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• Octavio Cardenas Orozco

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Laboratorio de Microbiología y Parasitología

Laboratorio de Microbiología y Parasitología

METABOLISMO BACTERIANO AUTORES: Isaac Salazar, Angela Sánchez, Cindy Anaya

DOCENTE: Antonio Indignares N. MSC.

UNIVERSIDAD DEL ATLÁNTICO FACULTAD DE QUÍMICA Y FARMACIA PROGRAMA DE FARMACIA

___________________________________________________________ INTRODUCCIÓN Las pruebas bioquímicas se realizan a través de distintos test químicos que se aplican a medios biológicos, los cuales en consecuencia de sus resultados nos permitirán identificar distintos microorganismos presentes en el medio. Su sistema consiste principalmente en determinar la actividad de una vía metabólica a partir de un sustrato que es incorporado al medio de cultivo. Para realizar estas pruebas se deben preparan distintos medios, los cuales están bajo las condiciones especiales del microorganismo a estudiar. De la gama de pruebas bioquímicas establecidas, estudiaremos la prueba de la catalasa, hidrolizacion del almidón y prueba en caldo de lactosa. Además se estudiaran los resultados arrojados.

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OBJETIVO GENERAL

Prueba de la lactosa

Conocer el uso de las pruebas bioquímicas para la identificación de microorganismos.

Se utiliza Mc conkey Agar para aislar bacterias bacilos gram negativos de fácil desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos. Permite diferenciar bacterias que utilizan o no lactosa. (Enterobacteriaceae).

OBJETIVOS ESPECIFICOS  buscar la presencia de la enzima catalasa.  Identificar fermentación de la lactosa.  Determinar en un cultivo bacteriano la hidrolizacion del almidón. FUNDAMENTACIÓN TEÓRICA Prueba de la catalasa

En el medio de cultivo, las peptonas aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable y la mezcla de sales biliares y el cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora gran positiva. Por fermentación de la lactosa disminuye el pH alrededor de la colonia. Los microorganismos no fermentadores de la lactosa producen colonias incoloras.

. Es una prueba sencilla que puede realizarse inmediatamente a partir de un cultivo. Algunas bacterias que viven en ambientes aerobios requieren de catalasa para convertir el peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno molecular. Es positiva la prueba cuando se ponen en contacto una bacteria con actividad catalasa con H2O2 y se producen burbujas de oxígeno. Se emplea para diferenciar el género Staphylococcus (catalasa positivo) del género Streptococcus (catalasa-negativo). El peróxido de hidrógeno se produce al utilizar la bacteria el azúcar por vía oxidativa. Al ser éste un compuesto muy oxidante las bacterias la eliminan mediante la producción de la enzima catalasa (H2O2  H2O + ½ O2).

Prueba de la hidrólisis del almidón

Las bacterias pueden usar alimentos macromoleculares; para ello, es necesaria una hidrólisis extracelular preliminar, igual que sucede en los animales superiores. Las distintas bacterias elaboran para este fin una cierta variedad de enzimas extracelulares que se segregan al medio. El objetivo de esta práctica es comprobar qué bacterias producen amilasa y son por tanto capaces de utilizar el almidón como nutriente. La presencia de un halo transparente alrededor de la colonia indica que la prueba es positiva, es decir que la bacteria ha hidrolizado el almidón mediante la amilasa.

Sólo las bacterias del género bacillus (B. thuringiensis y B. subtilis) producen amilasa.

MATERIALES Y REACTIVOS        

Caja de Petri Un Aza metálica Cultivo de lactosa Mechero Peróxido de hidrogeno (agua oxigenada) Lugol Portaobjeto gotero

METODOLOGÍA 1.) Se tomo una caja de Petri con agar nutritivo y se dividió en dos partes iguales, luego se extrajo de una caja de Petri con un cultivo x y se tomo dos porciones de microrganismos los cuales fueron sembrados en la primera caja de Petri, la cual fue insertada en una incubadora por 24 y 48 horas. 2.) Seleccionamos una colonia de estafilococos y la colocamos en un porta-objeto luego se le agrego varias gotas de peróxido de hidrogeno. Resultados 1.) Observación de la caja de Petri: Prueba de hidrolizacion del almidón. Se le agrego yodo (I) y lugol para reconocer almidón.se --------- las bacterias hicieron hidrolisis del almidón 2.) prueba de catalasa: La presencia de catalasa la fue positiva ya que se presento un

burbujeo y se observo un desprendimiento de gas.

3.) Prueba de fermentación: No obtuvimos resultados.

DISCUSIÓN DE RESULTADOS Con respecto a los resultados obtenidos en la hidrólisis del almidón se pudo observar que fue ua prueba positiva, debido a que se confirmo la presencia de microorganismos con capacidad de hidrolizar el almidón por medio enzimático, en donde se desaparición el almidón por el uso del reactivo con yodo. Con respecto a la prueba de fermentación, se pudo observar que hubo una columna con desprendimiento de gas, y crecimiento bacteriano, por ende se puede deducir que habitan bacterias que eran facultativas para realizar una fermentación, debido a que esta prueba se confirma mediante el cambio a un pH acido y producción de gas. La prueba de catalasa también dio positiva, debido a que había presencia de estafilococos. Esta prueba es clave para la identificación de muchos microorganismos gram (+), pero la interpretación debe ser cuidados, debido a que los estreptococos y enterococos son negativos ante esta prueba. Generalmente los microorganismos que carecen de citocromos, también carecen de catalasa, así la mayoría de las bacterias anaerobias no la poseen. CONCLUSIÓN

Se pudo observar que mediante diversas pruebas bioquímicas, se pueden diferenciar diversas bacterias,

facultativas, las cuales a partir de su metabolismo, es decir la forma de degradar nutrientes y carbohidratos, se pueden clasificar y poder diferenciar. Además nos dimos cuentas que a pesar de ser microorganismo inferiores (bacterias), tienen un metabolismo bien estructurado, el cual les permite desarrollarse y crecer y poder cumplir sus funciones facultativas, que las diferencia de las demás.

BIBLIOGRAFÍA  

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Tratado de Microbiología de Burrows ,Mexico, D.F 1.984 MICROBIOLOGIA CLINICA PRACTICA, 2° EDICION.-P.GARCIA MARTOS, M.T. FERNANDEZ DEL BARRIO, F. PAREDES SALIDO. MICROBIOLOGIA Y PARASITOLOGIA HUMANA-3°EDICION-ROMERO CABELLO RAUL-Ed. PANAMERICANA.