Diluyente y mezclar. No usar la solución después de 7 días de preparada. Filtrar una porción de cada solución, a través de filtro GHP de 0.45 µm de tamaño de poro. (Esta solución contiene una concentración teórica de aproximadamente 0.4 mg ó 400 µg de diclofenaco por mL).

Solución Nivel (100%): Transferir una alícuota de 25 mL de la Solución Stock Estándar 2 a la respectiva volumétrica de 100 mL, aforar a volumen con Solución Diluyente y mezclar. No usar la solución después de 7 días de preparada. Filtrar una porción de cada solución, a través de filtro GHP de 0.45 µm de tamaño de poro. (Esta solución contiene una concentración teórica de aproximadamente 0.50 mg ó 500 µg de diclofenaco por mL).

Solución Nivel (120%): Transferir una alícuota de 15 mL de la Solución Stock Estándar 2 a respectivas volumétricas de 50 mL, aforar a volumen con Solución Diluyente y mezclar. No usar la solución después de 7 días de preparada. Filtrar una porción de cada solución, a través de filtro GHP de 0.45 µm de tamaño de poro. (Esta solución contiene una concentración teórica de aproximadamente 0.6 mg ó 600 µg de diclofenaco por mL). Elaborado por: Brenda Suarez Paternina Fecha: 29/11/14

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Solución Nivel (150%): Transferir una alícuota de 15 mL de la Solución Stock Estándar 1 a la respectiva volumétrica de 50 mL, aforar a volumen con Solución Diluyente y mezclar. No usar la solución después de 7 días de preparada. Filtrar una porción de cada solución, a través de filtro GHP de 0.45 µm de tamaño de poro. (Esta solución contiene una concentración teórica de aproximadamente 0.75 mg ó 750 µg de diclofenaco por mL). 10.3.2 Procedimiento El procedimiento es llevado a cabo usando la metodología analítica descrita en el ítem 8.

Inyectar las soluciones en el orden de inyección siguiente:

Tabla 10. Orden de inyección de soluciones Solución Diluyente Resolución Estándar Estándar 1 Nivel 50% Nivel 50% Nivel 50% Nivel 80% Nivel 80% Nivel 80% Nivel 100%

Replicas 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

# Inyección 1 1 5 1 1 1 1 1 1 1 1

Elaborado por: Brenda Suarez Paternina Fecha: 29/11/14

Revisado por: Gisela Hernández Oquendo Fecha: 29/11/14

Aprobado por: Armando Bermúdez Fecha: 29/11/14

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PROTOCOLO DE VALIDACIÓN

Versión: 001

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Nivel 100% Nivel 100% Nivel 120% Nivel 120% Nivel 120% Nivel 150% Nivel 150% Nivel 150% Estándar 1

1 1 1 1 1 1 1 1 1

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1 1 1 1 1 1 1 1 1

10.3.3 Cálculos. Elabore una gráfica de regresión lineal con las concentraciones versus las áreas de cada solución, y calcule los siguientes valores empleando el método de los mínimos cuadrados: 

Coeficiente de Correlación: (r)



Coeficiente de determinación: (r2)



Intercepto: (a)



Pendiente: (b)



Factor de respuesta: (f)



Desviación estándar relativa de los factores de respuesta



Desviación estándar del intercepto: (Sa)



Varianza: (S2yx)



Desviación estándar de la pendiente: (Sb)



Desviación estándar del intercepto: (Sa)



La regresión lineal y el valor nominal de la ecuación al 100% (Obtenido a

partir de la ecuación). 

Intercepto expresado como porcentaje de 100%.

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Revisado por: Gisela Hernández Oquendo Fecha: 29/11/14

Aprobado por: Armando Bermúdez Fecha: 29/11/14

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Desviación estándar residual (RSD).

10.3.4 Criterio de aceptación 

Coeficiente de correlación: (r)

r≥0.990 

Coeficiente de determinación: (r2)

r2≥0.980 

Diagrama de residuales

La distribución de los puntos debe ser al azar y no refleja ninguna tendencia 

Prueba de la pendiente

La desviación estándar relativa (RSD) de los factores de respuesta es menor o igual a 2.0% 

Prueba Proporcionalidad:

El valor de la intersección, expresado como un porcentaje del valor y del 100%, es inferior o igual al 2,0%. 

La desviación estándar residual de la intersección es menor que o igual a

2.0%. 10.3.5 Reportar los resultados Reportar los resultados obtenidos en la tabla 16.

10.4 EXACTITUD DEL MÉTODO Este para metro es medido en términos de porcentaje de recuperación.

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Revisado por: Gisela Hernández Oquendo Fecha: 29/11/14

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Preparación de la solución Stock enriquecida (Diclofenaco potásico 50 mg): Tomar un peso equivalente a 20 tabletas del placebo y trasferir a un matraz aforado de 200 mL, agregar 1000 mg de diclofenaco potásico ER, sonicar y agitar constante hasta la disolución total de la cantidad de placebo. Dejar reposar y posteriormente aforar a volumen con la mezcla metanol /agua. SOLUCIÓN NIVEL 50% DICLOFENACO POTÁSICO 50 mg (EXACTITUD): Transferir una alícuota de 5 mL de la solución Stock enriquecida a una volumétrica de 100 mL, aforar a volumen con Solución Diluyente y mezclar. Filtrar una porción de cada solución, a través de filtro GHP de 0.45 µm de tamaño de poro. (Esta solución contiene una concentración teórica de aproximadamente 0.25 mg ó 250 µg de diclofenaco por mL). SOLUCIÓN NIVEL 100% DICLOFENACO POTÁSICO 50 mg (EXACTITUD): Transferir una alícuota de 10 mL de la solución Stock enriquecida a una volumétrica de 100 mL, aforar a volumen con Solución Diluyente y mezclar. Filtrar una porción de cada solución, a través de filtro GHP de 0.45 µm de tamaño de poro. (Esta solución contiene una concentración teórica de aproximadamente 0.5 mg ó 500 µg de Diclofenaco por mL).

SOLUCIÓN NIVEL 150% DICLOFENACO POTÁSICO 50 mg (EXACTITUD): Transferir una alícuota de 15 mL del sobrenadante de la solución Stock enriquecida a una volumétrica de 100 mL, aforar a volumen con Solución Diluyente y mezclar. Elaborado por: Brenda Suarez Paternina Fecha: 29/11/14

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Filtrar una porción de cada solución, a través de filtro GHP de 0.45 µm de tamaño de poro. (Esta solución contiene una concentración teórica de aproximadamente 0.75 mg ó 750 µg de Diclofenaco por mL). 10.4.1 Procedimiento Inyectar las soluciones en el sistema cromatográfico para cada presentación en el siguiente orden: Tabla 11. Orden de inyección de soluciones para exactitud Solución Diluyente Resolución Estándar Estándar 1 Estándar 2 SN 50% SN 50% SN 50% SN 100% SN 100% SN 100% SN 150% SN 150% SN 150%

Replicas 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

# Inyección 1 1 5 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

10.4.2 CÁLCULOS 

Calcular la concentración obtenida de diclofenaco potásico en cada nivel en

mg/mL Elaborado por: Brenda Suarez Paternina Fecha: 29/11/14

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Calcular el porcentaje diclofenaco potásico en cada nivel, mediante la

siguiente formula: 𝑃𝑜𝑟𝑐𝑒𝑛𝑡𝑎𝑗𝑒 (%) =



𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑂𝑏𝑡𝑒𝑛𝑖𝑑𝑎 (𝑚𝑔/𝑚𝐿) × 100 𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑇𝑒ó𝑟𝑖𝑐𝑎 (𝑚𝑔/𝑚𝐿)

Calcular el porcentaje recuperación promedio para el Diclofenaco en cada

nivel (Redondear los valores a una cifra significativa). 

Calcular el valor de RSD % para cada nivel (Redondeado a una sola cifra

significativa). 10.4.3 CRITERIO DE ACEPTACIÓN El porcentaje recuperación promedio para quince valores debe estar entre el rango de 90.0%-110.0%. El RSD total para el porcentaje recuperado de los quince datos obtenidos para ambas presentaciones debe ser menor o igual 2.0%. 10.4.4 REPORTE DE RESULTADOS Reportar los resultados obtenidos en la tabla 18.

10.5 PRECISIÓN 10.5.1 PRECISIÓN INSTRUMENTAL 10.5.1.1 Soluciones Ver preparación de soluciones en el item 9.1.1 de este protocolo. 10.5.1.2 PROCEDIMIENTO Elaborado por: Brenda Suarez Paternina Fecha: 29/11/14

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Inyectar las soluciones en el siguiente orden: Tabla 12. Orden de inyección de soluciones en precisión instrumental

Solución diluyente

1 Inyección

Solución de resolución

1 Inyección

Solución estándar

1 Inyección

10.5.1.3 Criterio de Aceptación El RSD ≤ 2.0%. 10.5.1.4 Reporte de Resultados Reportar los resultados obtenidos en la tabla x. 10.5.2 REPETIBILIDAD 10.5.2.1

Solución

Preparar seis soluciones muestra como se indica en el ítem 9.1.1. 10.5.2.2

Procedimiento

Inyectar las soluciones en el siguiente orden:

Tabla 13. Orden de inyección Solución diluyente

1 inyección

Solución de resolución

1 Inyección

Solución estándar

3 Inyección

Solución muestra

1 Inyección

Solución muestra

1 Inyección

Solución muestra

1 Inyección

Solución muestra

1 Inyección

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Solución muestra

1 Inyección

Solución muestra

1 Inyección

10.5.2.3

Criterio de Aceptación

El RSD ≤ 2.0%. 10.5.2.4

Reporte de resultados

Reportar los resultados obtenidos en la tabla 15. 10.5.3 PRECISIÓN INTERMEDIA 10.5.3.1

Solución

Preparar tres soluciones muestras como se describe en el item 9.1.1 por dos analista en tres días. 10.5.3.2

Procedimiento

Los factores a ser evaluados son: Analista:

Analista 1 y Analista 2

Días:

Día 1, día 2, dia 3

Inyectar las soluciones en el siguiente orden: Tabla 14. Orden de inyección Solución muestra (Analista 1 Día 1)

1 Inyección x 3 muestras

Solución diluyente

1 Inyección

Solución de resolución

1 Inyección

Solución estándar

1 Inyección

Solución muestra (Analista 1 Día 2)

1 Inyección x 3 muestras

Solución diluyente

1 Inyección

Solución de resolución

1 Inyección

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10.5.3.3

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Solución estándar

5 Inyección

Solución muestra (Analista 1 Día 3)

1 Inyección x 3 muestras

Solución diluyente

1 Inyección

Solución de resolución

1 Inyección

Solución estándar

5 Inyección

Solución muestra (Analista 2 Día 1)

1 Inyección x 3 muestras

Solución diluyente

1 Inyección

Solución de resolución

1 Inyección

Solución estándar

5 Inyección

Solución muestra (Analista 2 Día 2)

1 Inyección x 3 muestras

Solución diluyente

1 Inyección

Solución de resolución

1 Inyección

Solución estándar

5 Inyección

Solución muestra (Analista 2 Día 3)

1 Inyección x 3 muestras

Solución diluyente

1 Inyección

Solución de resolución

1 Inyección

Solución estándar

5 Inyección

Criterio de Aceptación

Valor total del RSD para todos los datos debe ser menor o igual al 2.0% 10.5.3.4

Reporte de Resultados

Reportar los resultados obtenidos en la tabla 19 10.6 ROBUSTEZ 10.6.1 Solución

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Se prepara la solución estándar y la tres soluciones muestra cómo se describe en el ítem 8.1.1. 10.6.2 Procedimiento Los parámetros del método analítico a modificar, en sus valores son resumidos en la tabla 9

Tabla 15. Parámetros de Robustez Parámetros

Valor 1

Valor 2*

Valor 3

Temperatura de la Columna (ºC)

25

30

35

Flujo (mL/min)

0.6

0.8

1.0

Volumen de Inyección (µL)

4

5

6

* Valores especificados en el método. Ítem 9.1.2

10.6.3 Cálculos Calcular los parámetros para el SST, y los mg por tableta en cada experimento, deben cumplir con las especificaciones indicadas en el método analítico.

10.6.4 Criterio de Aceptación Las especificaciones de la adecuabilidad del sistema (SST por sus siglas en inglés System Suitability Test) y los resultados para el producto terminado deben cumplir con lo indicado en el método analítico. 10.6.5 Reportar los resultados Reportar los resultados obtenidos en la tabla 21.

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ANEXOS REPORTE DE RESULTADOS PARA LINEALIDAD: Los resultados obtenidos durante la evaluación de la linealidad deberán ser registrados en el siguiente formato TABLA 16. Reporte de linealidad X (Concentración)

Y (área)

XY

X2

Y2

Factor de Respuesta (f) (Y/X)

50% 50% 50% 80% 80% 80% 100% 100% 100% 120% 120% 120% 150% 150% 150% Σ sumatoria

Coeficiente de Correlación (r) Intercepto (a) Pendiente (b) Varianza residual (S2y,x) Desviación estándar de la pendiente (Sb) Desviación estándar del intercepto (Sa)

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Ecuación de la línea recta Valor Nominal obtenido a partir de ecuación [(a)/Valor Nominal]x100 [(Sa)/Valor Nominal]x100 RSD de los factores de respuestas

REPORTE DE RESULTADOS PARA LA EXACTITUD Los resultados de la evaluación de la exactitud deberán ser reportados en el siguiente formato

TABLA 17. Reporte de exactitud NIVEL (%)

I (50%)

No. REPLICAS 1 2 3

RECUPERACION (%)

% RSD

El promedio recuperado es entre 90.0%-110.0% para cada nivel evaluado y el RSD para los nueve niveles es menor o igual a 2.0%

Promedio

II (100%)

1 2 3 Promedio

III (150%)

CRITERIO ACEPTACIÓN

1 2 3 Promedio

Referencia

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CONCLUSION

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REPORTE DE RESULTADOS PARA LA REPETIBILIDAD Los resultados de la evaluación de la repetibilidad deberán ser reportados en el siguiente formato TABLA 18. Reporte de repetibilidad Inyección Área No. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Referencia

RSD

Criterio de Aceptación

Conclusión

El RSD debe ser menor de 2.0%(verificar )

REPORTE DE RESULTADOS PARA LA PRECISIÓN INTERMEDIA TABLA 19. Reporte precisión intermedia Resultados de la Precisión Intermedia Equipo

Día 1

Día 2

Dia 3

Analista 1 HPLC

Promedio

Promedio

RSD

RSD

Promedio

Promedio

RSD

RSD

promedio

Analista 2

Referencia

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Tabla 20. Reporte de estabilidad de soluciones Tiempo de almacenamiento Criterio de Conclusi condición 1 Replica No. Inicial (%y0) Aceptación ón 4 días 8 días 1 di (para 2 cada 3 tiempo) es y1menor o Promedio y0-promedio= y2-promedio= promedio= igual a di=[yipromedio2.0% d1= d2= y0promedio]

REPORTE DE LOS RESULTADOS DE ROBUSTEZ TABLA 21. Reporte de robustez Resultados Parámetros

Resolución

Especificación

Exp 1

Nominal

La resolución, R, entre el ftalato de dietilo y el compuesto relacionado A de Diclofenaco no es menor de 2,5, y la resolución, R, entre el compuesto relacionado A de Diclofenaco y el Diclofenaco no es menor de 3,5.

Desviación Estándar La desviación estándar relativa Relativa de para inyecciones repetidas (5) no las Áreas es más de 2,0%. (RSD) Asimetría

La asimetría para el pico de diclofenaco debe ser menor de 2.0.

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Revisado por: Gisela Hernández Oquendo Fecha: 29/11/14

Aprobado por: Armando Bermúdez Fecha: 29/11/14

Exp 2

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FORMATO DE MODIFICACIONES En caso de presentarse modificaciones en las características descritas en este protocolo, estas deberán ser notificadas en el registro que se presenta a continuación: Código No.

Numero de modificación

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Fecha de modificación

Descripción de la modificación

Revisado por: Gisela Hernández Oquendo Fecha: 29/11/14

Responsable para aprobar los cambios

Aprobado por: Armando Bermúdez Fecha: 29/11/14