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Tecnología Médica 2013

Informe de Laboratorio: “Microbiota humana y ambiental”

Integrantes: Nicol Cruces Nathaly Isla Gloria Mancilla Yaela Osorio Mariela Riquelme Docentes:

Ángelo Baeza Franklin Vidal

Asignatura: Microbiología General Carrera:

Tecnología Médica

Introducción Durante mucho tiempo los seres humanos hemos desarrollado una estrecha y compleja relación con los microorganismos. Desde el nacimiento hasta la muerte, nuestro cuerpo está habitado por cientos de bacterias y hongos. Algunos hacen del cuerpo humano un hogar permanente y otros residen en él temporalmente, aunque sean inocuos. Los microorganismos que mantienen la relación estable con los seres humanos constituyen nuestra biota normal. Estos microorganismos crecen y se multiplican debido a que están adaptados a vivir en el cuerpo humano. En la mayoría de los casos no causan enfermedades. La microbiota normal solo habita en superficies del cuerpo. Pero, anatómicamente existen superficies externas e internas. Las superficies externas, como la piel, están en contacto directo con el ambiente y, por lo tanto, con los organismos. Las superficies internas están expuestas indirectamente al medio ambiente. Por ejemplo, los intestinos albergan los microorganismos que penetran en el cuerpo por la boca. La microbiota residente, son aquellos que se encuentran en el cuerpo humano a lo largo de toda su vida, mientras que la microbiota transitoria no está suficientemente adaptada a vivir en el cuerpo humano como para permanecer indefinidamente, y no forma parte de la biota normal. Los oportunistas son aquellos que causan enfermedad cuando se presenta una “buena” oportunidad, lo cual normalmente es un desequilibrio del sistema inmune. Los microorganismos que habitan en nuestro cuerpo, al igual que el resto de los microorganismos, sobreviven porque están adaptados a su ambiente. Pero, ¿Por qué algunos microorganismos están en determinadas partes de nuestro cuerpo?, esto es por dos factores: el propio ambiente (tejido vivo) y en modo en que estos se ambientan. La cavidad nasal también está colonizada por microorganismos por ser superficies externas en contacto con el medio ambiente, y estos normalmente no se encuentran en la piel, Lactobacilus spp es muy común encontrarlo en la cavidad nasal.1

1

John L.Ingraham, C. A. (1998). Introducción a la microbiología. Barcelona: Reverté.S.A.

Medios de transporte.

Medio de Transporte de Stuart Es utilizado para la recolección, transporte y preservación de muestras microbiológicas. El Medio de Transporte de Stuart es un medio cuya fórmula permite mantener la viabilidad de los microorganismos presentes en la muestra sin que exista un crecimiento significativo. Actualmente este medio es recomendado para exudados faríngeos, vaginales y muestras de heridas. En este medio el cloruro de calcio proporciona iones esenciales para mantener el balance osmótico. El tioglicolato de sodio evita los cambios oxidativos y provee una atmósfera reducida. El glicerofosfato de sodio actúa como buffer. El azul de metileno es un colorante indicador del estado de óxido-reducción2. Componentes:       

Tioglicolato de Sodio 1.0 Cloruro de Calcio 0.1 Glicerofosfato de Sodio 10.0 Azul de Metileno 0.002 Agar Bacteriológico 3.0 PH 7.4±0.2 Almacenamiento: 2-30°C.

  

Caducidad: 4 años en frasco cerrado. Presentación: Frasco con 450 g Caja con 20 sobres para un litro

Medio de Transporte AMIES Medio semisólido para la recolección y transporte de microorganismos a partir de diversas muestras. Puede ser usado para la recuperación de microorganismos patógenos como Neisserias, Vibrios, Haemophilus, Streptococcus, Salmonellas, Shigellas, etc. Se sugiere el medio de transporte de AMIES en tubo de plástico3.

7.5

Cloruro de sodio

3.0

10.0 0.1 0.1 0.2

Fosfato disódico Fosfato monopotásico Tioglicolato de sodio

1.15 0.2 1.0

FORMULA EN GRAMOS POR LITRO DE AGUA DESTILADA Agar Carbón vegetal Cloruro de calcio Cloruro de magnesio Cloruro de potasio

Fórmula en Gramos por Litro de agua destilada.

Medio de transporte Cary Blair. Medio recomendado para la recolección, transporte y conservación de muestras aptas para estudios microbiológicos. Es especialmente útil para la búsqueda de Vibrio spp. fecales y rectales.

Fórmula (en gramos por litro) Tioglicolato de sodio Fosfato disódico Cloruro de sodio Agar

A partir de muestras

Instrucciones Suspender 12,6 g del polvo en 991 ml de agua destilada. Reposar 5 minutos y mezclar hasta uniformar. Calentar agitando frecuentemente y hervir 1 minuto hasta disolver. Enfriar a 50°C y agregar 9 ml de una sol. de CaCl2 al 1% preparada 5.0 recientemente. Ajustar el pH si es necesario. Distribuir y esterilizar 15 minutos a vapor fluente. pH final: 8.4 ± 0.2 1.5 1.1 5.0

Almacenamiento: Medio deshidratado: a 10-35 ºC. Medio preparado: a 2-8 ºC.4

Medio de transporte suero fisiológico: Composición: Cada 100 mL contienen: Cloruro de sodio

0,9 g

Agua para inyección c.s. Osmolaridad: 308 mOsmol/L.

Dosis y vías de administración: La dosis y el promedio administrado vía intramuscular o endovenosa son dependientes de las necesidades individuales de cada paciente; pero deberán ser controlados para prevenir un rápido incremento de los niveles de sodio en el plasma. La cantidad a ser usada deberá ser determinada por prescripción médica en cada situación particular. Formas de presentación: Frascos por 500 y 1000 mL. Caja x 24 frascos x 500 mL. Caja x 12 frascos x 1000 mL. Condiciones de conservación y almacenamiento: Almacenar entre 15 y 30 ºC5.

2

Medio de transporte de Stuart: http://www.mcd.com.mx/pdfs/medio_stuart.pdf Medio de transporte Amieshttp://www.lablinsan.cl/pdf/VariedadAmies.pdf 4Medio de transporte Cary Blain: http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/caryblairmedtransp.htm 5 Medio de transporte suero fisiológico: http://bvs.minsa.gob.pe/local/biblio/plm/src/productos/35563_91.htm 3

Objetivos generales 

Identificar y analizar los microorganismos que forman parte de nuestra microbiota humana y ambiental. Objetivos específicos

 

Identificar a través de la tinción Gram las bacterias encontradas en las personas y el medio ambiente. Reconocer los efectos que producen algunas bacterias ya sean con los que vivimos normalmente como también los patógenos o que nos puedan causar alguna enfermedad.

Materiales y métodos                    

Medios de transporte: Suero fisiológico. Guantes. Placas de agar sangre. Placas de agar Sabouraud. Asas de cultivo. Gradillas. Fósforos. Mechero. Lápiz dermatográfico. Plumones para vidrio. Papel kraft cortado. Portaobjetos. Tinción de Gram. Aceite de inmersión. Microscopio. Timer. Alcohol éter. 3 Tórulas con medio de transporte. Pinza de madera. Recipiente para desperdicios (de vidrios y basura común).

Microbiota humana. 

Realizar toma de muestras de secreción nasal y pabellón auricular siguiendo la pauta a continuación. o Utilizar 2 Tórulas estériles con medio de transporte. o Rotular cada tórula (indicando nombre, fecha y especificando el tipo de muestra).

o La toma de muestra de secreción nasal se realiza de la siguiente manera:  Rotar la tórula por el vestíbulo de ambas fosas nasales (tabique, cara interna de aletas nasales), tocando las paredes de la mucosa. Repetir procedimiento en la otra fosa nasal con la misma tórula y ponerla en el medio de transporte.

o La toma de muestra de pabellón auricular se realiza de la siguiente manera:  Rotar la tórula por el canal auditivo hasta topar fondo y girar suavemente y ponerla en el medio de transporte. 

Sembrar las muestras en agar sangre y agar Sabouraud, utilizando la mitad de cada placa para secreción nasal y la otra mitad para pabellón auricular.

 

Incubarlas en la estufa de cultivo por 24 a 48 horas. Una vez lista las muestras, realizar tinción Gram de la siembra realizada en la placa de agar sangre y observarla en el microscopio.

Microbiota ambiental. 

Recolectar una muestra del suelo del laboratorio, pasando una tórula estéril en un sitio específico escogido por el grupo.



Sembrar la muestra en agar sangre y agar Sabouraud e incubarlas en la estufa de cultivo por 24 a 48 horas.



Una vez lista las muestras, realizar tinción Gram de la siembra realizada en la placa de agar sangre y observarla en el microscopio.

Resultados

Secreción nasal Agar sangre - Crecimiento incontable de colonias. - Tamaño: medianas, grandes y pequeñas. - Color: crema - Presencia de olor: si - Superficie: lisas - Densidad: opaca - Forma: circular - Elevación: chata - Borde: entero

Agar Sabouraud - Crecimiento incontable de colonias. - Tamaño: pequeñas. - Color: blanco - Presencia de olor: si - Superficie: lisas - Densidad: opaca - Forma: circular - Elevación: chata - Borde: entero

Pabellón Auricular Agar sangre - Crecimiento incontable de colonias. - Tamaño: medianas y grandes. - Color: blanco - Presencia de olor: si - Superficie: lisas - Densidad: opaca - Forma: circular - Elevación: convexa - Borde: entero

- Crecimiento de 1 colonia. - Tamaño: grande - Color: amarilla - Presencia de olor: si - Superficie: lisa - Densidad: opaca - Forma: circular - Elevación: convexa - Borde: entero - Crecimiento de 1 colonia. - Tamaño: grande - Color: café y en sus bordes rojo - Presencia de olor: si - Superficie: lisa - Densidad: opaca - Forma: circular - Elevación: umbonada - Borde: entero

Agar Sabouraud - Crecimiento incontable de colonias. - Tamaño: pequeñas. - Color: blanco - Presencia de olor: si - Superficie: lisas - Densidad: opaca - Forma: circular - Elevación: chata y umbonadas - Borde: entero

Muestra de suelo Agar sangre - Crecimiento de 15 colonias. - Tamaño: grandes - Color: verde musgo - Presencia de olor: si - Superficie: granular - Densidad: opaca - Forma: circular-irregular - Elevación: chata-elevada - Borde: ondulado

Agar Sabouraud - Crecimiento de seis colonias. - Tamaño: medianas - Color: blanco - Presencia de olor: si - Superficie: lisas - Densidad: opaca - Forma: circular - Elevación: umbilicada - Borde: entero

Tinción Gram Muestra de suelo Se observan bacilos Gram (+) a través del microscopio.

Muestra secreción nasal Se observan cocaceas Gram (+) a través del microscopio.

Discusión

De acuerdo a lo obtenido en las muestras procedentes de superficies mucocutáneas en este caso de pabellón auricular y secreción nasal, se observó crecimiento en las placas de cultivo en lo que evidenciamos la presencia de una flora existente en nuestro cuerpo. Constatamos crecimiento incontable de variadas formas y tamaños de colonias en ambos cultivos en los diferentes agares donde cabe mencionar el excesivo tiempo de incubación a lo que estas fueron sometidas, atribuyéndole las evidentes discrepancias de las formas de las colonias resultantes; le practicamos tinción Gram a la muestra de secreción nasal en el que resultó bacilos Gram positivos, se esperaba este resultado ya que según el marco teórico forma parte de la microbiota humana normal. Lo obtenido de las muestras de superficies inanimadas precedente del suelo del laboratorio de microbiología en nuestro grupo, figura variadas colonias con diversas formas y presencia de olor y beta hemolisis característico de bacterias patógenas6 , la tinción Gram practicado a una colonia al azar, dio Cocaceas Gram positivas, estas pudieron haber llegado a ese lugar por el arrastre que se hace al lavarse las manos, ya que la muestra fue obtenida en el área de lavado de manos, en el cual ciertamente es un ambiente propicio para que estas pudieran vivir un tiempo hasta la desinfección del suelo.

6

Diccionario Mosby - Medicina, Enfermería y Ciencias de la Salud, Ediciones Hancourt, S.A. 1999.

Conclusión.

En la cavidad nasal de nuestra compañera pudimos demostrar fehacientemente mediante los cultivos, la presencia de una flora bacteriana a la que atribuimos a la microbiota normal que se posee, y esta se define “como el conjunto de microorganismos que habitan habitualmente la piel y las mucosas de las personas sanas”7, a la cual le hicimos tinción Gram, resultando Bacilos Gram positivos, perteneciente a la microbiota normal según la teoría, esto nos lleva a pensar en la interacción entre la microbiota y el ser humano, aun siendo bacterias, estas pueden ser beneficiosas un claro ejemplo es que forman parte de nuestro sistema inmunológico, pero igualmente podría darse algún cambio en el equilibrio que las mantiene así y se transformarían en agentes oportunistas resultando en alguna patología. La siguiente muestra, de superficie inanimada, la extrajimos del suelo en la zona de lavado de manos del laboratorio de microbiología, en la que corroboramos que en los cultivos hubo un crecimiento moderado de colonias, además hicimos tinción Gram a la muestra en la placa de agar sangre previamente incubada y se obtuvo como resultado bacterias Cocaceas Gram positivas, lo cual nos lleva a pensar que lo más probable es que hayan llegado por arrastre debido a la alta concurrencia de personas (profesores, alumnos, auxiliares), lo que nos demuestra una proliferación y dinamismo de microorganismos siendo lo mas probable que parte de carga bacteriana sea proveniente de nuestra propia microbiota. Es por esto que la Higiene es muy importante; a pesar de que a diario transportamos y convivimos con microorganismos que de cierta manera nos protegen pero así mismo también estamos propensos a infecciones por contaminaciones de espacios o por agentes patógenos provenientes del aire que entran por las cavidades que están en contacto con el medio ambiente.

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MICROBIOTA. (2013) Guía de Microbiología General Trabajos Prácticos Tecnología Médica.

Bibliografía.       

John L.Ingraham, C. A. (1998). Introducción a la microbiología. Barcelona: Reverté.S.A. Diccionario Mosby - Medicina, Enfermería y Ciencias de la Salud, Ediciones Hancourt, S.A. 1999. MICROBIOTA (2013). Guía de Microbiología General Trabajos Prácticos Tecnología Médica. Medio Cary Blair: http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/caryblairmedtransp.htm Medio AMIES: http://www.lablinsan.cl/pdf/VariedadAmies.pdf Medio Stuart: http://www.mcd.com.mx/pdfs/medio_stuart.pdf Medio Suero Fisiológico: http://bvs.minsa.gob.pe/local/biblio/plm/src/productos/35563_91.htm