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Informe de laboratorio Biología celular y molecular

Diana marcela Rodríguez Díaz código: 65557307 Liliana Pérez Ortiz código: 1127072723 Eliana margarita calderón código: Ángela patricia Pérez código: essau castellano bedoya código:

Universidad nacional abierta y a distancia UNAD Regencia en farmacia y administración en salud, radiología e imágenes diagnostica Huila - Putumayo

Informe de laboratorio Biología celular y molecular

Diana marcela Rodríguez Díaz código: 65557307 Liliana Pérez código: 1127072723 Eliana margarita calderón código: Ángela patricia Pérez código: 1078246241 Essau castellano bedoya código:

Presentado Hernán camilo castillo

Universidad nacional abierta y a distancia UNAD Regencia en Farmacia y Administración en Salud, radiología e imágenes diagnostica Huila - Putumayo

TABLA DE CONTENIDO

Tabla de contenido

TABLA DE CONTENIDO ............................................................................................ 3 PRACTICA 1. BIOSEGURIDAD................................................................................ 4 PRACTICA 2. MICROSCOPIA ................................................................................. 5 Cuestionario .......................................................................................................... 5 Cuestionario ................................................................. ¡Error! Marcador no definido. Practica 5. “Acción de lisosomas” ........................................................................... 14 Introducción .............................................................................................................. 14 Material ................................................................................................................. 14 Procedimiento ........................................................................................................... 15 Practica 6. “Tejidos vegetales: Aislamiento de cloroplastos intactos” ..................... 17 Introducción .............................................................................................................. 17 Tabla de los datos experimentales obtenidos. ................................................. 19 Gráfica de absorbancia (450 nm) contra tiempo de exposición a la luz. ........ 19 Practica 7. “Meiosis y Mitosis” ................................................................................. 22 Cuestionario ........................................................................................................ 27 REFERENCIAS ........................................................................................................ 31

PRACTICA 1. BIOSEGURIDAD Cuestionario: 1- Defina que es Bioseguridad Rta: la palabra bioseguridad se entiende por sus componentes}: bio: de bios (griego) que significa vida, y seguridad que es referida a la calidad de ser seguro, libre de daño, riesgo o peligro. Bioseguridad: es el conjunto de normas y protocolos que son aplicados en múltiples procedimientos realizados en investigaciones científicas que se debe seguir para conservar la salud y seguridad con el objetivo de prevenir los riesgos o infecciones del personal que labora en el laboratorio y de la comunidad frente a los riesgos de infección para evitar contaminarse. 2- ¿Cómo puede usted evitar en el laboratorio daños a su salud? Rta: utilizando adecuadamente los elementos de protección personal y teniendo en cuenta las normas de bioseguridad las cuales son:  Utilizar la "bata de Laboratorio" debidamente abotonada y limpia y retirarla antes de salir del laboratorio  Dar uso adecuado a los guantes para manipular muestras y cultivos de microorganismos, evitar contaminar el área de trabajo y los implementos personales (esfero, libros, apuntes)  Utilizar mascarillas de respiración  Utilizar anteojos de protección para evitar lesiones oculares causadas por partículas proyectadas hacia el rostro del operador  No comer, beber, fumar ni colocar otros objetos en la boca, mientras esté en el Laboratorio.  Jamás llevarse el lapicero, bolígrafo o cualquier otro implemento a la boca  No almacenar alimentos en la nevera ni en los estantes del Laboratorio  No usar jeringas o agujas para manipular líquidos o especímenes clínicos  Mantener el Laboratorio limpio y aseado  Descontaminar las áreas de trabajo antes de iniciar la práctica de laboratorio, cada vez que se derrame una sustancia y, una vez terminada la práctica.  Descartar todo el material contaminado en los recipientes destinados para ello  Lavarse las manos luego de manipular cultivos, muestras, animales y, antes de abandonar el Laboratorio. 3- Defina el concepto de Limpieza, contaminación, desinfección, descontaminación y esterilización LIMPEZA: es la acción y efecto de eliminar la suciedad de una superficie mediante métodos físicos o químicos CONTAMINACION: es la presencia o la acumulación de sustancias en el medio ambiente que afecta negativamente en entorno y las condiciones de vida, así como la salud o la higiene de los seres vivos.

DESINFECCION: proceso capas de eliminar prácticamente todos los microorganismos patógenos conocidos, pero no todas las formas de vidas bacterianas sobre objetos inanimados. DESCONTAMINACION: es la reducción de la cantidad de microorganismos con el fin de disminuir el riesgo de infección y la carga bacteriana de los efluentes. ESTERILIZACIÓN: es el proceso mediante el cual se destruyen todos los microorganismos variables presentes en un objeto o superficie incluidas las esporas bacterianas.

PRACTICA 2. MICROSCOPIA

Es un instrumento óptico que está compuesto por unos lentes que son los encargados de ampliar las imágenes que se enfocan y que son muy pequeñas para ser vistas por el ojo humano. Está diseñado especialmente para poder apreciar elementos muy pequeños y que obviamente resultan prácticamente imperceptibles para la visión humana. 4x 10x 40x

Cuestionario

1. ¿Qué organismos pueden observarse en la gota de agua estancada? Se observan los protozoos que contiene esta agua estancada al observarla al 4x, 10x, y 40x 2. ¿Son todos de igual tamaño y forma? Rta: no son de tamaños ni formas iguales 3. ¿Se observan organismos móviles o estáticos? Rta: Se observan organismos estáticos 4. Para las muestras de la letra, la hebra de hilo observadas determine:

Tela a cuadros 4x

10x

40x

Hebras de hilo de varios colores 4x

10x

40x

Papel milimetrado 4x

10x

40x

La letra simetrica

4x

10x

40x

¿Cómo se manifiesta el poder de resolución? El poder de resolución se manifiesta por la longitud de las ondas de acuerdo a la radiación que empleamos para iluminar esto quiere decir que a menor longitud de ondas mayor es la resolución.

¿Cómo se manifiesta el poder de aumento? Este poder se manifiesta por la capacidad que tiene el lente al aumentar el tamaño de los objetos que se están observando. ¿Cómo se manifiesta el poder de definición? El poder de definición se manifiesta por la capacidad que microscopio para dar imágenes nítidas junto con los bordes dependiendo de la calidad del lente

tiene el definidos

¿Cómo se manifiesta el poder de penetración o profundidad? Este poder se manifiesta en la observación detallada y simultaneo de los planos de preparación en el cual nos deja ver las cosas más mínimas que un objeto tiene que no lo podemos observar al ojo de una persona. ¿Cuál es la utilidad del microscopio? Es uno de los elementos más importantes en los laboratorios porque de él podemos observar las células que tiene un objeto, los microorganismos y las bacterias que a simple vistas nosotros los seres humanos no los podemos observar

Practica 3. CÉLULA: CRENACIÓN, HEMÓLISIS, PLASMÓLISIS Y TURGENCIA

Células sanguíneas 4x

10x

40x

Muestra de sangre al ser adicionada agua destilada 4x

10x

40x

Muestra de sangre al ser adicionada NaCl al 0.6% 4x

10x

40x

Muestra de sangre al ser adicionada NaCl al 0.9% 4x

10x

Muestra de sangre al ser adicionada NaCl al 1.2% 4x

10x

Células Vegetales 4x

10x

40x

40x

Muestra vegetal al ser adicionad agua destilada 4x

10x

40x

Muestra vegetal al ser adicionada NaCl 0.6% 4x

10x

40x

Muestra vegetal al ser adicionada NaCl 0.6% 4x

10x

40x

Cuestionario 1. Mencione las diferencias observadas entre el comportamiento de la célula vegetal y animal. Explique.

Célula vegetal Tienen formas rectangulares Tienen cloroplastos, ellas fabrican su propio alimento Tienen pared celular ( celulosa)

Célula animal Tienden a ser redondas o irregulares No tienen cloroplastos No poseen pared celular

2. Describe lo que sucede en una célula cuando se coloca en un medio: a) Hipotónico, b) isotónico, c) hipertónico La Permeabilidad selectiva ' es una propiedad de la membrana plasmática y de otras membranas semipermeables que permiten el paso de solo ciertas partículas a través de ellas. De esta forma, pueden entrar a la célula aquellas partículas que necesite la misma y se evita que ingresen las que no le sean útiles. De la misma forma, la célula puede eliminar las partículas que ha generado como desecho. Así se regula la entrada y salida de sustancias a través de la membrana y se logra el correcto funcionamiento de la célula. Para que una partícula pueda atravesar la membrana plasmática debe tener un tamaño igual o menor a los poros de la membrana, debe tener la carga opuesta a la carga de la membrana o simplemente tener carga neutra, y si es más grande que

los poros debe ser disuelta en una solución, disminuyendo su tamaño y así podrá entrar en la célula por medio de la membrana. a) Medio hipotónico

Hipotónico viene del griego "hypo," que significa bajo, y "tonos," que significa dilatarse. En una solución hipotónica, el total de la concentración molar de todas las partículas disueltas, es menos que el de otra solución o menos que el de la célula. Si las concentraciones de solutos disueltos son menos fuera de la célula que dentro, la concentración de agua afuera es correspondientemente más grande. Cuando una célula es expuesta a condiciones hipotónicas, hay un movimiento neto de agua hacia dentro de la célula. Las células sin pared celular se inflan y pueden explotar (lisis). si el exceso de agua no es removido de la célula. Las células con paredes celulares a menudo se benefician de la presión que da rigidez en medios hipotónicos.

b) Medio isotónico

Un medio o solución isotónico es aquel en el cual la concentración de soluto es igual fuera y dentro de una célula. En hematología, se dice de las soluciones que tienen la misma concentración de sales que los glóbulos rojos. son isotónicas.[cita requerida] Por tanto, tienen la misma presión osmótica que la sangre y no producen la deformación de los glóbulos rojos. Aplicando este término a la contracción muscular, se dice que una contracción es isotónica cuando la músculo permanece constante.

c) Medio hipertónico

Hipertónica viene del griego "hyper," que significa sobre y "tonos," que significa expandirse. En una solución hipertónica, la concentración molar total de todas las partículas de soluto disuelto, es más grande que el de la otra solución, o más grande que la concentración en la célula. Si la concentración de solutos disueltos es mayor fuera de la célula, la concentración de agua es correspondientemente menor. Como resultado, el agua dentro de la célula sale para alcanzar el equilibrio, produciendo un encogimiento de la célula. Al perder agua las células también pierden su habilidad para funcionar o dividirse. Los medios hipertónicos, como la salmuera o jarabes, han sido utilizados desde la antigüedad para preservar la comida, debido a que los microbios que causan la putrefacción, son deshidratados en esos medios hipertónicos y son incapaces de funcionar.

3. Explique en qué consisten los fenómenos de ósmosis y de difusión El proceso de ósmosis, es un fenómeno físico, por el cual dos fluidos de diferentes concentraciones, separados por una membrana semipermeable (esto es, una especie de filtro, pero con un tamaño de agujero tan pequeño, que filtra las partículas a nivel molecular), tienden a igualarse, pasando desde el lado de menor concentración hasta

el de mayor. Por ejemplo, el agua de mar, con alto contenido en sales, y el agua dulce. Ésta última pasaría al otro lado, sin ningún gasto de energía, hacia el otro, hasta que se mezclarían obteniendo una disolución de igual concentración. Realmente, el paso no es en un único sentido. Pero la proporción es mucho mayor desde el lado de menor concentración al de mayor, que el inverso. La diferencia de presión que se crearán a ambos lados de la membrana, es lo que se denomina presión osmótica.

Difusión La difusión (también difusión molecular) es un proceso físico irreversible, en el que partículas materiales se introducen en un medio que inicialmente estaba ausente, aumentando la entropía (desorden molecular) del sistema conjunto formado por las partículas difundidas o soluto y el medio donde se difunden o disuelven. Normalmente los procesos de difusión están sujetos a la ley de Fick. La membrana permeable puede permitir el paso de partículas y disolvente siempre a favor del gradiente de concentración. La difusión, proceso que no requiere aporte energético, es frecuente como forma de intercambio celular.

Difusión Movimiento espontáneo de partículas desde una zona de mayor concentración hay una zona de menor concentración.

Ósmosis Movimiento del solvente, no de las partículas del solvente desde la zona de menor concentración hacia la zona de mayor concentración a través de una membrana Semipermeable.

La ósmosis requiere una solución con un La difusión puede ocurrir en cualquier solvente líquido. medio y en cualquier tipo de partículas: líquidos, gases, sólidos No intervine membrana semipermeable Se necesita de una membrana permeable Iguala la concentración de la partícula Iguala la concentración con una distribución con una distribución homogénea en el no homogénea de solvente y solutos a ambos espacio disponible lados de la membrana semipermeable.

4. ¿Por qué los sueros fisiológicos que se aplican a pacientes intravenosamente deben ser isotónicos? Si a un paciente se le inyecta una solución hipotónica, es decir de mayor concentración que el plasma de la sangre, aumentas la concentración y esta sería mayor a la de las células que están en la sangre, por lo que, por el mecanismo de osmosis, el solvente entra a la célula hinchándola y ´pudiendo hasta reventarla. Si se le inyecta una solución hipotónica, ocurre lo contrario, es decir, cambia la

concentración de solutos de la sangre disminuyéndola, por ende, las células de la sangre van a "vaciar" sus solutos al medio circundante por lo que la célula se achica y se arruga. Si la solución es isotónica, es decir de igual concentración que las células de la sangre, entonces no pasa nada. Es por esto que inyectas este tipo de solución cuando quieres hidratar una persona, ya que se dice que está deshidratado cuando disminuyen las sales dentro de las células, perdiendo agua (ya que las sales siempre van con su equivalente osmótico, es decir retienen agua donde estén) y es lo que le falta a la célula, sales, entonces las das en la concentración que debieran estar de manera que se equilibren ambos medios dentro y fuera de la célula, eso es la hidratación.

Practica 5. “Acción de lisosomas”

Introducción Las sustancias que penetran en la célula por fagocitosis o pinocitosis van a experimentar la acción de las enzimas digestivas intracelulares, contenidas en orgánulos llamados lisosomas. Estos orgánulos son corpúsculos esféricos que miden aproximadamente 0.5 micrómetros, están delimitados por una unidad de membrana y contienen enzimas hidrolíticas. Se han encontrado lisosomas en todas las células animales y vegetales. Los lisosomas promueven la digestión intracelular, tanto del material exógeno que penetra en la célula por pinocitosis, como también el material endógeno. Este último puede estar constituido por orgánulos degenerados o por productos de desasimilación del metabolismo celular. Material • • • • • • • • • • •

Microscopio compuesto Porta y cubreobjetos. Pipeta de un ml. Mechero de Bunsen 6 tubos de ensaye 15 x 150 mm. Gradilla. Pinzas Tela de asbesto. Tripee Recipiente para baño María. Pipeta Pasteur con goma. Termómetro. Hoja de papel aluminio.

Reactivos • • • •

Solución de Rojo Congo al 0.4% Material biológico Cultivo de levaduras de pan. (30 ml.) Cultivo de ciliados (Paramecium spp.) por cada equipo. Procedimiento 1.- En tres tubos de ensayo, coloque en cada uno de ellos un mililitro del cultivo de levaduras. Un tubo se pone en el refrigerador durante 10 minutos. Otro se coloca en el baño María a 30ºC, y el último se tapa con papel aluminio y se pone en un baño María hirviendo durante 10 minutos. 2.- Al término de la exposición de cada temperatura, se coloca de inmediato en cada tubo 0.5 ml de rojo de Congo al 0.4%. Agite cada tubo y deje en reposo durante 5 minutos. Realice las observaciones al microscopio de cada uno de los tubos, poniendo atención al grado de tinción que se presenta. 3.- En base en sus observaciones seleccione el cultivo de levaduras para cumplir mejor el objetivo de su práctica. Coloque sobre un portaobjetos unas gotas del cultivo de levaduras con gotas del cultivo de ciliados. Observe al microscopio y realice un esquema inicial. Siga observando cuidadosamente hasta visualizar de manera análoga la función de los lisosomas en ciliados (cambio de color). Presentación de resultados Presentar los siguientes esquemas:   

Cultivo de levaduras a 0-4°C Cultivo de levaduras a 10°C Cultivo de levaduras a 40°C

LEVADURAS. 4X

10X

40X

Cuestionario 1.- Tomando en cuenta tus observaciones experimentales, ¿Qué ocurre con las células de levadura dentro de los ciliados y por qué? Rta: Se puede observar la decoloración y notar como la levadura va siendo desintegrada por los ciliados, debido al proceso de digestión intracelular de la levadura.

2.- Discuta el mecanismo que ocurre al calentar las levaduras y al agregar el colorante. Rta: se puede ver que al agregar el rojo congó a la levadura previamente preparada le da coloración a los lisosomas y se nota a los ciliados comerse a la levadura y como cambian de color.

3.- Realice en esquemas, el origen y las funciones de los diversos tipos de lisosomas Rta:

LOS LISOSOMAS

PERMITE LA DIGESTION INTRACELULAR DE MACROMOLECULAS (SON EL ESTOMAGO DE LA CELULAR) EXISTEN 2 TIPOS.

LISOSOMA PRIMARIO

SON LOS QUE SALEN DEL APARATO DE GOLGI,QUE CONTIENEN ENZIMAS PERO AUN NO PARTICUIPAN DEL PRIOCESO DE LA DIGESTION

LISOSOMA SECUNDARIO SE FORMAN AL UNIRCEN CON OTRAS VESICULAS,ADEMAS YA HAN REALIZADO EL PROCESO DE LA DIGESTION Y DEPENDIENDO DE LO QUE HAN DIRIGIDO SE DENOMINA VACUOLAS HETEROFAGICAS O VACUOLAS AUTROFAGICAS

Practica 6. “Tejidos vegetales: Aislamiento de cloroplastos intactos”

Introducción

La célula es la unidad básica de la vida que contiene una amplia variedad de distintos tipos de orgánulos. Si se requiere estudiar la función particular de los cloroplastos u otro orgánulo resulta de gran valor poder aislar en estado puro el orgánulo que interesa. La separación de un orgánulo, por lo general se hace mediante la técnica de centrifugación diferencial, la cual depende del principio de que las partículas de tamaño diverso se desplazan hacia el fondo del tubo de centrifuga a diferentes velocidades cuando se les coloca en un campo centrífugo.

Una suspensión de material de células rotas se somete al principio de la fuerza centrífuga muy baja durante un corto período de tiempo, de modo que solo los núcleos y las células íntegras se sedimentan formando un precipitado. Con fuerzas centrífugas cada vez mayores se pueden separar los cloroplastos y las mitocondrias en suspensión, luego los micro somas y para finalizar los ribosomas. Este último paso requiere de una ultracentrífuga, la cual genera velocidades que producen hasta 100 000 veces la fuerza de la velocidad.

Los cloroplastos cuando son aislados cuidadosamente son capaces de reducir el colorante 2,6-Diclorofenol-Indo fenol (DCPIP), lo cual debe ser medido espectrofotométricamente comparado con una muestra control. La reducción se debe a que capta los electrones en lugar del NADPox en la parte no cíclica de la fotosíntesis. Ensayar un método de aislamiento de cloroplastos y observar su funcionamiento en condiciones óptimas y con “SHOCK” osmótico.

Procedimiento Las etapas realizadas se explican en el siguiente flujo de proceso:

Cuestionario Explique porque durante el aislamiento de cloroplastos se trabaja a bajas temperaturas y además porque se utiliza una solución buffer salina. Analice en detalle los resultados obtenidos para cada tubo. Describir brevemente otra técnica para determinar fotosíntesis. Nombre la materia prima y los productos para cada fase de la fotosíntesis.

A continuación se prepara los 4 tubos de ensayo envueltos en papel aluminio:

Tubo

Solución de DCPIP 0.3 M. Buffer Salino Suspensión cloroplastos con SHOCK osmótico Suspensión de Cloroplastos intactos

3 (este tubo no se expone a la luz)

4 (Blanco)

1

2

0.5 ml

0.5 ml

0.5 ml

0.5 ml

9.5 ml

9.5 ml

9.5 ml

9.5 ml

0.2 ml

__

__

__

__

0.2 ml

0.2 ml

__

Con el tubo 4 calibrar a 0 % Absorbancia a una longitud de onda 450 nm. Leer la solución de los tubos 1, 2 y 3 antes de exponer a la luz. Exponer tubos 1, 2 y 4 a la luz a 15 cm del foco por un 1 min. Taparlos y leer la Absorbancia de la solución de los tubos 1, 2 y 3.

Calibrar el aparato con el tubo 4 cada vez. Repetir cuatro veces para un total de 5 min de exposición (cada minuto). Graficar: Absorbancia (450 nm) contra tiempo de exposición a la luz Tabla de los datos experimentales obtenidos. Tubo/Tiempo de exposición Tubo 1. Suspensión cloroplastos con SHOCK osmótico Tubo 2. Suspensión de Cloroplastos intactos (expuesto a la luz) Tubo 3. Suspensión de Cloroplastos intactos (no expuesto a la luz) Tubo 4. Blanco

0 min

10 min

12 min

4 min

6 min

2.10

2.4

2.45

2.34

2.45

3.63

3.45

3.55

3.50

3.34

2.61

2.53

2.36

2.47

2.52

-

-

-

-

-

Gráfica de absorbancia (450 nm) contra tiempo de exposición a la luz.

ABSORBANCIA A 450 nm

4 3,5 3 2,5

Tubo 1

2

Tubo 2

1,5

Tubo 3

1 0,5 0 0 min

4 min TIEMPO6(MINUTOS) min 10 min

12 min

Cuestionario

Explique por qué durante el aislamiento de cloroplastos se trabaja a bajas temperaturas? R/ Para demorar la degradación de los componentes celulares.

Por qué se utiliza una solución buffer salina? R/ Para mantener un medio isotónico estable de iones (Na+, K+ y Cl-) y estabilizar la célula evitando su desnaturalización.

Analice en detalle los resultados obtenidos para cada tubo. R/ Se logra ver una gran absorbancia cuando la solución contiene cloroplastos Intactos y expuestos a la luz (tubo 2). La solución no expuesta a la luz (tubo 3) en general presenta una disminución En la absorbancia, indicando que se está llevando a cabo la fotosíntesis.

La solución con SHOCK osmótico (tubo 1) se observa un aumento constante en la absorbancia.

Describir brevemente otra técnica para determinar fotosíntesis. Todos los métodos para medir fotosíntesis se basan en la medición del intercambio gaseoso (CO2 – O2) que ocurre durante el proceso, entre ellos los métodos por producción de oxígeno, por medición del CO2 absorbido, por porometria y recuento de burbujas. Ejemplo: Determinación del oxígeno disuelto por el Método de Winkler. Inmediatamente después de que se haya tomado la muestra de agua, se añade 2 cm3 de cloruro de manganeso al 50 por 100 en solución y 2 cm3 de reactivo Winkler (100 g de hidróxido potásico y 60 g de yoduro potásico en 200 cm3 de agua) usando pipetas* que lleguen bastante debajo de la superficie. Esto puede hacer que se derrame algo de agua de la parte de arriba. Volver a colocar la tapa, quitando el aire, y mezclar completamente invirtiendo y girando la botella con fuerza. Se forma un precipitado de hidróxido manganoso, pero el oxígeno del agua puede transformar parte de éste en una cantidad equivalente de hidróxido mangánico.

Al volver al laboratorio, dejar reposar el precipitado. A continuación introducir* cuidadosamente 2 cm3 de ácido sulfúrico concentrado, reponiendo el tapón rápidamente y evitando la introducción de aire o la pérdida de precipitado. Mezclar completamente por rotación hasta que se disuelva el precipitado; el hidróxido mangánico oxida el yoduro potásico en una cantidad equivalente a la de yodo libre. Puede hacerse una estimación aproximada a partir del color del yodo. La comparación con cristales standard en un comparador B.D.H o la titulación darán una determinación más precisa. Titulación: girar para mezclar; a continuación, usando una pipeta, llevar 100 cm3 de la botella de muestra a un recipiente cónico. Titular inmediatamente con solución N/80 normalizada de tiosulfato sódico hasta que solamente quede un débil color amarillo; agregar unas pocas gotas de solución de almidón recién preparadas, y a continuación añadir más tiosulfato gota a gota justamente hasta que desaparezca el color azul. Cada cm3 de tiosulfato utilizado es equivalente a 1 mg de oxígeno por litro; así, x cm3 de tiosulfato implican una concentración de oxígeno de x mg por litro.

Nombre la materia prima y los productos para cada fase de la fotosíntesis. A Sachs se debe la formulación de la ecuación básica de la fotosíntesis: 6 CO2 + 6 H2O + Energía solar → C6H12O6 + 6 O2 (Dióxido de carbono + agua + Energía Lumínica → Glucosa + Oxigeno)

DCPIP El 2,6-diclorofenolindofenol es un compuesto químico utilizado como tinte redox. Cuando se oxida, DCPIP es azul con una absorción máxima a 600 nm; cuando se reduce, DCPIP es incoloro. DCPIP se puede usar para medir la tasa de fotosíntesis. Es parte de la familia de reactivos de Hill. Cuando se expone a la luz en un sistema fotosintético, el tinte se decolora por reducción química. DCPIP tiene una mayor afinidad por los electrones que la ferredoxina y la cadena de transporte de electrones fotosintética puede reducir DCPIP como un sustituto de NADP+, que normalmente es el portador final de electrones en la fotosíntesis. A medida que DCPIP se reduce y se vuelve incoloro, el aumento resultante de la transmitancia de la luz se puede medir usando un espectrofotómetro.

(Color azul)

(Incoloro)

Practica 7. “Meiosis y Mitosis”

Objetivo Aprender a diferenciar los periodos del ciclo celular.

MATERIAL      

Microscopio Aceite de inmersión. Acetocarmin Metanol, Bisturí Micro preparado que ilustran los de mitosis y meiosis.

Procedimiento 1. Con ayuda de una pinza retire la capa externa marronacea o rosácea y lave con abundante agua, esto se realiza para eliminar restos de sustancias con las que frecuentemente han sido tratadas para inhibir o redactar la germinación de las raicillas. 2. Llene un vaso de precipitados con agua y coloque un bulbo de cebolla sujeto con dos o tres palillos de manera que la parte inferior quede inmersa en el agua.

3. Póngalo a germinar a 25°C a temperatura ambiente durante 3 días, al cabo de estos aparecerán numerosas raicillas en el crecimiento de unos 3 o 4 cm. De longitud. 4. Revise diariamente y procure que la corona no se deseque para lo cual es necesario rellenar con agua cada 24 horas.

5. Cuando las raíces tengan entre 0.5 y 1 cm de longitud, realice cortes de raíz de aproximadamente 2 -3 mm a partir del ápice. 6. Colóquelas en una lámina portaobjetos. Adiciona una gota del colorante acetocarmin.

7. Coloque el cubreobjetos con mucho cuidado sobre la raíz. Con ayuda de la punta de una lanceta, de unos golpecitos sobre el cubreobjetos sin romperlos, de modo que la raíz quede extendida.

8. Use papel absorbente para retirar el exceso de colorante realice una suave presión evitando que el cubreobjetos resbale si la preparación está bien aceptada no hay peligro de obtura por mucha presión que se realice.

9. Selle todos los bordes del cubreobjetos con esmalte trasparente para evitar que se seque y de esta manera conservar la preparación durante varios días. 10. Coloque la preparación al microscopio e inicie la observación con el objetivo de 10x e identifique las células.

11. Cambie al objetivo de 40x para detallar las células. Observe los núcleos y cromosomas en color rosáceo – morado. 12. Ubique el objetivo de 100x y escriba sus observaciones notando las diferencias en cada uno de los aumentos mencionados.

13. Trate de observar determinadamente las preparaciones y distingan células en interface y células en división y dentro de estas, las diferentes etapas de la mitosis.

Presentación de resultados



MEZCLA CON GLISEROL

1. El glicerol es una molécula de tres carbonos similar al alcohol. Aparece naturalmente en el cuerpo como un componente de la grasa almacenada; un pequeña cantidad también está presente en los fluidos corporales como glicerol libre. Cuando el glicerol es ingerido, es absorbido e incrementa la concentración (término técnico: osmolaridad o tonicidad) del fluido en la sangre y en los tejidos. La concentración de estos fluidos se mantiene constante a través del cuerpo, por lo cual el agua consumida con glicerol no es excretada hasta que el glicerol extra es o eliminada por los riñones o degradado por el cuerpo (Freund y cols 1995).



MEZCLA CON BUTANOL

2. El n-butanol se emplea como disolvente de pinturas, lacas, barnices, resinas naturales y sintéticas, gomas, aceites vegetales, tintes y alcaloides. Se utiliza como sustancia intermedia en la fabricación de productos químicos y farmacéuticos, y en las industrias de cuero artificial, textiles, gafas de seguridad, pastas de caucho, barnices de laca, impermeables, películas fotográficas y perfumes. El sec-butanol se utiliza también como disolvente y producto químico intermedio, y se encuentra en líquidos hidráulicos de frenos, limpiadores industriales, abrillantadores, decapantes de pinturas, agentes de flotación para minerales, esencias de frutas, perfumes y colorantes. 

MEZCLA CON METANOL

3. El Metanol se usa en sistemas de refrigeración, por ejemplo en plantas de etileno, y como anticongelante en circuitos de calentamiento y enfriamiento. Sin embargo, su uso como anticongelante en motores ha disminuido drásticamente gracias al uso de productos derivados del glicol. El Metanol se adiciona al gas natural en las estaciones de bombeo de las tuberías para prevenir la formación de hidratos de gas a bajas temperaturas y se puede reciclar después de que se remueve del agua. El Metanol también se usa como un agente de absorción en depuradores de gas para remover, por ejemplo, dióxido de carbono y sulfuro de hidrogeno. Una gran cantidad de Metanol se usa como solvente. El Metanol puro no se usa comúnmente como solvente, pero se incluye en mezclas solventes.



MEZCLA DE ACIDO CITRICO

4. o es un inhibidor de la cristalización de sales de calcio (quelante cálcico) y su estimación puede ser de valor en la investigación de un paciente con riesgo de nefrolitiasis. Además, es un potente inhibidor de la aglomeración de cristales de oxalato de calcio preformados. Se sabe que la formación de cálculos se debe a cambios fisicoquímicos que ocurren en la orina, entre los más importantes el desequilibrio entre los constituyentes formadores de cálculos y los inhibidores así como el pH urinario. Un número importante de inhibidores han sido identificados, pero el pirofosfato, el magnesio y el citrato son responsables del 77% de esta inhibición. Resulta interesante que sólo el citrato contribuye con el 50% de esta actividad inhibitoria. Ha sido ampliamente reconocido que la composición de electrolitos urinarios es frecuentemente anormal en pacientes con nefrolitiasis cálcica. Además de la hipercalciuria otros desórdenes identificados incluyen hiperuricosuria, hiperoxaluria y excesiva acidez en la orina.



MEZCLA DE OXALATO DE AMONIO

5. También llamada anticoagulante de Wintrobe. Contiene oxalato de amonio, oxalato de potasio, formol y agua. Para 5ml de sangre se utilizan 0.5ml de la mezcla de anticoagulante (desecado en estufa a 37ºC o a temperatura ambiente antes de utilizarlo); esta solución anticoagulante actúa como tal para fijación de calcio y debe usarse siempre desecado para no diluir la sangre.  MEZCLA DE SSN BUFFER SALINO 1. Preparación de mezclas 2. CLASIFICACIÓN DE LAS SOLUCIONES INTRAVENOSAS 3. CRISTALOIDES O COLOIDES 4.  Cristaloides  Mantienen equilibrio hidroelectrolítico.  Aportan energía  El 50% del volumen tarda 15’ en abandonar el espacio intravascular.  Coloides  Actúan como expansores plasmáticos.  Efectos hemodinámicos más rápidos y duraderos.  Favorecen perfusión tisular. 5. Hipotónicas SS1/2 o SS0,45% SSN o SS0,9% Isosmóticos Lactato de Ringer Glucosadas 5% AD; SSN Hipertónicas SS 3%; ss7,5% Glucosadas 10% y 50% TIPOS DE CRISTALOIDES 6. Las soluciones más sencillas están formadas por dos componentes llamados soluto y solvente. El soluto es la fase dispersa y se encuentra en menor proporción en la solución. LAS SOLUCIONES SON MEZCLAS HOMOGÉNEAS FORMADAS POR DOS O MÁS SUSTANCIAS. 7. Cuando las células están en una solución isotónica,

Cuestionario 

¿Qué etapa de la meiosis y mitosis observo? RTA: En muchas formas, la meiosis es muy similar a la mitosis. experimentan cuatro etapas: profase, metafase, anafase y telofase.



¿Qué proceso se está desarrollando en las etapas observadas? RTA: LA MEZCLA DEL GLISEROL EN LA SANGRE: que las moléculas del soluto son muy grandes y se separan. BUTANOL: Es más liviano que el glicerol. METANOL: Cuájalo la sangre. ACIDO CITRICO: Oscureció la sangre. OXALATO DE AMONIO: Aclaro la sangre.



¿Qué tipo de células se están observando? RTA: Se pueden observar la célula diploide y la célula haploide.

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¿Cuántos cromosomas poseen las células en mitosis? RTA: Cada una de las células humanas posee 46 cromosomas.



¿Cuántos cromosomas poseen las células en meiosis? RTA: En la meiosis la cosa es más complicada, debido a que las cel. Se duplican cierto!! (96 cromosomas) pero pasa que los cromosomas se dividen (ojos los cromosomas, no las cel.) en cromatides(que pueden ser consideradas como cromosomas) por lo tanto de la meiosis el resultado es de184 cromatides,, la diferencia entre ambos radica en que los las cel. Resultantes en la meiosis poseen cromosomas partidos a la mitad que se denominan cromatides..

CONCLUSIONES

En esta práctica de laboratorio entendimos que las normas de bioseguridad son muy importantes para el desarrollo del aprendizaje y el ponerlas en práctica estaremos cuidando nuestra salud y la de nuestros compañeros. Los microscopios son herramientas fundamentales para el conocimiento de algunos organismos que no podemos ver a simple vista. Se pudo observar que en nuestro medio más de una forma de vida y que cada una es importante y ejerce un papel fundamental dentro de nuestra existencia. Los cloroplastos son los orgánulos de las células vegetales donde se realiza la fotosíntesis al convertir la energía lumínica en energía química (ATP). En la práctica se realizó un protocolo para el aislamiento de cloroplastos de hojas de espinaca que permitió conocer los principales reactivos, soluciones, materiales biológicos, equipos, y condiciones necesarias para reproducir la función de los cloroplastos en condiciones de laboratorio. En las reacciones de las soluciones se desprendió oxígeno, el cual fue difícil de detectar. El DCPIP se empleó como un aceptor de electrones reemplazando la ferredoxina y el NADP. Se explicó el de método de Winkler como otra alternativa para determinar la fotosíntesis.

PREGUNTAS -

que es diclorofenol

Es un derivado del clorado del fenol con la fórmula química C6H4Cl2O Utilizado principalmente en la preparación del herbicida ácido 2,4diclorofenoxiacético. Esta sustancia puede ser absorbida por los tejidos biológicos por exposición a agua en la que se encuentre disuelto o a través de la ingestión de pescado contaminado. También se está expuesto, por inhalación, en las industrias en las que se usa como producto como tratamiento de madera, textiles, papel y fabricación de pesticidas, desinfectantes. -

Cascada de coagulación

El proceso de coagulación que lleva a la hemostasia consiste en un conjunto complejo de reacciones de proteasas en el que participan aproximadamente 30 proteínas diferentes.22 Estas reacciones convierten fibrinógeno, una proteína soluble, en filamentos insolubles de fibrina, que, con las plaquetas, forman un trombo estable. Factores de coagulación

Fa ctor

Características

I

Fibrinógeno, proteína soluble del plasma

II

Protrombina, está pegada a la membrana plaquetaria (Sustancias Adsorbidas).

III

Factor tisular, se libera del endotelio vascular a causa de una lesión

IV

Calcio

V

Proacelerina, (factor lábil) pegada a la membrana plaquetaria

VII

Proconvertina (Factor estable)

VIII

IX

Factor anti hemofílico A, está pegado a la membrana plaquetaria

Factor Christmas o beta adrenérgico (también llamado anti hemofílico B), está pegado a la membrana plaquetaria

X

Factor de Stuart-Prower, está pegado a la membrana plaquetaria

XI

Factor antihemofílico C

XII

Factor de Hageman

XIII

Factor estabilizante de la fibrina

XIV

Proteína C o autotrombina II-A, dependiente de la vitamina K

REFERENCIAS

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