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IDENTIFICACIÓN DE LOS CUERPOS CETONICOS EN LA ORINA. DETERMINACION SEMICUANTITATIVA DE CUERPOS CETONICOS EN ORINA I. INTRODUCCION: La beta oxidación de los ácidos grasos en el hígado, a nivel mitocondrial, produce acetil CoA que ingresa al Ciclo de Krebs y en parte se utiliza en la síntesis de cuerpos cetónicos (cetogénesis). Estos son el ácido acetoacético, el ácido beta hidroxibutírico y la acetona. Los dos primeros pasan a la sangre y son fuente de energía en los tejidos extrahepáticos como el corazón y el músculo esquelético, incluyendo el cerebro en el ayuno prolongado. Los cuerpos cetónicos son eliminados por la orina y la acetona también por la respiración. Su concentración normal en orina es de 125 mg/ 24 horas, y en sangre hasta 1mg/dl. Aumentan en sangre (cetonemia) y en orina (cetonuria) por condiciones fisiológicas como el ayuno prolongado, en la dieta pobre en carbohidratos. En condiciones patológicas como la Diabetes mellitus, el hiperinsulinismo, en la enfermedad de Von Gierke y otras glucogenosis, en los vómitos, en el síndrome de Fanconi, en toda hipercatabolia como la fiebre, hipertiroidismo. En la Diabetes mellitus, el aumento de la lipólisis, de la beta oxidación y de la cetogénesis, al superar la capacidad de oxidación de los tejidos extrahepáticos lleva a niveles aumentados de cuerpos cetónicos. Dado que éstos son ácidos se produce acidosis metabólica, la denominada cetoacidosis diabética. El diagnóstico y monitoreo de su tratamiento se hace con su determinación en sangre o/i orina.

II. MATERIALES Y REACTIVOS A UTILIZAR: -

Sulfato de amonio, cristales. Nitroprusiato de sodio, solución al 10% en H2O Cloruro Férrico, solución al 5% en H2O)

III. ACTIVIDADES INSTRUCCIONALES (Procedimiento) a. INVESTIGACION DE ACETONA - Disponer de dos tubos que contengan orina normal y orina patológica. Prueba de Legal El nitroprusiato de sodio diluido en presencia de cuerpos cetónicos, especialmente de acetona, rinde un color azul violeta. Procedimiento: Armar el siguiente sistema:

COMPONENTES TUBO Orina 3 ml Cristales de sulfato de amonio 0.5 g Mezclar hasta disolver los cristales de Sulfato de Amonio. Nitroprusiato de sodio 10% 3 gotas Amoníaco (agregar lentamente por las paredes del tubo, sin mezclar) 1ml _________________________________________________________________________ Anotar sus resultados.

Prueba de Rothera  Trabajar del tubo identificado como orina patológica  Utilizar nitroprusiato en polvo, de la siguiente manera:  En una lámina de porcelana con excavaciones colocar 0.2 g de reactivo sólido de nitroprusiato de sodio en cada una de éstas.  Diluir la orina al 1/10, 1/20, 1/30, etc; de la siguiente manera:

AGUA 0.9 cc 1.9 cc 2.9 cc 3.9 cc 4.9 cc  

+ + + + +

ORINA 0.1 cc 0.1 cc 0.1 cc 0.1 cc 0.1 cc

→ → → → →

DILUCION 1/10 1/20 1/30 1/40 1/50

Agregar una gota de cada una de las diluciones, en cada una de las excavaciones que contiene el reactivo. Observar la máxima dilución de la orina en el que aparece color azul violeta y multiplicar por el denominador de la dilución alcanzada por 10 y se tendrá la cantidad aproximada de acetona en mg por 100ml.

Esto es debido a que el nitroprusiato de sodio en polvo da reacción positiva solo cuando en la orina sin diluir alcanza la concentración mínima de 10 mg% de acetona y por eso, para calcular la concentración en orina diluida, se debe multiplicar por 10 el número de veces que se ha diluido ésta. Este método con sus dos variantes es posible aplicarlo al suero sanguíneo, para investigar acetona y tener una cifra aproximada en su cuantía. Uso de tira reactiva. Sumergir la tira en el frasco conteniendo la orina. Esperar 20 segundos, leer en escala colorimétrico, estimando la concentración como negativo 5, 15, 50, 150 mg/dl.

b. INVESTIGACIÓN DE ACIDO ACETOACETICO Armar dos sistemas que contengan orina normal y patológica. Prueba de Cloruro Férrico o de Gerhart. Se basa en que en presencia de cloruro férrico, el ácido acetoacético rinde una coloración rojo burdeos. Procedimiento (Se utiliza orina filtrada):

COMPONENTES Orina filtrada Cloruro Férrico, solución 5% en agua

TUBO 5 ml gota a gota hasta la aparición del Color rojo burdeos si existe ácido Acetoacético

IV. CUESTIONARIO: 1. Realice una comparación entre la síntesis de cuerpos cetónicos con la etapa inicial de la síntesis de colesterol. 2. Defina: cetonemia, cetonuria, cetoacidosis y de ejemplos de cada uno de ellos. 3. Compare los métodos para determinar los cuerpos cetónicos. 4. Cuál es la importancia de la cuantificación de los cuerpos cetónicos en el monitoreo de la cetoacidosis. 5. Cuál es el mecanismo fisiopatológico de la cetoacidosis en un paciente que llega al hospital por alcoholismo agudo