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TEORIA RELACIONADA Los cuerpos cetónicos son los ácidos acetoacetico, la acetona y el ácido β-hidróxibutirico. En la cetosis, hallamos un aumento de estas sustancias en la sangre y en la orina. Bajo buenas condiciones de salud, los cuerpos cetónicos se forman en el hígado y son completamente metabolizados, de tal manera que solo cantidades insignificantes aparecen en la orina. Por el contrario, en casos de diabetes, inanición, vómitos con deshidratación y después de ejercicio vigoroso, los cuerpos cetónicos pueden encontrarse en cantidades apreciables en la orina, lo cual permite su determinación cualitativa. La determinación de acetona (Método de Imbert), de fundamenta en la formación de un ferropentacianuro con el derivado isonitrato de la acetona, la determinación del ácido acetoacético (Método de Gerhrdt), se basa en al aparición de una coloración rojo-vinosa con el cloruro férrico y en el método de Hart, el ácido β-hidróxibutirico es transformado en acetona, la cual se identifica mediante el reactivo de Imbert.

MATERIALES Y REACTIVOS Tubos de ensayo Gradilla Pipetas Beaker de 250 mL Cápsula de porcelana Pinzas para crisol Pinzas para tubos de ensayo Agua destilada Orina de diabético Acido acético glacial Amoniaco Cloruro férrico al 10% Peróxido de hidrógeno al 10% Nitroprusiato de sodio al 5% en CH3COOH al 50% PROCEDIMIENTO DETERMINACIÓN DE ACETONA: A 5 mL de orina, agregue 0.5 mL de nitroprusiato de sodio disuelto al 5% en ácido acético al 50%, adicione 0.5 mL de amoniaco por las paredes del tubo, la aparición de un anillo rojo violáceo en 1 contacto de los líquidos, es indicativo de la presencia de acetona. DETERMINACIÓN DE ÁCIDO ACETOACÉTICO A 5 mL de orina se adicionan unas gotas de cloruro férrico, en presencia de ácido acetoacético se produce una coloración rojo-vinosa.

DETERMINACIÓN DE ÁCIDO Β-HIDRÓXIBUTIRICO En una cápsula de porcelana se mezclan 10 mL de agua y 10 mL de orina, se acidifica con unas 5 gotas de ácido acético y se calienta en una estufa hasta reducir el volumen a la mitad. Con este calentamiento se eliminan la acetona y el ácido acetoacético, al contenido de la cápsula se le agregan 10 mL de agua y se transfiere en partes iguales a dos tubos de ensayo, uno de estos tubos servirá como control, al otro se le adiciona 1 mL de peróxido de hidrógeno al 10% y se calienta en baño de María por 5 minutos, se deja enfriar y finalmente se practica la prueba de Imbert a ambos tubos. PREGUNTAS DE ACTIVIDAD COMPLEMENTARIA. 1. Qué otro tipo de sustancias pueden determinarse en la orina por un metabolismo anormal de lípidos?. 2. Qué es la cetosis y la cetonuria. 3. Explique cómo se forman los cuerpos cetónicos y bajo que condiciones.

CUERPOS CETONICOS EN ORINA. Método de Imbert. FASE PREANALITICA INTRODUCCION: En condiciones normales se pueden encontrar en la orina pequeñas cantidades de acetona, ácido acetil acético y betahidroxibutirato no revelable por las reacciones ordinarias empleadas en el laboratorio. Estos compuestos proceden del metabolismo graso y se consideran patológicos cuando las cifras son mayores de 20 a 25 mg diarios. Objetivo: Determinar cualitativamente cuerpos cetónicos en muestras de orina. Fundamento: En presencia de nitroprusiato, la acetona da lugar a un compuesto coloreado (color violeta) llamado ferropentacianuro. Reactivo necesario: -Reactivo de Imbert. -Amoniaco. Aparatos, utensilios y medios de medición. 

Tubos plásticos de 10 ml graduados de centrífuga.

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Tubo para ensayo de 13 x 100 ó 15 x 125 mm.

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Gradilla para los tubos de ensayos.

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Pipetas graduadas de 5 ml.

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Gotero.

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Centrífuga.

Muestra: Orina de micción espontánea, más de 5 ml. FASE ANALITICA

Procedimiento: 

1- Centrifugar la orina 5 min a 1500 rpm.

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2- Colocar en un tubo de ensayo 5 ml de orina centrifugada o filtrada.

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3- Añadir 5 gotas de reactivo de Imbert.

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4- Mezclar.

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5- Añadir por las paredes del tubo evitando que se mezclen 1 a 2 ml de amoniaco.

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6- La lectura se realiza en la superficie de ambos líquidos.

Positiva: Si aparece un anillo de color violeta entre ambos líquidos cuya intensidad varía aproximadamente a la cantidad de acetona que contenga la orina. Negativa: No aparece el anillo. En los casos positivos se calienta la muestra y si el anillo desaparece se trata de acetona, ya que esta es volátil, pero si persiste se trata de la presencia de alguno de alguno de los medicamentos que dan falsos positivos como: ácido acetil salicílico (aspirina). FASE POSTANALITICA Informe de los resultados: Se informará el resultado: Positiva: Si aparece un anillo de color violeta. De acuerdo con la intensidad del anillo se informa en ligero positivo, positivo, o intenso positivo, algunos lo informan con cruces. Negativa: No aparece el anillo. Fuentes de Error 

1. No homogenizar bien las muestras de orina.

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2. Nivel de adiestramiento del técnico.

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3. Limpieza de la cristalería.

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4. No centrifugar la muestra antes de proceder.

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5. Uso de reactivos caducados