• Author / Uploaded
• Aaron Saavedra

Citation preview

PNT: Rev: 0 Fecha Emisión 2015/09/19

PROCEDIMIENTO NORMALIZADO DE TRABAJO LCCM-FARMA MUNDI

Protocolo de Validación para el Método analítico de cuantificación de Acetaminofén 60 mg, Aspirina 400 mg y Cafeína 30 mg, tabletas Divina.

Página 1 de 22

PNT: Protocolo de Validación para el Método analítico de cuantificación de Acetaminofén 60 mg, Aspirina 400 mg y Cafeína 30 mg, tabletas Divina.

COPIA CONTROLADA [ ] NO CONTROLADA

Nº…………….

[ ]

DESTINATARIO:__________________________________ FECHA ENTREGA:____/____/____

Elaborado: Técnico Analista

Revisado: Jefe Fisicoquímica

Fecha: ____/____/____

Fecha: ____/____/____

Área

Aprobado: Gerente Control de Calidad

Fecha: ____/____/____

de

PROCEDIMIENTO NORMALIZADO DE TRABAJO LCCM-FARMA MUNDI

Protocolo de Validación para el Método analítico de cuantificación de Acetaminofén 60 mg, Aspirina 400 mg y Cafeína 30 mg, tabletas Divina.

PNT: Rev: 0 Fecha Emisión 2015/09/19 Página 2 de 22

INDICE

Nº

Descripción

Página

PROCEDIMIENTO NORMALIZADO DE TRABAJO LCCM-FARMA MUNDI

Protocolo de Validación para el Método analítico de cuantificación de Acetaminofén 60 mg, Aspirina 400 mg y Cafeína 30 mg, tabletas Divina.

PNT: Rev: 0 Fecha Emisión 2015/09/19 Página 3 de 22

I. Descripción del método para Análisis Químico de Tabletas Divina que contienen en su formulación; Acetaminofén 60 mg, Aspirina 400 mg y Cafeína 30 mg. a. Fase Móvil: En un Matraz Volumétrico de 1000 ml, agregar 690 ml de agua Grado HPLC, seguidamente adicionar Ácido acético glacial, una cantidad equivalente a 30 ml, obteniendo así una relación de 72 partes entre agua y Ácido acético glacial, posteriormente Agregar metanol Grado HPLC equivalente a 280 ml. Filtrar y desgasificar usando filtros de membranas de Nylon, Tamaño de poro 0.45 µm. b. Mezcla de Disolventes: En un Balón de 1000 ml, agregar 950 ml de Metanol Grado HPLC. Posteriormente, añadir 50 mL de Ácido acético Glacial. c.

Preparación de Soluciones Estándar. 1. Solución Madre del Estándar: Pesar con exactitud 0.025 g del Estándar de Referencia de Acetaminofén, 0.1667 g del Estándar de Referencia de Aspirina y 0.0125 g del Estándar de Referencia de Cafeína. Llevar cada Estándar de referencia a un balón de 100 ml y aforar con Mezcla de Disolventes. 2. Preparación Estándar: Tomar 20 ml de la Solución Madre del Estándar y transferir a un Balón de 50 ml, diluir con Mezcla de Disolventes, mezclar y Aforar. Esta solución contendrá una concentración aproximada de 100 µg/ml de ER de Acetaminofén, 666 µg/ml de ER de Aspirina, y 50 µg/mL de ER de Cafeína.

d. Preparación de valoración para Acetaminofén 0.060g, Aspirina 0.40g y Cafeína 0.030g : Pesar con exactitud 20 tabletas que contienen 0.40 g de Aspirina, 0.060 g de Acetaminofén y 0.030 g de Cafeína, pulverizar en un mortero hasta obtener un polvo fino. Pesar con exactitud una porción del polvo que equivalga a aproximadamente a 1.6667 g de Aspirina, 0.250 g de Acetaminofén y 0.1250 g de Cafeína. Llevar a un matraz volumétrico de 100 ml las cantidades de polvo anteriormente pesadas, disolver con 20 ml de Mezcla de Disolvente. Someter a ultrasonido por un periodo de tiempo de 10 minutos. Agitar mecánicamente durante 10 minutos y Diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Transferir 2 ml de la solución anterior a un matraz volumétrico de 50 ml, y diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Filtrar las muestras con la ayuda de un Filtro de Jeringa, 0.45 µm. La solución final poseerá una concentración teórica de 100 µg/ml de ER de Acetaminofén, 666 µg/ml de ER de Aspirina, y 50 µg/ml de ER de Cafeína.

PROCEDIMIENTO NORMALIZADO DE TRABAJO LCCM-FARMA MUNDI

e.

Protocolo de Validación para el Método analítico de cuantificación de Acetaminofén 60 mg, Aspirina 400 mg y Cafeína 30 mg, tabletas Divina.

PNT: Rev: 0 Fecha Emisión 2015/09/19 Página 4 de 22

Sistema Cromatográfico:     

Columna Zorbax Eclipse Temperatura de la columna Longitud de onda analítica Flujo Volumen de inyección

C18 150 mm x 4.6 mm, 5 µm. 45 ± 1ºC. 275nm 1.5 ml / min. 10 µl

Nota: Realizar 5 inyecciones sucesivas de 10 µl, de la preparación del estándar. Después de cada inyección dejar correr los cromatogramas hasta obtener los tiempos de retención. Verificar que la desviación estándar relativa (DER) de las áreas de inyección sucesivas no es mayor de 2.0% II. Listado de los Reactivos Necesarios: Reactivo Pureza Agua grado HPLC Metanol grado HPLC Acido Acético Glacial III. Estándares Utilizados. Nombre ER Acetaminofén ER Acido Acetil Salicílico Acido Acético Glacial

Pureza

IV. Lista de Equipos e Instrumentación Requerida. Nombre del Equipo Modelo Cromatógrafos líquido de alta resolución VARIAN 920LC HPLC Columna PURSUIT XRS Balanza Analítica A&D ANDGH-120 Calibrada Espátula -----------------

Marca

Concentración

Lote

Marca

Serie EL08053903

13506973 -----------------

PROCEDIMIENTO NORMALIZADO DE TRABAJO LCCM-FARMA MUNDI

Protocolo de Validación para el Método analítico de cuantificación de Acetaminofén 60 mg, Aspirina 400 mg y Cafeína 30 mg, tabletas Divina.

Bomba de Vacío 2021B-01REV Campana de ----------------Extracción Aparato de Ultrasonido B3-R BARCSONIC V. Lista de Equipos/Equipos de seguimiento y Medición Calificados. Nombre del Equipo Modelo Cromatógrafos líquido de alta resolución VARIAN 920LC HPLC

PNT: Rev: 0 Fecha Emisión 2015/09/19 Página 5 de 22

080800000035 -----------------

Serie EL08053903

VI. Verificación de Registros de Calibración, Calificación y/o mantenimiento de los Equipos/Equipos de Seguimiento y Medición. Tabla de Verificación de Registros de Clasificación de Equipos de Seguimiento y Medición a Utilizar Clasificación Equipos

Periodicidad

Fecha de Ultima Calificación

Conforme/ No Conforme

Observaci ones

Cromatógrafos líquido de alta resolución HPLC Tabla de Verificación de Registros de Mantenimiento de los Equipos/Equipos de Seguimiento y Medición a Utilizar

Clasificación Equipos

Periodicidad

Fecha de Ultima Calificación

Conforme/ No Conforme

Observaci ones

Cromatógrafos líquido de alta resolución HPLC Tabla de Verificación de Registros de Calibración de Cristalería/Equipos de Seguimiento y Medición a Utilizar

PROCEDIMIENTO NORMALIZADO DE TRABAJO LCCM-FARMA MUNDI

Protocolo de Validación para el Método analítico de cuantificación de Acetaminofén 60 mg, Aspirina 400 mg y Cafeína 30 mg, tabletas Divina.

PNT: Rev: 0 Fecha Emisión 2015/09/19 Página 6 de 22

Clasificación Equipos/Cristalerí a

Periodicidad

Fecha de Ultima Calificación

Conforme/ No Conforme

Observaci ones

Balanza Analítica A&D Calibrada ANDGH-120 Cristalería Volumétrica a Utilizar VII. Parámetros de Validación del Método de Análisis Químico. 1. Validación para el Método analítico de Determinación Cuantitativa de Acetaminofén 60 mg, Aspirina 400 mg y Cafeína 30 mg, tabletas Divina. Considerando el método a validar, se ensayaran los siguientes parámetros:  Especificidad.  Estabilidad de la Muestra.  Linealidad e Intervalo.  Exactitud.  Precisión. 1.1. Especificidad. a. Preparación de la Fase Móvil, de la solución diluente, del sistema cromatográfico, procedimientos y cálculos del Método de Determinación Cuantitativa de Acetaminofén 60 mg, Aspirina 400 mg y Cafeína 30 mg, tabletas Divina. Ver punto I: Descripción del método para Análisis Químico de Tabletas Divina. b. Preparación del Estándar: Solución Madre del Estándar: Pesar con exactitud 0.025 g del Estándar de Referencia de Acetaminofén, 0.1667 g del Estándar de Referencia de Aspirina y 0.0125 g del Estándar de Referencia de Cafeína. Llevar cada Estándar de referencia a un balón de 100 ml y aforar con Mezcla de Disolventes. Preparación Estándar: Tomar 20 ml de la Solución Madre del Estándar y transferir a un Balón de 50 ml, diluir con Mezcla de Disolventes, mezclar y Aforar. Esta solución contendrá una concentración aproximada de 100 µg/ml de ER de Acetaminofén, 666 µg/ml de ER de Aspirina, y 50 µg/mL de ER de Cafeína. c. Preparación de la Muestra para Someter a Estrés:

PROCEDIMIENTO NORMALIZADO DE TRABAJO LCCM-FARMA MUNDI

Protocolo de Validación para el Método analítico de cuantificación de Acetaminofén 60 mg, Aspirina 400 mg y Cafeína 30 mg, tabletas Divina.

PNT: Rev: 0 Fecha Emisión 2015/09/19 Página 7 de 22

1. Pesar con exactitud 20 tabletas que contienen 0.40 g de Aspirina, 0.060 g de Acetaminofén y 0.030 g de Cafeína, pulverizar en un mortero hasta obtener un polvo fino. Pesar con exactitud una porción del polvo que equivalga a aproximadamente a 1.6667 g de Aspirina, 0.250 g de Acetaminofén y 0.1250 g de Cafeína. Llevar a un matraz volumétrico de 100 ml las cantidades de polvo anteriormente pesadas, disolver con 20 ml de Mezcla de Disolvente. Someter a ultrasonido por un periodo de tiempo de 10 minutos. Agitar mecánicamente durante 10 minutos, agregar 10 ml de Acido Clorhídrico 0.1N, Diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Calentar la solución anterior en horno a 40°C por cuatro horas. Transferir 2 ml de la solución anterior a un matraz volumétrico de 50 ml, y diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. 2. Pesar con exactitud 20 tabletas que contienen 0.40 g de Aspirina, 0.060 g de Acetaminofén y 0.030 g de Cafeína, pulverizar en un mortero hasta obtener un polvo fino. Pesar con exactitud una porción del polvo que equivalga a aproximadamente a 1.6667 g de Aspirina, 0.250 g de Acetaminofén y 0.1250 g de Cafeína. Llevar a un matraz volumétrico de 100 ml las cantidades de polvo anteriormente pesadas, disolver con 20 ml de Mezcla de Disolvente. Someter a ultrasonido por un periodo de tiempo de 10 minutos. Agitar mecánicamente durante 10 minutos, agregar 10 ml de Hidróxido de Sodio 0.1N, Diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Calentar la solución anterior en horno a 40°C por cuatro horas. Transferir 2 ml de la solución anterior a un matraz volumétrico de 50 ml, y diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. 3. Pesar con exactitud 20 tabletas que contienen 0.40 g de Aspirina, 0.060 g de Acetaminofén y 0.030 g de Cafeína, pulverizar en un mortero hasta obtener un polvo fino. Pesar con exactitud una porción del polvo que equivalga a aproximadamente a 1.6667 g de Aspirina, 0.250 g de Acetaminofén y 0.1250 g de Cafeína. Llevar a un matraz volumétrico de 100 ml las cantidades de polvo anteriormente pesadas, disolver con 20 ml de Mezcla de Disolvente. Someter a ultrasonido por un periodo de tiempo de 10 minutos. Agitar mecánicamente durante 10 minutos, agregar 10 ml de Peróxido de Hidrogeno 10 volúmenes, Diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Calentar la solución anterior en horno a 40°C por cuatro horas. Transferir 2 ml de la solución anterior a un matraz volumétrico de 50 ml, y diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. d. Preparación del Estándar para Someter a Estrés: 1. Pesar con exactitud 0.025 g del Estándar de Referencia de Acetaminofén, 0.1667 g del Estándar de Referencia de Aspirina y 0.0125 g del Estándar de Referencia de Cafeína. Llevar cada Estándar de referencia a un balón de 100 ml, agregar 10 ml de Acido Clorhídrico 0.1N, calentar en horno a 40°C por 4 horas, aforar con Mezcla de Disolventes. Tomar 20 ml de la Solución Madre del Estándar y transferir a un Balón de 50 ml, diluir con Mezcla de Disolventes, mezclar y Aforar.

PROCEDIMIENTO NORMALIZADO DE TRABAJO LCCM-FARMA MUNDI

Protocolo de Validación para el Método analítico de cuantificación de Acetaminofén 60 mg, Aspirina 400 mg y Cafeína 30 mg, tabletas Divina.

PNT: Rev: 0 Fecha Emisión 2015/09/19 Página 8 de 22

2. Pesar con exactitud 0.025 g del Estándar de Referencia de Acetaminofén, 0.1667 g del Estándar de Referencia de Aspirina y 0.0125 g del Estándar de Referencia de Cafeína. Llevar cada Estándar de referencia a un balón de 100 ml, agregar 10 ml de Hidróxido de Sodio 0.1N, calentar en horno a 40°C por 4 horas, aforar con Mezcla de Disolventes. Tomar 20 ml de la Solución Madre del Estándar y transferir a un Balón de 50 ml, diluir con Mezcla de Disolventes, mezclar y Aforar.

3. Pesar con exactitud 0.025 g del Estándar de Referencia de Acetaminofén, 0.1667 g del Estándar de Referencia de Aspirina y 0.0125 g del Estándar de Referencia de Cafeína. Llevar cada Estándar de referencia a un balón de 100 ml, agregar 10 ml de Peróxido de Hidrogeno 10 Volúmenes, calentar en horno a 40°C por 4 horas, aforar con Mezcla de Disolventes. Tomar 20 ml de la Solución Madre del Estándar y transferir a un Balón de 50 ml, diluir con Mezcla de Disolventes, mezclar y Aforar. 1.2. Estabilidad de la Muestra. a. Preparación de la Fase Móvil, de la solución diluente, del sistema cromatográfico, procedimientos y cálculos del Método de Determinación Cuantitativa de Acetaminofén 60 mg, Aspirina 400 mg y Cafeína 30 mg, tabletas Divina. Ver punto I: Descripción del método para Análisis Químico de Tabletas Divina. b. Preparación del Estándar: Solución Madre del Estándar: Pesar con exactitud 0.025 g del Estándar de Referencia de Acetaminofén, 0.1667 g del Estándar de Referencia de Aspirina y 0.0125 g del Estándar de Referencia de Cafeína. Llevar cada Estándar de referencia a un balón de 100 ml y aforar con Mezcla de Disolventes. Preparación Estándar: Tomar 20 ml de la Solución Madre del Estándar y transferir a un Balón de 50 ml, diluir con Mezcla de Disolventes, mezclar y Aforar. Esta solución contendrá una concentración aproximada de 100 µg/ml de ER de Acetaminofén, 666 µg/ml de ER de Aspirina, y 50 µg/mL de ER de Cafeína. c. Preparación de valoración para Acetaminofén 0.060g, Aspirina 0.40g y Cafeína 0.030g : Pesar con exactitud 20 tabletas que contienen 0.40 g de Aspirina, 0.060 g de Acetaminofén y 0.030 g de Cafeína, pulverizar en un mortero hasta obtener un polvo fino. Pesar con exactitud una porción del polvo que equivalga a aproximadamente a 1.6667 g de Aspirina, 0.250 g de Acetaminofén y 0.1250 g de Cafeína. Llevar a un matraz volumétrico de 100 ml las cantidades de polvo anteriormente pesadas, disolver con 20 ml de Mezcla de Disolvente. Someter a

PROCEDIMIENTO NORMALIZADO DE TRABAJO LCCM-FARMA MUNDI

Protocolo de Validación para el Método analítico de cuantificación de Acetaminofén 60 mg, Aspirina 400 mg y Cafeína 30 mg, tabletas Divina.

PNT: Rev: 0 Fecha Emisión 2015/09/19 Página 9 de 22

ultrasonido por un periodo de tiempo de 10 minutos. Agitar mecánicamente durante 10 minutos y Diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Transferir 2 ml de la solución anterior a un matraz volumétrico de 50 ml, y diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Filtrar las muestras con la ayuda de un Filtro de Jeringa, 0.45 µm. La solución final poseerá una concentración teórica de 100 µg/ml de ER de Acetaminofén, 666 µg/ml de ER de Aspirina, y 50 µg/ml de ER de Cafeína.

d. Procedimiento: Desarrollar el Método de Determinación Cuantitativa del producto realizando 3 replicas de la muestra por cada determinación y determinar el porcentaje recuperado de la preparación de la muestra recién preparada (inicialmente), después de 24 horas y después de 72 horas de su preparación, utilizando por cada día de análisis una solución del estándar recientemente preparada. 1.3. Linealidad e Intervalo del Sistema. Realizar por triplicado el siguiente procedimiento para obtener 3 curvas de linealidad. a. Preparación de la Fase Móvil, de la solución diluente, del sistema cromatográfico, procedimientos y cálculos del Método de Determinación Cuantitativa de Acetaminofén 60 mg, Aspirina 400 mg y Cafeína 30 mg, tabletas Divina. Ver punto I: Descripción del método para Análisis Químico de Tabletas

Divina. b. Preparación del Estándar: Solución Madre del Estándar: Pesar con exactitud 0.025 g del Estándar de Referencia de Acetaminofén, 0.1667 g del Estándar de Referencia de Aspirina y 0.0125 g del Estándar de Referencia de Cafeína. Llevar cada Estándar de referencia a un balón de 100 ml y aforar con Mezcla de Disolventes. Preparación Estándar: Tomar 20 ml de la Solución Madre del Estándar y transferir a un Balón de 50 ml, diluir con Mezcla de Disolventes, mezclar y Aforar. Esta solución contendrá una concentración aproximada de 100 µg/ml de ER de Acetaminofén, 666 µg/ml de ER de Aspirina, y 50 µg/mL de ER de Cafeína. c. Preparación de valoración para Acetaminofén 0.060g, Aspirina 0.40g y Cafeína 0.030g :  Pesar con exactitud 20 tabletas que contienen 0.40 g de Aspirina, 0.060 g de Acetaminofén y 0.030 g de Cafeína, pulverizar en un mortero hasta obtener un polvo fino. Pesar con exactitud una porción del polvo que equivalga a aproximadamente a 1.1667 g de Aspirina, 0.1750 g de

PROCEDIMIENTO NORMALIZADO DE TRABAJO LCCM-FARMA MUNDI

Protocolo de Validación para el Método analítico de cuantificación de Acetaminofén 60 mg, Aspirina 400 mg y Cafeína 30 mg, tabletas Divina.

PNT: Rev: 0 Fecha Emisión 2015/09/19 Página 10 de 22

Acetaminofén y 0.0875 g de Cafeína. Llevar a un matraz volumétrico de 100 ml las cantidades de polvo anteriormente pesadas, disolver con 20 ml de Mezcla de Disolvente. Someter a ultrasonido por un periodo de tiempo de 10 minutos. Agitar mecánicamente durante 10 minutos y Diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Transferir 2 ml de la solución anterior a un matraz volumétrico de 50 ml, y diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Filtrar las muestras con la ayuda de un Filtro de Jeringa, 0.45 µm. La solución final poseerá una concentración teórica de 70 µg/ml de ER de Acetaminofén, 466.68 µg/ml de ER de Aspirina, y 35 µg/ml de ER de Cafeína.  Pesar con exactitud 20 tabletas que contienen 0.40 g de Aspirina, 0.060 g de Acetaminofén y 0.030 g de Cafeína, pulverizar en un mortero hasta obtener un polvo fino. Pesar con exactitud una porción del polvo que equivalga a aproximadamente a 1.4167 g de Aspirina, 0.2125 g de Acetaminofén y 0.1063 g de Cafeína. Llevar a un matraz volumétrico de 100 ml las cantidades de polvo anteriormente pesadas, disolver con 20 ml de Mezcla de Disolvente. Someter a ultrasonido por un periodo de tiempo de 10 minutos. Agitar mecánicamente durante 10 minutos y Diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Transferir 2 ml de la solución anterior a un matraz volumétrico de 50 ml, y diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Filtrar las muestras con la ayuda de un Filtro de Jeringa, 0.45 µm. La solución final poseerá una concentración teórica de 85 µg/ml de ER de Acetaminofén, 566.68 µg/ml de ER de Aspirina, y 42.5 µg/ml de ER de Cafeína.  Pesar con exactitud 20 tabletas que contienen 0.40 g de Aspirina, 0.060 g de Acetaminofén y 0.030 g de Cafeína, pulverizar en un mortero hasta obtener un polvo fino. Pesar con exactitud una porción del polvo que equivalga a aproximadamente a 1.6667 g de Aspirina, 0.250 g de Acetaminofén y 0.1250 g de Cafeína. Llevar a un matraz volumétrico de 100 ml las cantidades de polvo anteriormente pesadas, disolver con 20 ml de Mezcla de Disolvente. Someter a ultrasonido por un periodo de tiempo de 10 minutos. Agitar mecánicamente durante 10 minutos y Diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Transferir 2 ml de la solución anterior a un matraz volumétrico de 50 ml, y diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Filtrar las muestras con la ayuda de un Filtro de Jeringa, 0.45 µm. La solución final poseerá una concentración teórica de 100 µg/ml de ER de Acetaminofén, 666 µg/ml de ER de Aspirina, y 50 µg/ml de ER de Cafeína.  Pesar con exactitud 20 tabletas que contienen 0.40 g de Aspirina, 0.060 g de Acetaminofén y 0.030 g de Cafeína, pulverizar en un mortero hasta obtener un polvo fino. Pesar con exactitud una porción del polvo que equivalga a aproximadamente a 1.9167 g de Aspirina, 0.2875 g de Acetaminofén y 0.1438 g de Cafeína. Llevar a un matraz volumétrico de 100 ml las cantidades de polvo anteriormente pesadas, disolver con 20 ml de Mezcla de Disolvente. Someter a ultrasonido por un periodo de tiempo de 10 minutos. Agitar mecánicamente durante 10 minutos y Diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Transferir 2 ml de la solución anterior a un matraz volumétrico de 50 ml, y diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Filtrar las muestras con la ayuda de un Filtro de Jeringa, 0.45 µm. La solución final poseerá una concentración teórica de

PROCEDIMIENTO NORMALIZADO DE TRABAJO LCCM-FARMA MUNDI

Protocolo de Validación para el Método analítico de cuantificación de Acetaminofén 60 mg, Aspirina 400 mg y Cafeína 30 mg, tabletas Divina.

PNT: Rev: 0 Fecha Emisión 2015/09/19 Página 11 de 22

115 µg/ml de ER de Acetaminofén, 766.68 µg/ml de ER de Aspirina, y 57.52 µg/ml de ER de Cafeína.

 Pesar con exactitud 20 tabletas que contienen 0.40 g de Aspirina, 0.060 g de Acetaminofén y 0.030 g de Cafeína, pulverizar en un mortero hasta obtener un polvo fino. Pesar con exactitud una porción del polvo que equivalga a aproximadamente a 2.1667 g de Aspirina, 0.3250 g de Acetaminofén y 0.1625 g de Cafeína. Llevar a un matraz volumétrico de 100 ml las cantidades de polvo anteriormente pesadas, disolver con 20 ml de Mezcla de Disolvente. Someter a ultrasonido por un periodo de tiempo de 10 minutos. Agitar mecánicamente durante 10 minutos y Diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Transferir 2 ml de la solución anterior a un matraz volumétrico de 50 ml, y diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Filtrar las muestras con la ayuda de un Filtro de Jeringa, 0.45 µm. La solución final poseerá una concentración teórica de 130 µg/ml de ER de Acetaminofén, 866.68 µg/ml de ER de Aspirina, y 65 µg/ml de ER de Cafeína.  Desarrollar el método de determinación cuantitativa en sentido creciente de concentración 70, 85, 100, 115 y 130%, tomando como 100% la concentración de análisis rutinario del producto y haciendo lecturas por triplicado de cada concentración.  Determinar para cada ensayo el porcentaje recuperado de cada determinación, la media, el coeficiente de variación, coeficiente de correlación, coeficiente de determinación, ecuación de regresión, representación grafica de la recta de regresión, significación estadística del intercepto y de la pendiente, homoscedasticidad, grafico de residuales (análisis de residuos), análisis de variancia. 1.4. Linealidad e Intervalo del Método. Realizar por triplicado el siguiente procedimiento para obtener 3 curvas de linealidad. a. Preparación de la Fase Móvil, de la solución diluente, del sistema cromatográfico, procedimientos y cálculos del Método de Determinación Cuantitativa de Acetaminofén 60 mg, Aspirina 400 mg y Cafeína 30 mg, tabletas Divina. Ver punto I: Descripción del método para Análisis Químico de Tabletas Divina. b. Preparación del Estándar: Solución Madre del Estándar:

PROCEDIMIENTO NORMALIZADO DE TRABAJO LCCM-FARMA MUNDI

Protocolo de Validación para el Método analítico de cuantificación de Acetaminofén 60 mg, Aspirina 400 mg y Cafeína 30 mg, tabletas Divina.

PNT: Rev: 0 Fecha Emisión 2015/09/19 Página 12 de 22

Pesar con exactitud 0.025 g del Estándar de Referencia de Acetaminofén, 0.1667 g del Estándar de Referencia de Aspirina y 0.0125 g del Estándar de Referencia de Cafeína. Llevar cada Estándar de referencia a un balón de 100 ml y aforar con Mezcla de Disolventes. Preparación Estándar: Tomar 20 ml de la Solución Madre del Estándar y transferir a un Balón de 50 ml, diluir con Mezcla de Disolventes, mezclar y Aforar. Esta solución contendrá una concentración aproximada de 100 µg/ml de ER de Acetaminofén, 666 µg/ml de ER de Aspirina, y 50 µg/mL de ER de Cafeína. d. Preparación de valoración para Acetaminofén 0.060g, Aspirina 0.40g y Cafeína 0.030g :  Pesar con exactitud 20 tabletas que contienen 0.40 g de Aspirina, 0.060 g de Acetaminofén y 0.030 g de Cafeína, pulverizar en un mortero hasta obtener un polvo fino. Pesar con exactitud una porción del polvo que equivalga a aproximadamente a 1.1667 g de Aspirina, 0.1750 g de Acetaminofén y 0.0875 g de Cafeína. Llevar a un matraz volumétrico de 100 ml las cantidades de polvo anteriormente pesadas, disolver con 20 ml de Mezcla de Disolvente. Someter a ultrasonido por un periodo de tiempo de 10 minutos. Agitar mecánicamente durante 10 minutos y Diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Transferir 2 ml de la solución anterior a un matraz volumétrico de 50 ml, y diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Filtrar las muestras con la ayuda de un Filtro de Jeringa, 0.45 µm. La solución final poseerá una concentración teórica de 70 µg/ml de ER de Acetaminofén, 466.68 µg/ml de ER de Aspirina, y 35 µg/ml de ER de Cafeína.  Pesar con exactitud 20 tabletas que contienen 0.40 g de Aspirina, 0.060 g de Acetaminofén y 0.030 g de Cafeína, pulverizar en un mortero hasta obtener un polvo fino. Pesar con exactitud una porción del polvo que equivalga a aproximadamente a 1.4167 g de Aspirina, 0.2125 g de Acetaminofén y 0.1063 g de Cafeína. Llevar a un matraz volumétrico de 100 ml las cantidades de polvo anteriormente pesadas, disolver con 20 ml de Mezcla de Disolvente. Someter a ultrasonido por un periodo de tiempo de 10 minutos. Agitar mecánicamente durante 10 minutos y Diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Transferir 2 ml de la solución anterior a un matraz volumétrico de 50 ml, y diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Filtrar las muestras con la ayuda de un Filtro de Jeringa, 0.45 µm. La solución final poseerá una concentración teórica de 85 µg/ml de ER de Acetaminofén, 566.68 µg/ml de ER de Aspirina, y 42.5 µg/ml de ER de Cafeína.  Pesar con exactitud 20 tabletas que contienen 0.40 g de Aspirina, 0.060 g de Acetaminofén y 0.030 g de Cafeína, pulverizar en un mortero hasta obtener un polvo fino. Pesar con exactitud una porción del polvo que equivalga a aproximadamente a 1.6667 g de Aspirina, 0.250 g de Acetaminofén y 0.1250 g de Cafeína. Llevar a un matraz volumétrico de 100 ml las cantidades de polvo anteriormente pesadas, disolver con 20 ml de Mezcla de Disolvente. Someter a ultrasonido por un periodo de tiempo de 10 minutos. Agitar mecánicamente durante 10 minutos y

PROCEDIMIENTO NORMALIZADO DE TRABAJO LCCM-FARMA MUNDI

Protocolo de Validación para el Método analítico de cuantificación de Acetaminofén 60 mg, Aspirina 400 mg y Cafeína 30 mg, tabletas Divina.

PNT: Rev: 0 Fecha Emisión 2015/09/19 Página 13 de 22

Diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Transferir 2 ml de la solución anterior a un matraz volumétrico de 50 ml, y diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Filtrar las muestras con la ayuda de un Filtro de Jeringa, 0.45 µm. La solución final poseerá una concentración teórica de 100 µg/ml de ER de Acetaminofén, 666 µg/ml de ER de Aspirina, y 50 µg/ml de ER de Cafeína.

 Pesar con exactitud 20 tabletas que contienen 0.40 g de Aspirina, 0.060 g de Acetaminofén y 0.030 g de Cafeína, pulverizar en un mortero hasta obtener un polvo fino. Pesar con exactitud una porción del polvo que equivalga a aproximadamente a 1.9167 g de Aspirina, 0.2875 g de Acetaminofén y 0.1438 g de Cafeína. Llevar a un matraz volumétrico de 100 ml las cantidades de polvo anteriormente pesadas, disolver con 20 ml de Mezcla de Disolvente. Someter a ultrasonido por un periodo de tiempo de 10 minutos. Agitar mecánicamente durante 10 minutos y Diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Transferir 2 ml de la solución anterior a un matraz volumétrico de 50 ml, y diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Filtrar las muestras con la ayuda de un Filtro de Jeringa, 0.45 µm. La solución final poseerá una concentración teórica de 115 µg/ml de ER de Acetaminofén, 766.68 µg/ml de ER de Aspirina, y 57.52 µg/ml de ER de Cafeína.  Pesar con exactitud 20 tabletas que contienen 0.40 g de Aspirina, 0.060 g de Acetaminofén y 0.030 g de Cafeína, pulverizar en un mortero hasta obtener un polvo fino. Pesar con exactitud una porción del polvo que equivalga a aproximadamente a 2.1667 g de Aspirina, 0.3250 g de Acetaminofén y 0.1625 g de Cafeína. Llevar a un matraz volumétrico de 100 ml las cantidades de polvo anteriormente pesadas, disolver con 20 ml de Mezcla de Disolvente. Someter a ultrasonido por un periodo de tiempo de 10 minutos. Agitar mecánicamente durante 10 minutos y Diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Transferir 2 ml de la solución anterior a un matraz volumétrico de 50 ml, y diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Filtrar las muestras con la ayuda de un Filtro de Jeringa, 0.45 µm. La solución final poseerá una concentración teórica de 130 µg/ml de ER de Acetaminofén, 866.68 µg/ml de ER de Aspirina, y 65 µg/ml de ER de Cafeína.  Desarrollar el método de determinación cuantitativa en sentido creciente de concentración 70, 85, 100, 115 y 130%, tomando como 100% la concentración de análisis rutinario del producto y haciendo lecturas por triplicado de cada concentración.  Determinar para cada ensayo el porcentaje recuperado de cada determinación, la media, el coeficiente de variación, coeficiente de correlación, coeficiente de determinación, ecuación de regresión, representación grafica de la recta de regresión, significación estadística del intercepto

PROCEDIMIENTO NORMALIZADO DE TRABAJO LCCM-FARMA MUNDI

Protocolo de Validación para el Método analítico de cuantificación de Acetaminofén 60 mg, Aspirina 400 mg y Cafeína 30 mg, tabletas Divina.

PNT: Rev: 0 Fecha Emisión 2015/09/19 Página 14 de 22

y de la pendiente, homoscedasticidad, grafico de residuales (análisis de residuos), análisis de variancia. 1.5. Exactitud del Sistema. a. Preparación de la Fase Móvil, de la solución diluente, del sistema cromatográfico, procedimientos y cálculos del Método de Determinación Cuantitativa de Acetaminofén 60 mg, Aspirina 400 mg y Cafeína 30 mg, tabletas Divina. Ver punto I: Descripción del método para Análisis Químico de Tabletas Divina. b. Preparación del Estándar: Solución Madre del Estándar: Pesar con exactitud 0.025 g del Estándar de Referencia de Acetaminofén, 0.1667 g del Estándar de Referencia de Aspirina y 0.0125 g del Estándar de Referencia de Cafeína. Llevar cada Estándar de referencia a un balón de 100 ml y aforar con Mezcla de Disolventes. Preparación Estándar: Tomar 20 ml de la Solución Madre del Estándar y transferir a un Balón de 50 ml, diluir con Mezcla de Disolventes, mezclar y Aforar. Esta solución contendrá una concentración aproximada de 100 µg/ml de ER de Acetaminofén, 666 µg/ml de ER de Aspirina, y 50 µg/mL de ER de Cafeína. c. Preparación de valoración para Acetaminofén 0.060g, Aspirina 0.40g y Cafeína 0.030g :  Pesar con exactitud 20 tabletas que contienen 0.40 g de Aspirina, 0.060 g de Acetaminofén y 0.030 g de Cafeína, pulverizar en un mortero hasta obtener un polvo fino. Pesar con exactitud una porción del polvo que equivalga a aproximadamente a 1.1667 g de Aspirina, 0.1750 g de Acetaminofén y 0.0875 g de Cafeína. Llevar a un matraz volumétrico de 100 ml las cantidades de polvo anteriormente pesadas, disolver con 20 ml de Mezcla de Disolvente. Someter a ultrasonido por un periodo de tiempo de 10 minutos. Agitar mecánicamente durante 10 minutos y Diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Transferir 2 ml de la solución anterior a un matraz volumétrico de 50 ml, y diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Filtrar las muestras con la ayuda de un Filtro de Jeringa, 0.45 µm. La solución final poseerá una concentración teórica de 70 µg/ml de ER de Acetaminofén, 466.68 µg/ml de ER de Aspirina, y 35 µg/ml de ER de Cafeína.  Pesar con exactitud 20 tabletas que contienen 0.40 g de Aspirina, 0.060 g de Acetaminofén y 0.030 g de Cafeína, pulverizar en un mortero hasta obtener un polvo fino. Pesar con exactitud una porción del polvo que equivalga a aproximadamente a 1.6667 g de Aspirina, 0.250 g de Acetaminofén y 0.1250 g de Cafeína. Llevar a un matraz volumétrico de 100 ml las cantidades de polvo anteriormente pesadas, disolver con 20 ml de Mezcla de Disolvente. Someter a ultrasonido por un periodo de tiempo de 10 minutos. Agitar mecánicamente durante 10 minutos y

PROCEDIMIENTO NORMALIZADO DE TRABAJO LCCM-FARMA MUNDI

Protocolo de Validación para el Método analítico de cuantificación de Acetaminofén 60 mg, Aspirina 400 mg y Cafeína 30 mg, tabletas Divina.

PNT: Rev: 0 Fecha Emisión 2015/09/19 Página 15 de 22

Diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Transferir 2 ml de la solución anterior a un matraz volumétrico de 50 ml, y diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Filtrar las muestras con la ayuda de un Filtro de Jeringa, 0.45 µm. La solución final poseerá una concentración teórica de 100 µg/ml de ER de Acetaminofén, 666 µg/ml de ER de Aspirina, y 50 µg/ml de ER de Cafeína.

 Pesar con exactitud 20 tabletas que contienen 0.40 g de Aspirina, 0.060 g de Acetaminofén y 0.030 g de Cafeína, pulverizar en un mortero hasta obtener un polvo fino. Pesar con exactitud una porción del polvo que equivalga a aproximadamente a 2.1667 g de Aspirina, 0.3250 g de Acetaminofén y 0.1625 g de Cafeína. Llevar a un matraz volumétrico de 100 ml las cantidades de polvo anteriormente pesadas, disolver con 20 ml de Mezcla de Disolvente. Someter a ultrasonido por un periodo de tiempo de 10 minutos. Agitar mecánicamente durante 10 minutos y Diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Transferir 2 ml de la solución anterior a un matraz volumétrico de 50 ml, y diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Filtrar las muestras con la ayuda de un Filtro de Jeringa, 0.45 µm. La solución final poseerá una concentración teórica de 130 µg/ml de ER de Acetaminofén, 866.68 µg/ml de ER de Aspirina, y 65 µg/ml de ER de Cafeína.  Desarrollar el método de Determinación Cuantitativa del producto y realizar el análisis de las muestras en sentido creciente de concentración 70, 100 y 130%, tomando como 100% la concentración de análisis rutinario del producto y haciendo cinco lecturas de cada concentración.  Determinar el porcentaje recuperado, la media, coeficiente de variación, intervalo de confianza (95%) de la media, significación estadística de la media con respecto al valor verdadero (prueba t de Student) e igualdad de las variancias (prueba G de Cochran), grafico de cantidad adicionada versus cantidad recuperada, coeficiente de correlación y significación estadística del intercepto y de la pendiente. 1.6. Exactitud del Método. a. Preparación de la Fase Móvil, de la solución diluente, del sistema cromatográfico, procedimientos y cálculos del Método de Determinación Cuantitativa de Acetaminofén 60 mg, Aspirina 400 mg y Cafeína 30 mg, tabletas Divina. Ver punto I: Descripción del método para Análisis Químico de Tabletas Divina. b. Preparación del Estándar: Solución Madre del Estándar:

PROCEDIMIENTO NORMALIZADO DE TRABAJO LCCM-FARMA MUNDI

Protocolo de Validación para el Método analítico de cuantificación de Acetaminofén 60 mg, Aspirina 400 mg y Cafeína 30 mg, tabletas Divina.

PNT: Rev: 0 Fecha Emisión 2015/09/19 Página 16 de 22

Pesar con exactitud 0.025 g del Estándar de Referencia de Acetaminofén, 0.1667 g del Estándar de Referencia de Aspirina y 0.0125 g del Estándar de Referencia de Cafeína. Llevar cada Estándar de referencia a un balón de 100 ml y aforar con Mezcla de Disolventes. Preparación Estándar: Tomar 20 ml de la Solución Madre del Estándar y transferir a un Balón de 50 ml, diluir con Mezcla de Disolventes, mezclar y Aforar. Esta solución contendrá una concentración aproximada de 100 µg/ml de ER de Acetaminofén, 666 µg/ml de ER de Aspirina, y 50 µg/mL de ER de Cafeína. c. Preparación de valoración para Acetaminofén 0.060g, Aspirina 0.40g y Cafeína 0.030g :  Pesar exactamente la cantidad de 0.6000g de Placebo de Tabletas Divina, y 1.1667 g de Aspirina ER, 0.1750 g de Acetaminofén ER y 0.0875 g de Cafeína ER. Llevar a un matraz volumétrico de 100 ml las cantidades de polvo anteriormente pesadas, disolver con 20 ml de Mezcla de Disolvente. Someter a ultrasonido por un periodo de tiempo de 10 minutos. Agitar mecánicamente durante 10 minutos y Diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Transferir 2 ml de la solución anterior a un matraz volumétrico de 50 ml, y diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Filtrar las muestras con la ayuda de un Filtro de Jeringa, 0.45 µm. La solución final poseerá una concentración teórica de 70 µg/ml de ER de Acetaminofén, 466.68 µg/ml de ER de Aspirina, y 35 µg/ml de ER de Cafeína.  Pesar exactamente la cantidad de 0.6000g de Placebo de Tabletas Divina, y 1.6667 g de Aspirina, 0.250 g de Acetaminofén y 0.1250 g de Cafeína. Llevar a un matraz volumétrico de 100 ml las cantidades de polvo anteriormente pesadas, disolver con 20 ml de Mezcla de Disolvente. Someter a ultrasonido por un periodo de tiempo de 10 minutos. Agitar mecánicamente durante 10 minutos y Diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Transferir 2 ml de la solución anterior a un matraz volumétrico de 50 ml, y diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Filtrar las muestras con la ayuda de un Filtro de Jeringa, 0.45 µm. La solución final poseerá una concentración teórica de 100 µg/ml de ER de Acetaminofén, 666 µg/ml de ER de Aspirina, y 50 µg/ml de ER de Cafeína.  Pesar exactamente la cantidad de 0.6000g de Placebo de Tabletas Divina, y 2.1667 g de Aspirina, 0.3250 g de Acetaminofén y 0.1625 g de Cafeína. Llevar a un matraz volumétrico de 100 ml las cantidades de polvo anteriormente pesadas, disolver con 20 ml de Mezcla de Disolvente. Someter a ultrasonido por un periodo de tiempo de 10 minutos. Agitar mecánicamente durante 10 minutos y Diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Transferir 2 ml de la solución anterior a un matraz volumétrico de 50 ml, y diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Filtrar las muestras con la ayuda de un Filtro de Jeringa, 0.45 µm. La solución final

PROCEDIMIENTO NORMALIZADO DE TRABAJO LCCM-FARMA MUNDI

Protocolo de Validación para el Método analítico de cuantificación de Acetaminofén 60 mg, Aspirina 400 mg y Cafeína 30 mg, tabletas Divina.

PNT: Rev: 0 Fecha Emisión 2015/09/19 Página 17 de 22

poseerá una concentración teórica de 130 µg/ml de ER de Acetaminofén, 866.68 µg/ml de ER de Aspirina, y 65 µg/ml de ER de Cafeína.  Desarrollar el método de Determinación Cuantitativa del producto y realizar el análisis de las muestras en sentido creciente de concentración (70, 100 y 130%), tomando como 100% la concentración de análisis rutinario del producto y haciendo cinco lecturas de cada concentración.  Determinar el porcentaje recuperado, la media, coeficiente de variación, intervalo de confianza (95%) de la media, significación estadística de la media con respecto al valor verdadero (prueba t de Student) e igualdad de las variancias (prueba G de Cochran), grafico de cantidad adicionada versus cantidad recuperada, coeficiente de correlación y significación estadística del intercepto y de la pendiente. 1.7. Repetibilidad del Sistema. a. Preparación de la Fase Móvil, de la solución diluente, del sistema cromatográfico, procedimientos y cálculos del Método de Determinación Cuantitativa de Acetaminofén 60 mg, Aspirina 400 mg y Cafeína 30 mg, tabletas Divina. Ver punto I: Descripción del método para Análisis Químico de Tabletas Divina. b. Preparación del Estándar: Solución Madre del Estándar: Pesar con exactitud 0.025 g del Estándar de Referencia de Acetaminofén, 0.1667 g del Estándar de Referencia de Aspirina y 0.0125 g del Estándar de Referencia de Cafeína. Llevar cada Estándar de referencia a un balón de 100 ml y aforar con Mezcla de Disolventes. Preparación Estándar: Tomar 20 ml de la Solución Madre del Estándar y transferir a un Balón de 50 ml, diluir con Mezcla de Disolventes, mezclar y Aforar. Esta solución contendrá una concentración aproximada de 100 µg/ml de ER de Acetaminofén, 666 µg/ml de ER de Aspirina, y 50 µg/mL de ER de Cafeína. c. Preparación de valoración para Acetaminofén 0.060g, Aspirina 0.40g y Cafeína 0.030g : Pesar con exactitud 20 tabletas que contienen 0.40 g de Aspirina, 0.060 g de Acetaminofén y 0.030 g de Cafeína, pulverizar en un mortero hasta obtener un polvo fino. Pesar con exactitud una porción del polvo que equivalga a aproximadamente a 1.6667 g de Aspirina, 0.250 g de Acetaminofén y 0.1250 g de Cafeína. Llevar a un matraz volumétrico de 100 ml las cantidades de polvo anteriormente pesadas, disolver con 20 ml de Mezcla de Disolvente. Someter a ultrasonido por un periodo de tiempo de 10 minutos. Agitar mecánicamente durante 10 minutos y Diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Transferir 2 ml de la solución anterior a un matraz volumétrico de 50 ml, y diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Filtrar las muestras con la ayuda de un Filtro de

PROCEDIMIENTO NORMALIZADO DE TRABAJO LCCM-FARMA MUNDI

Protocolo de Validación para el Método analítico de cuantificación de Acetaminofén 60 mg, Aspirina 400 mg y Cafeína 30 mg, tabletas Divina.

PNT: Rev: 0 Fecha Emisión 2015/09/19 Página 18 de 22

Jeringa, 0.45 µm. La solución final poseerá una concentración teórica de 100 µg/ml de ER de Acetaminofén, 666 µg/ml de ER de Aspirina, y 50 µg/ml de ER de Cafeína.  Realizar 10 preparaciones de la muestra y realizar la Determinación Cuantitativa de cada una de ellas.  Determinar el porcentaje recuperado, la media y el intervalo de confianza de la media al 95% y el coeficiente de variación de las respuestas obtenidas.

1.8. Repetibilidad del Método. a. Preparación de la Fase Móvil, de la solución diluente, del sistema cromatográfico, procedimientos y cálculos del Método de Determinación Cuantitativa de Acetaminofén 60 mg, Aspirina 400 mg y Cafeína 30 mg, tabletas Divina. Ver punto I: Descripción del método para Análisis Químico de Tabletas Divina. b. Preparación del Estándar: Solución Madre del Estándar: Pesar con exactitud 0.025 g del Estándar de Referencia de Acetaminofén, 0.1667 g del Estándar de Referencia de Aspirina y 0.0125 g del Estándar de Referencia de Cafeína. Llevar cada Estándar de referencia a un balón de 100 ml y aforar con Mezcla de Disolventes. Preparación Estándar: Tomar 20 ml de la Solución Madre del Estándar y transferir a un Balón de 50 ml, diluir con Mezcla de Disolventes, mezclar y Aforar. Esta solución contendrá una concentración aproximada de 100 µg/ml de ER de Acetaminofén, 666 µg/ml de ER de Aspirina, y 50 µg/mL de ER de Cafeína. c. Preparación de valoración para Acetaminofén 0.060g, Aspirina 0.40g y Cafeína 0.030g : Pesar con exactitud 20 tabletas que contienen 0.40 g de Aspirina, 0.060 g de Acetaminofén y 0.030 g de Cafeína, pulverizar en un mortero hasta obtener un polvo fino. Pesar con exactitud una porción del polvo que equivalga a aproximadamente a 1.6667 g de Aspirina, 0.250 g de Acetaminofén y 0.1250 g de Cafeína. Llevar a un matraz volumétrico de 100 ml las cantidades de polvo anteriormente pesadas, disolver con 20 ml de Mezcla de Disolvente. Someter a ultrasonido por un periodo de tiempo de 10 minutos. Agitar mecánicamente durante 10 minutos y Diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Transferir 2 ml de la solución anterior a un matraz volumétrico de 50 ml, y diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Filtrar las muestras con la ayuda de un Filtro de Jeringa, 0.45 µm. La solución final poseerá una concentración teórica de 100 µg/ml de ER de Acetaminofén, 666 µg/ml de ER de Aspirina, y 50 µg/ml de ER de Cafeína.

PROCEDIMIENTO NORMALIZADO DE TRABAJO LCCM-FARMA MUNDI

Protocolo de Validación para el Método analítico de cuantificación de Acetaminofén 60 mg, Aspirina 400 mg y Cafeína 30 mg, tabletas Divina.

PNT: Rev: 0 Fecha Emisión 2015/09/19 Página 19 de 22

 Realizar 10 preparaciones de la muestra y realizar la Determinación Cuantitativa de cada una de ellas.  Determinar el porcentaje recuperado, la media y el intervalo de confianza de la media al 95% y el coeficiente de variación de las respuestas obtenidas.

1.9. Precisión Intermedia. a. Preparación de la Fase Móvil, de la solución diluente, del sistema cromatográfico, procedimientos y cálculos del Método de Determinación Cuantitativa de Acetaminofén 60 mg, Aspirina 400 mg y Cafeína 30 mg, tabletas Divina. Ver punto I: Descripción del método para Análisis Químico de Tabletas Divina. b. Preparación del Estándar: Solución Madre del Estándar: Pesar con exactitud 0.025 g del Estándar de Referencia de Acetaminofén, 0.1667 g del Estándar de Referencia de Aspirina y 0.0125 g del Estándar de Referencia de Cafeína. Llevar cada Estándar de referencia a un balón de 100 ml y aforar con Mezcla de Disolventes. Preparación Estándar: Tomar 20 ml de la Solución Madre del Estándar y transferir a un Balón de 50 ml, diluir con Mezcla de Disolventes, mezclar y Aforar. Esta solución contendrá una concentración aproximada de 100 µg/ml de ER de Acetaminofén, 666 µg/ml de ER de Aspirina, y 50 µg/mL de ER de Cafeína. c. Preparación de valoración para Acetaminofén 0.060g, Aspirina 0.40g y Cafeína 0.030g : Pesar con exactitud 20 tabletas que contienen 0.40 g de Aspirina, 0.060 g de Acetaminofén y 0.030 g de Cafeína, pulverizar en un mortero hasta obtener un polvo fino. Pesar con exactitud una porción del polvo que equivalga a aproximadamente a 1.6667 g de Aspirina, 0.250 g de Acetaminofén y 0.1250 g de Cafeína. Llevar a un matraz volumétrico de 100 ml las cantidades de polvo anteriormente pesadas, disolver con 20 ml de Mezcla de Disolvente. Someter a ultrasonido por un periodo de tiempo de 10 minutos. Agitar mecánicamente durante 10 minutos y Diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Transferir 2 ml de la solución anterior a un matraz volumétrico de 50 ml, y diluir a volumen con Mezcla de Disolvente. Filtrar las muestras con la ayuda de un Filtro de

PROCEDIMIENTO NORMALIZADO DE TRABAJO LCCM-FARMA MUNDI

Protocolo de Validación para el Método analítico de cuantificación de Acetaminofén 60 mg, Aspirina 400 mg y Cafeína 30 mg, tabletas Divina.

PNT: Rev: 0 Fecha Emisión 2015/09/19 Página 20 de 22

Jeringa, 0.45 µm. La solución final poseerá una concentración teórica de 100 µg/ml de ER de Acetaminofén, 666 µg/ml de ER de Aspirina, y 50 µg/ml de ER de Cafeína. 

Desarrollar el método de Determinación Cuantitativa haciendo lecturas por triplicado de la muestra durante tres días. Los ensayos son realizados por 2 analistas en un equipo de seguimiento y medición automático (HPLC).  Determinar el porcentaje recuperado total, la media, la desviación estándar, el coeficiente de variación y el intervalo de confianza para la media al 95%.

2. Especificaciones de los Parámetros de Validación del Método de Análisis Químico. 2.1. Especificidad. 2.1.1. Método de Determinación Cuantitativa. La muestra y el Placebo no deben de presentar ningún tipo de señal que interfiera con la señal que se encuentra para el estándar. 2.2.Estabilidad de la Muestra. Factor (I): 98.0%-102.0% 2.3. Linealidad e Intervalo del Sistema y del Método. Parámetro Valor Coeficiente de Variación ≤ Al 2.0% para determinación cuantitativa. Coeficiente de ≥ de 0.98 determinación Coeficiente de ≥ 0.990 Correlación Estadístico Durban- Aproximadamente 2.0 Watson Intercepto de la Recta (a) Aproximadamente igual a 0. Pendiente de la Recta (b) Aproximadamente igual 1.0. Ecuación de la Recta Y=a+bx Significación estadística texpttabla; el intervalo de confianza debe incluir el cero. de (b) Homocesdasticidad Gexp F2exp, evidencia una pendiente distinta de cero F1exp < F2exp, demuestra la linealidad de los resultados

2.4. Exactitud del Sistema y del Método. Parámetro Valor Coeficiente de Variación ≤ Al 2.0% Prueba t de Student para texp