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• Roosvelt Cruz Córdova

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BACTERIOLOGÍA 1

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USAMEDIC 2017

LOS SERES VIVOS BACTERIOLOGIA • DOMINIOS • BACTERIA • ARCHAEA • EUKARYA

Dr. Juan Vega Bazalar Medicina Interna HNGAI USAMEDIC

DOMINIOS

LOS SERES VIVOS • DEFINICION – Conjunto de átomos y moléculas que forman una estructura material muy organizada y compleja que se relaciona con el medio ambiente y que tienen la capacidad de desarrollar las funciones básicas de la vida. – La propiedades básicas de un ser vivo son: organización, homeostasis, irritabilidad, metabolismo, desarrollo y reproducción.

LOS SERES VIVOS • DEFINICION – La materia que compone los seres vivos esta formada en un 95% por 4 bioelementos (átomos) que son el carbono, hidrógeno, oxígeno y nitrógeno a partir de los cuales se forman las biomoléculas. – Existen 2 tipos de biomoléculas: • Orgánicas: glúcidos, lípidos, proteínas y ácidos nucleicos. • Inorgánicos: agua, sales minerales y gases.

LOS SERES VIVOS • CATEGORIAS TAXONOMICAS DOMINIO REINO FILO CLASE ORDEN FAMILIA GENERO ESPECIE SUBESPECIE

LOS SERES VIVOS • REINOS – – – – – –

REINO ARCHAEABACTERIA REINO EUBACTERIA REINO PROTISTA REINO FUNGI REINO PLANTAE REINO ANIMALIA

REINOS

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ROBERT HOOKE

LOS SERES VIVOS • DOMINIO BACTERIA – REINO • EUBACTERIA

• DOMINIO ARCHAEA – REINO • ARCHAEABACTERIA

• DOMINIO EUKARIA – REINOS • PROTISTA • FUNGI • PLANTAE • ANIMALIA

LOS SERES VIVOS

LOS SERES VIVOS • PROCARIOTICOS – BACTERIAS – CIANOBACTERIAS – ARQUEOBACTERIAS

• TIPOS DE CELULAS – CELULAS PROCARIOTICAS • DOMINIO BACTERIA • DOMINIO ARCHAEA

• EUCARIOTICOS – – – –

– CELULAS EUCARIOTICAS • DOMINIO EUKARIA

PROTOZOOS HONGOS PLANTAS ANIMALES

LOS SERES VIVOS

EL MUNDO MICROBIANO Clasificación Woese et. al. 1977

REINO

CELULA

EUBACTERIA

PROCARIOTICA

BACTERIAS ACTINOMICETOS

ARCHAEBACTERIA

PROCARIOTICA

BACTERIAS

PROTISTA

EUCARIOTICA

PROTOZOOS

FUNGI

EUCARIOTICA

HONGOS

PLANTAE

EUCARIOTICA

PLANTAS

ANIMALIA

EUCARIOTICA

ARTROPODOS MAMIFEROS HOMBRE

CARACTERISTICA

CEL. BACTERIANA PROCARIOTICA

CELULA HUMANA EUCARIOTICA

DNA/MEMB. NUCLEAR

NO

SI

DIVISION MITOTICA

NO

SI

DNA ASOCIADO A HISTONAS

NO

SI

Nº CROMOSOMAS

UNO

MAS DE UNO

ORGANELAS CON MEMBRANAS

NO

SI

TAMAÑO RIBOSOMA

70 S

80 S

PARED CELULAR PEPTIDOGLICANO

SI

NO

CELULA PROCARIOTICA

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CELULA BACTERIANA

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LOS SERES VIVOS • TAXONOMIA BACTERIA (D) EUBACTERIA (R) PROTEOBACTERIA (P) GAMMAPROTEOBACTERIA (C) ENTEROBACTERIALES (O) ENTEROBACTERIACEAE (F) ESCHERICHIA (G) E. COLI (E)

CELULA EUCARIOTICA

LOS SERES VIVOS • RESUMEN: LOS PARASITOS SON: – ORGANISMOS UNI O PLURICELULARES – CELULAS EUCARIOTICAS – PERTENECEN AL DOMINIO EUKARIA – REINO PROTISTA O ANIMALIA

CELULA EUCARIOTICA

LOS SERES VIVOS • TAXONOMIA EUKARIA (D) PROTISTA (R) SARCOMASTIGOPHORA (P) ZOOMASTIGOPHOREA (C) DIPLOMONADIDA (O) HEXAMITIDAE (F) GIARDIA (G) INTESTINALIS (E)

LOS SERES VIVOS • RESUMEN: LAS BACTERIAS SON: – ORGANISMOS UNICELULARES – CELULAS PROCARIOTICAS – PERTENECEN AL DOMINIO BACTERIA – REINO EUBACTERIA

LOS SERES VIVOS • RESUMEN: LOS HONGOS SON: – ORGANISMOS UNI O PLURICELULARES – CELULAS EUCARIOTICAS – PERTENECEN AL DOMINIO EUKARIA – REINO FUNGI

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LOS SERES VIVOS

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ANTONIE VAN LEEUWENKOEK

• TAXONOMIA EUKARIA (D) FUNGI (R) ASCOMYCOTA (P) HEMIASCOMYCETES (C) SACCHAROMYCETALES (O) SACCHAROMYCETACEAE (F) CANDIDA (G) ALBICANS (E)

LOS SERES VIVOS

BACTERIOLOGIA Estafilococo aureus

• SER HUMANO – ORGANISMOS PLURICELULARES – SON CELULAS EUCARIOTICAS – PERTENECEN AL DOMINIO EUKARYIA – REINO ANIMALIA

LOS SERES VIVOS

BACTERIOLOGIA Eschericha coli

• TAXONOMIA EUKARIA (D) ANIMALIA (R) CHORDATA (P) MAMMALIA (C) PRIMATES (O) HOMINIDAE (F) HOMO (G) SAPIENS (E) AAU (SE)

EL MUNDO MICROBIANO • MICROBIO – MICRO : – BIOS : • MICROBIOLOGIA – MICRO : – BIOS : – LOGOS :

PEQUEÑO VIDA PEQUEÑO VIDA CIENCIA

BACTERIOLOGIA Vibrio cholerae

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BACTERIOLOGIA Mycobacterium tuberculosis

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BACTERIOLOGIA • 1.- Glicocalix: está compuesta de polímeros 2.- Pared celular: separa a la bacteria del medio que la rodea. 3.- Periplasma: espacio entre la pared celular y membrana citoplasmática. 4.- Membrana citoplasmática: separa el citoplasma de la pared celular. 5.- Citoplasma: es una solución coloidal que contiene elementos nucleares, inclusiones citoplasmáticas (vacuolas, vesículas, etc.) y ribosomas. 6.- Flagelos: nacen en el citoplasma y son estructuras de locomoción. 7.- Fimbrias o pili: formaciones piliformes que nacen en el citoplasma.

BACTERIOLOGIA Treponema pallidum

BACTERIOLOGIA • BACTERIAS : Glicocalix – Compuesto por polisacáridos y en menor proporción por polipéptidos – Si está organizado en una estructura definida y está firmemente adherido a la pared celular se llama cápsula de lo contrario se llama capa mucilaginosa – Funciones: Protección, adherencia, material de reserva, factor de virulencia (opsonización y fagocitosis)

BACTERIOLOGIA

CAPSULA – GLICOCALIX - BIOPELICULA

• BACTERIAS: Características – – – – –

– – – – –

No poseen Membrana Nuclear Poseen un solo cromosoma circular No poseen organelas rodeadas por membranas Presentan Pared Celular de Peptidoglicano Membrana citoplasmática formada por bicapa de fosfolípidos y proteínas Sus membranas no contienen esteroles Reproducción por división binaria Los ribosomas son 70S formados por subunidades 30S y 50S Tamaño de 0.5 – 5 micras La mayoría son de vida libre

CELULA BACTERIANA

BACTERIOLOGIA

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BACTERIOLOGIA • BACTERIAS: Pared celular – No se encuentra en la célula humana – Componente principal: peptidoglicano • N-acetil murámico y N-acetil glucosamina • Pentapéptidos • Síntesis en el citoplasma

– Pared rígida que da forma a la bacteria – Falla en su estructura causa la lisis

BACTERIOLOGIA

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BACTERIOLOGIA • Bacterias Gram (-) – Presencia de membrana externa • Lipopolisacárido – Porción lipídica A – Porción polisacárido (Antígeno O) • Canales formado por porinas • Proteínas receptoras de nutrientes

– Capa delgada de peptidoglicano – Presencia del espacio periplásmico – Membrana citoplasmática

BACTERIAS GRAM (-)

• Bacterias Gram (+) – Pared celular • Capa gruesa de peptidoglicano • Presencia del polisacárido ácido teicoico • Presencia de proteínas de superficie

– Membrana citoplasmática

BACTERIAS GRAM (+)

ESTRUCTURA DEL LIPOPOLISACARIDO

BACTERIOLOGIA

BACTERIOLOGIA

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BACTERIOLOGIA • • • • •

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BACTERIOLOGIA Membrana citoplasmática

Treponema palidum Mycobacterias Clamidias Ricketsias Mycoplasma pneumoniae

BACTERIOLOGIA Mycoplasma

BACTERIOLOGIA • BACTERIAS: Membrana citoplasmática – Es una bicapa fosfolípidos 20-30% – Contiene diversas proteínas 50-70% – Funciones: • • • • • •

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Barrera osmótica Transporte Transducción de energía Biosíntesis Centro de replicación del DNA Punto de anclaje para los flagelos

BACTERIOLOGIA

BACTERIOLOGIA Membrana citoplasmática

BACTERIOLOGIA • BACTERIAS: Citoplasma – Fluido que contiene sustancias disueltas y partículas en suspensión como los ribosomas – El 80% del citoplasma es agua y el resto esta dado por ácidos nucleicos, carbohidratos, proteínas, lípidos, iones orgánicos, compuestos de bajo peso molecular y partículas. – Los ribosomas se encuentran libres en el citoplasma o adheridos a la membrana citoplasmática – Gránulos: sirven como material de reserva. Ejm volutina que es reserva de alta energía en la forma de metafosfato polimerizado

BACTERIOLOGIA • BACTERIAS: Citoplasma – Nucleoide: Es el área del citoplasma en la cual se encuentra localizado el DNA. El DNA de las células procarióticas en una molécula simple circular y contiene alrededor de 2000 genes – Plásmidos: Son extracromosomales. Son moléculas DNA circulares de doble cadena que son capaces de replicar independiente del cromosoma bacteriano. – Transposomas: Son piezas de DNA. Tienen genes que pueden codificar enzimas que inducen resistencia a ATB, toxinas o enzimas metabólicas que pueden causar mutaciones.

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BACTERIOLOGIA • BACTERIAS: Flagelos – Flagelos: Filamentos helicoidales que se extienden desde el citoplasma a través de la pared celular. Son los responsables de los movimientos de las bacterias en los líquidos. Tienen tres partes cuerpo basal, gancho y filamento. El filamento está compuesto de una proteína llamada flagelina. Los flagelos funcionan como un “sacacorcho”

BACTERIOLOGIA Flagelos

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BACTERIOLOGIA • BACTERIAS: Fimbrias – Formaciones piliformes no helicoidales, no tiene relación con el movimiento – Suelen ser mas cortos, mas delgados y mas numerosos que los flagelos – Nacen de la citoplasma sin embargo no se conocen que posean estructuras de anclaje a la célula – Están formados por subunidades de una proteína llamada pilina – Tienen por función la adherencia y tiene que ver en la reproducción sexual de las bacterias

BACTERIOLOGIA REPRODUCCION DE LAS BACTERIAS

• ASEXUAL : – DIVISION BINARIA

• PARASEXUAL: – CONJUGACION – TRANSDUCCION – TRANSFORMAION

BACTERIOLOGIA Flagelos

BACTERIOLOGIA REPRODUCCION DE LAS BACTERIAS

• ASEXUAL : BIPARTICION

BACTERIOLOGIA BACTERIOLOGIA Flagelos

REPRODUCCION DE LAS BACTERIAS

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BACTERIOLOGIA División N. gonorrhoeae

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BACTERIOLOGIA TRANSFERENCIA DNA - BACTERIAS

BACTERIOLOGIA TRANSFERENCIA DNA - BACTERIAS

BACTERIOLOGIA • REPRODUCCION PARASEXUAL – CONJUGACION – TRANSDUCCION – TRANSFORMACION

BACTERIOLOGIA TRANSFERENCIA DNA ENTRE LAS BACTERIAS CONJUGACION

TRANSFORMACION

BACTERIOLOGIA • Crecimiento y muerte de las bacterias – Las bacterias reproducen por división binaria – Las bacterias tienen un crecimiento exponencial • Nº de células 1 • Exponencial 20

2 4 8 16 21 22 23 24

– El tiempo de duplicación de una bacteria varía de especie a especie y depende además de la cantidad de nutrientes, la temperatura, el pH y otros factores ambientales

BACTERIOLOGIA TRANSFERENCIA DNA - BACTERIAS TRANSDUCCION

BACTERIOLOGIA • Ciclo de crecimiento de las bacterias – Fase de Retardo: El microbio se adapta al nuevo medio. Hay gran actividad metabólica pero no hay división celular – Fase logarítmica: Crecimiento exponencial. Los ATB B-lactámicos actúan durante esta fase – Fase estacionaria: Los nutrientes esenciales empiezan a desaparecer y productos tóxicos causan un crecimiento lento hasta que el Nº de células nuevas = Nº de células muertas – Fase de muerte: Fase marcada por una declinación en el Nº de bacterias viables

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BACTERIOLOGIA

BACTERIOLOGIA • DIAGNOSTICO BACTERIOLOGICO – Métodos directos • • • • •

Observación directa (Microscopia) Identificación por pruebas bioquímicas Aislamiento en medios especiales (Cultivos) Determinación de antígenos (Técnicas inmunológicas) Determinación de ácidos nucleicos (Técnicas moleculares)

– Métodos indirectos • Detección de anticuerpos (Técnicas inmunológicas)

BACTERIOLOGIA

BACTERIOLOGIA

• Tipo de metabolismo bacteriano – Respiración: Combustión de un sustrato con la liberación de electrones e hidrógeno que son transferidos a un aceptor final mediante una reacción redox. Si el aceptor final es el oxígeno hablamos de respiración aerobia y si es otro compuesto (inorgánico como nitratos, sulfatos ó CO2) distinto hablamos de respiración anaerobia – Fermentación: Oxidación incompleta de un compuesto orgánico (azúcar) en ausencia de oxígeno dando lugar a formación de ácido pirúvico y luego usualmente a ácido láctico.

• DIAGNOSTICO BACTERIOLOGICO – Métodos directos • Observación directa (Microscopia)

BACTERIOLOGIA • Relaciones de las bacterias con el oxígeno: – Aerobios (estrictos): Dependen del O2 para sobrevivir. Poseen un sistema transportador de electrones cuyo aceptor final es el oxígeno. Ejm: Micobacterias, pseudomonas – Anaerobios (estrictos): Solo crecen en ausencia de oxígeno. Utilizan una atmósfera de CO2, H2 y N2.Ejm: clostridium, propionibacterium – Anaerobios facultativos: No precisan de O2 para crecer pero lo hacen mejor en su presencia. Pasan de metabolismo respiratorio a fermentativo o viceversa. Ejm. Enterobacterias

COLORACION DE GRAM Pasos

Método

Gram(+)

Gram(-)

Colorante básico

Violeta de genciana

Se tiñe de violeta

Se tiñe de violeta

Mordiente

Lugol

Decoloración

Contraste

Permanece violeta Alcohol 95% Permanece ó alcohol violeta acetona Fucsina o Permanece safranina violeta

Permanece violeta Se decolora

Se tiñe de rosa

COLORACION DE GRAM BACTERIOLOGIA • Relaciones de las bacterias con el oxígeno: – Anaerobios aerotolerantes: Pueden crecer en presencia o ausencia de O2 pero su metabolismo siempre es fermentativo – Microaerófilos: Crecen mejor en presencia de baja presión de O2 (Menor del 12%) . Ejm Campilobacter

Cristal violeta Lugol Alcohol acetona Safranina

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MORFOLOGIA COLORACION DE ZIEHL NEELSEN Pasos

Método

A. A. R.

No A. A. R.

Colorante básico

Fucsina

Se tiñe de rojo

Se tiñe de rojo

Mordiente

Calor

Permanece rojo

Permanece rojo

Decolaración Alcohol clorhídrico

Permanece rojo

Se decolora

Contraste

Permanece rojo

Se tiñe de azul

Azul de metileno

COLORACION ZIEHL NEELSEN

BACTERIOLOGIA • DIAGNOSTICO BACTERIOLOGICO – Métodos directos • Identificación por pruebas bioquímicas

• Técnicas bioquímicas: – Reacción de oxidasa: Demuestra presencia de enzima citocromo-oxidasa. Distingue enterobacterias (-) de Pseudomonas (+) – Reacción de catalasa: Es capaz de descomponer el H2O2. Distingue Estreptococos (-) de estafilococo y listeria (+) – Reacción de la coagulasa: Diferencia E. aureus del resto de estafilococos – Prueba del Indol: metaboliza el triptofano produciendo Indol. Diferencia los distintos tipos de Enterobacterias – Prueba de ureasa: Hidroliza la urea y produce amonio. Son ureolíticas: K. pneumoniae, Proteus spp. y Mycobacterias

BACTERIOLOGIA

BACTERIOLOGIA

• DIAGNOSTICO BACTERIOLOGICO – Métodos directos • Aislamiento en medios especiales (Cultivos)

• BACTERIAS: Morfología – Cocos – Bacilos – Helicoidales • Vibrio • Espirilo • Espiroqueta

– Pleomórficas

• Cultivos: – Medios de cultivo • Selectivos: Selecciona a determinados gérmenes mediante factores físicos o químicos. Ejm. Loeffler (c. diptheriae), Thayer Martin (N. gonorrae), Mc Conckey (bacterias gram -) • Diferencial: permite crecer distintos gérmenes y diferenciarlos. Ejm. Agar manitol (Estafilococos), Mc Conckey (enterobacterias). Agar SS (salmonela, shiguela)

MORFOLOGIA

BACTERIOLOGIA • Cultivos: – Medios de cultivo • De enriquecimiento: Favorecen crecimiento bacteriano. Usualmente son medios líquidos. Ejm:BHI (infusión de cerebrocorazón), Caldo selenito (enterobacterias), Castañeda (brucela) • No selectivos: Agar común, agar sangre y agar chocolate. Crecimiento de bacterias en general. Agar Saboraud (hongos)

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BACTERIOLOGIA • Saben alguna respuesta? – Cual es el mejor momento para tomar un hemocultivo? – Cuantos hemocultivos se recomienda tomar en 24 horas? – Cuanto tiempo puede permanecer una muestra de orina al medio ambiente antes de ser analizada? Se puede refrigerar la orina? – Para tomar una muestra de esputo deberían lavarse los dientes y hacerse un enjuague bucal antes de tomar la muestra? – Cuanto tiempo puede permanecer una muestra de heces al medio ambiente antes de ser analizada? Se pueden refrigerar las heces? – Cuando se dice que una muestra de esputo es adecuada? – Cual es el mejor método para diagnóstico de infección por catéter venoso central? – Cada cuanto tiempo se debe cambiar una sonda vesical? – Cada cuanto tiempo se debe cambiar una sonda nasogástrica? – Cada cuanto tiempo se debe cambiar una vía periférica? – Cada cuanto tiempo se debe cambiar un catéter venoso central?

BACTERIOLOGIA

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Sistemas automatizados de cultivos Sistema automatizados de Hemocultivos

Sistema de detección de desarrollo bacteriano

Sistema automatizados de cultivo de Micobacterias

Sistemas de identificación y sensibilidad

• Cultivos: – – – – – – – – –

Cultivos de sangre Cultivo de catéteres venosos centrales Cultivos de orina Cultivos de secreciones respiratorias Cultivos de abscesos y heridas Cultivos del LCR Cultivo de heces Cultivos de secreción faríngea Cultivo de secreciones genitales

Alta exactitud y precisión Control de calidad certificado Sistemas computacionales en línea Disminución de la laboriosidad Disminución tiempos de respuesta Alto costo

BACTERIOLOGIA

BACTERIOLOGIA

• Cultivos de sangre: Hemocultivo – Definición: Cultivo microbiológico de la sangre. – Tipos: • Manuales: Contiene 0.025-0.05% poliatenol sulfato sodio. • Semiautomatizados: Lisis-centrifugación para hongos, micobacterias, bartonelas y brucelas, CVC. • Automatizados: Detectan CO2 del metabolismo bacterias. Bactec 9240, BacT/Alert Microbial detection system, ESP Culture System, BacT/Alert 3d

– Toma de muestra: • Cantidad: 2-3 muestras de sangre/24 horas. • Volumen: Variable. Relación 1:5 a 1:10. • Momento toma: 2.5-0.5 h antes pico febril, pico febril.

– Organismos aislados con mayor frecuencia: • E. aureus, P.aeruginosa, E. coli, K. pneumoniae y E. pneumoniae

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BACTERIOLOGIA • Cultivos de catéter central: – Métodos diagnósticos: • Conservadores (no requieren retiro del catéter) – Hemocultivo cuantitativo: Se debe extraer una muestra de sangre periférica inicialmente y otra a través del catéter (retrocultivo) con jeringas heparinizadas. Es positivo cuando el recuento del retrocultivo es > 100 UFC/ml o 5-10 veces mayor que el hemocultivo de sangre periférica. – Cultivo superficial – Cultivo semicuantitativo de la conexión – Citocentrifugacion con tincion posterior con anaranjado de acridina – Tiempo diferencial de los hemocultivos

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BACTERIOLOGIA

BACTERIOLOGIA • Cultivos de catéter central: – Definición: Cultivo microbiológico de la sangre. – Métodos diagnósticos: • No conservadores (requieren retiro del catéter) – Cultivos cualitativos: » Cultivo de 5 cm distales de la punta catéter. » S:100% y E: 103 UFC/ml. S:100% y E:92% para diagnostico de bacteriemia por CVC. » Método cuantitativo simplificado descrito por Brun-Buisson et al: Se considera positivo si existe un desarrollo microbiano > 1000 UFC/ml. S:97.5% y E:88% para diagnostico de bacteriemia por CVC. » Sonicación descrito por Scheretz et al: Se considera positivo si existe un desarrollo microbiano > 1000 UFC/segmento del catéter. S:93% y E:94% para diagnostico de bacteriemia por CVC.

– Resumen: Un meta-análisis realizado por Siegman-Igra et al demostró que los métodos cuantitativos son mejores que los semicuantitativos en el diagnostico de bacteriemia relacionado al CVC ya que presentan una S: 94% y E: 92% contra S: 85% y E: 85%

BACTERIOLOGIA • Cambio de catéter venoso central: – 1.- Evaluar el sito de punción diariamente ( en cada turno) a través de la palpación (inflamación), observación del sistema de fijación, debe permanecer limpio y seco. No cambiar el sistema de fijación si no hay signos evidentes de infección. Si hay sospecha de inflamación y/o infección cambiar el sistema de fijación y observar directamente el sitio de punción. – 2.- Retirar o cambiar el catéter si existen signos de flebitis (calor ,dolor, rubor o eritema y si se palpa la vena) infección o mal funcionamiento del catéter, – 3.- Si hay signos de sepsis o shock séptico en ausencia de otra fuente de infección (se retira y se realiza el cultivo semicuantitativo)

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BACTERIOLOGIA

BACTERIOLOGIA • Cultivos de orina: Urocultivo – Definición: Cultivo microbiológico de la orina. – Toma de muestra: • • • • • •

Preferencia orina de la mañana. Paciente debe abstenerse orinar 3 horas antes examen. Paciente no debe tomar mucho líquido antes examen. Tomar la parte media de la orina. Volumen: 25-50 ml. Bolsas colectoras niños: cambiar c/30 minutos bolsa colectora. • Portadores sonda vesical: muestra se toma en la unión sonda con el catéter de la bolsa colectora.

BACTERIOLOGIA • Cultivos de orina: Urocultivo – Medios de cultivo: • Agar nutritivo, Agar Cled (Agar con cisteína y lactosa deficientes en electrolitos), Agar sangre (cocos) y Agar Mac Conckey (enterobacterias)

– Procesamiento muestra: • Incubación 35-37 ºC por 24-48 horas. • Debería ser procesada máximo 2h post-obtención. Puede ser guardada refrigerados 4ºC no > 18 horas

– Organismos aislados con mayor frecuencia: • E. coli, Klebsiela, Proteus, Enterobacter, Enterococo y P. aeruginosa, C. albicans

– Organismos contaminantes mas frecuentes: • E. coagulasas negativos, Difteromorfos, Coliformes, Bacillus, Estreptococos alfa hemolíticos

• Cultivos de secreciones respiratorias: – Informe Coloración Ziehl-Neelsen: • No se encuentran BAAR en 100 campos observados • Se observan 1-9 BAAR en 100 campos observados • Se observan 10-99 BAAR en 100 campos observados • Se observan 1-10 BAAR x c en 50 campos observados • Se observan > 10 BAAR x c en 20 campos observados

Negativo N0 exacto de bacilos en 100 campos Positivo (+) Positivo (++) Positivo (+++)

BACTERIOLOGIA • Cultivos de heridas y abscesos: – Una gran variedad de gérmenes se encuentran en las heridas y abscesos – Los gérmenes más frecuentes en abscesos de cerebro, pulmón y abdomen son los anaerobios (B. fragilis) y cocos gram + (E. aureus y E. pyogenes) – Infecciones de herida operatoria son usualmente por E. aureus – Infecciones por heridas abiertas-traumáticas son por C. perfringes – Infecciones por mordedura de perro o gato son por P. multócida y mordedura humana son por anaerobios de la boca

BACTERIOLOGIA

BACTERIOLOGIA • Cultivos de LCR – Se realiza cuando se sospecha de meningitis – Los gérmenes que se aislan con mayor frecuencia son E. pneumoniae, H. influenza y N. meningitidis, criptococo – Se realiza coloración gram y Ziehl Neelsen y tinta china – La muestra se vierte a un plato de agar sangre o agar chocolate. Hematina y NAD se agregan para favorecer crecimiento de H. influenza – Tests inmunológicos se pueden realizar para detectar la presencia de antígenos capsulares (test aglutinación látex)

BACTERIOLOGIA

BACTERIOLOGIA

• Cultivos de secreciones respiratorias: – Definición: Cultivo de secreción proveniente de los bronquios y alveolos. – Esputo: • Moco: plasma, agua, electrolitos y mucina. • Otros componentes: detritus celulares, secreciones nasales, secreciones salivales y flora cavidad oral.

– Toma de muestra: • Inducción de la tos, lavado bronquial, cepillado bronquial, aspirado transtraqueal, toracocentesis , biopsia pulmón y aspirado gástrico. • Preferencia muestra de la mañana con paciente ayunas. • Buena muestra: > 25 L y < 10 CE x campo (aumento X 100). • Se puede guardar nevera por 24 horas. (> tiempo agregar 20cc de alcohol 50% y conservar a medio ambiente)

– Medios de cultivo: • La muestra se vierte en agar sangre, Lowestein-Jansen, Agar Saboraud ó medios para anaerobios

• Cultivos de heces: – Son realizados principalmente en casos de enterocolitis – Examen directo de heces: coloración de azul de metileno y coloración gram (estafilococo, clostridium o campilobacter) – Medios especiales como Mack Conkey ó agar azul de metileno-eosina para crecimiento de salmonella, shiguella – El Campilobacter es cultivado en medios que contienen antibióticos como el agar Skirrow en una atmósfera que contiene 5% de O2 y 10% de CO2

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BACTERIOLOGIA • Cultivos de faringe: – Son usados primariamente para detectar la presencia de E. beta hemolítico del grupo A (E. pyogenes) – También cuando se sospecha de difteria, faringitis gonocócica y cándida – El raspado debería incluir no sólo la faringe posterior sino también las amígdalas – El material es inoculado en plato de agar sangre – Si colonias de E. beta hemolítico son halladas después de las 24 horas se usa un disco de Bacitracina para determinar si es del grupo A

BACTERIOLOGIA • Cultivos de secreciones genitales: – Se realiza principalmente en pacientes con descarga genital o contactos asintomáticos de un paciente con ETS – El más importante patógeno es la N. gonorrae. Medio Thayer Martin – Examen directo con microscopio de campo oscuro son útiles para diagnóstico de T. pallidum – Clamidia trachomatis no crece en medios artificiales sino en células viva. Cultivo de células humanas o saco vitelino de huevos embrionados. El hallazgo de inclusiones intracitoplasmáticas en la coloración de Giemsa o la presencia de anticuerpos fluorescentes es diagnóstica.

BACTERIOLOGIA • Cambio de sonda vesical: – – – –

Plástico Látex Látex con capa silicona Silicona

c/7 días c/21 días c/30 días c/2-4 meses

• Cambio de sonda nasogástrica: – Polietileno – Poliuretano – Silicona

c/7-14 días c/2-3 meses c/3-6 meses

• Cambio de vía periférica: – Cambiar cada 72-96 horas (3-4 días) – En pacientes pediátricos, no cambiar el catéter venoso periférico hasta completar el tratamiento EV a menos que ocurra una complicación( flebitis, filtración).

BACTERIOLOGIA • DIAGNOSTICO BACTERIOLOGICO – Métodos directos • Determinación de antígenos (IF, EIA, Test aglutinación, inmunocromatografía)

• Técnicas inmunológicas: – Cuando el organismo no puede ser cultivado Ejm. Sífilis, virus hepatitis – Cuando el organismo es peligroso de cultivar. Ejm ricketsias – Cuando las técnicas de cultivo no están disponibles. Ejm. VIH, EBV – Cuando el crecimiento del organismo toma mucho tiempo. Ejm. Mycoplasma

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BACTERIOLOGIA • Técnicas inmunológicas: – Técnicas que usan anticuerpos para identificar el microorganismo (Método directo) – Técnicas que usan antígenos conocidos para detectar anticuerpos en el suero del paciente (Método indirecto)

BACTERIOLOGIA • Técnicas inmunológicas: – Técnicas que usan Ac conocidos • Reacción de hinchazón de la cápsula (Reacción Quellung): E.pneumoniae, H. influenza grupo B, N. meningitidis grupo A y C • Test de aglutinación látex: Para determinar el antígeno capsular de H. influenza, N. meningitidis, estreptococos grupo B, • EIA: Para determinar antígeno del E. grupo A, L. pneumophila serotipo 1, E. pneumoniae, C. trachomatis, toxinas bacterianas (C. difficile, E. coli.

BACTERIOLOGIA • Técnicas inmunológicas: – Técnicas que usan Ac conocidos • Inmunocromatografía: Para demostrar antígeno en orina para Legionela serotipo 1 y E. pneumoniae • ELISA: detectar una amplia variedad de bacterias, virus y hongos • Test de Ac fluorescentes: detectar una amplia variedad de bacterias, virus y hongos

• DIAGNOSTICO BACTERIOLOGICO – Métodos directos • Determinación de ácidos nucleicos (Técnicas moleculares)

• Técnicas moleculares: – Sondas genéticas • Son fragmentos de ADN o ARN que tienen estructura complementaria entre sí para formar secuencia de doble cadena. • Se uso inicialmente para identificacion gonococo, C. trachomatiss y luego fue usado para la identificación de hongos y mycobacterias – Reacción en cadena de la polimerasa (Técnica de PCR) • Consiste en amplificar in vitro una secuencia previamente conocida de ADN o ARN de un organismo hasta hacerlo fácilmente detectable. Muy sensible. Se usa para diagnóstico de la casi mayoría de microorgansimos.

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BACTERIOLOGIA • DIAGNOSTICO BACTERIOLOGICO – Métodos indirectos

BACTERIOLOGIA

• Detección de anticuerpos (IF, EIA, WB, etc)

• Técnicas inmunológicas: – Técnicas que usan Ag conocidos: • Tests de aglutinación en tubo o en lámina: – Suspensiones de bacterias standard. La mas alta dilución capaz de aglutinar a la bacteria es el título

• Tests serológicos para sífilis – Test no treponémicos: cardiolipina-lecitina colesterol – Test treponémicos: T. pallidum

• Eflujo activo del ATB – Bomba presente en el citoplasma de la célula bacteriana que elimina ATB del intracelular – Se encuentra presente tanto en bacterias Gram (+) como Gram (-) – Ejm. Resistencia a tetraciclinas, macrólidos, quinolonas y estreptograminas

• Test de aglutininas frias: – Glóbulos rojos se aglutinan en el frío. Infecciones Mycoplasma

BACTERIOLOGIA – Mecanismos de resistencia bacteriana • Evitar el ingreso del ATB • Inactivación enzimática del ATB • Eflujo activo del ATB • Modificación o protección del sitio blanco del ATB • Falla en la activación del ATB

BACTERIOLOGIA • Modificación o protección del sitio blanco del ATB – Modificación de las PBPs • Ejm. Resistencia a penicilinas

– Modificación de D-Ala-D-Ala por D-Ala-D lactato • Ejm. Resistencia a glicopéptidos

– Protección de ribosomas • Ejm. Resistencia a tetraciclinas

– Metilación del rRNA • Ejm. Resistencia a macrólidos, estreptograminas y lincosaminas

– Mutación que alteran la afinidad de la subunidad B de la DNA girasa por el ATB • Ejm. Resistencia a quinolonas

BACTERIOLOGIA • Evitar el ingreso del ATB – Porinas de la membrana externa • Constituyen una barrera al ingreso de ATB • No son selectivas por lo cual puede inducir resistencia a más de un tipo de ATB • Ejm. Resistencia a glicopéptidos – Disminución de la captación ATB en la membrana citoplasmática • Algunos ATB requieren un transportador presente en la membrana citoplasmática • Ejm. Resistencia a aminoglucósidos

BACTERIOLOGIA • Inactivación enzimática del ATB – Enzimas que rompen la estructura del ATB • Producción de B-lactamasas, esterasas • Ejm. Resistencia a ATB B-lactámicos, macrólidos

– Enzimas que permiten agregar grupos químicos al ATB y lo inactivan • Enzimas que permiten agregar grupos fosforil, adenil y acetil. Ejm. Resistencia a aminoglucósidos, cloranfenicol

BACTERIOLOGIA • Falla en la activación del ATB – Mutación en el gen que da lugar a la elaboración de flavodoxina • Ejm. Resistencia a metronidazol

BACTERIOLOGIA • Bacterias: Dominio: Bacteria, Reino: Eubacteria,Phylum = 27 – “Acidobacteria” – “Actinobacteria” – “Aquificae” – “Bacteroidetes” – “Chlamydiae” – “Chlorobi” – “Chloroflexi” – “Chrysiogenetes” – “Cyanobacteria” – “Deferribacteres” – “Deinococcus-Thermus” – “Dictyioglomi” – “Fibrobacteres” – “Firmicutes” – “Fusobacteria” – “Gemmatimonadetes” – “Lentisphaerae” – “Nitrospira” – “Planctomycetes” – “Proteobacteria” – “Spirochaetes” – “Synergistetes” – “Tenericutes” – “Thermodesulfobacterias” – “Thermomicrobia” – “Thermotogae” – “Verrrucomicrobia” – “Bacterias no clasificadas”

BACTERIOLOGÍA 1

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BACTERIOLOGIA • Clasificación Bacterias – Coloración gram: • • • •

Cocos gram (+) Cocos gram (-) Bacilos gram (+) Bacilos gram (-)

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ESTAFILOCOCOS • Propiedades importantes: – Son cocos gram (+), producen catalasa. – E. aureus forma colonias amarillas y produce Bhemólisis en agar sangre. > 90% de E. aureus contienen plásmidos que codifican B-lactamasas – Se encuentran primariamente en la flora humana normal. Coloniza vestíbulo nasal, piel dañada, axilas, región inguinal, recto y perineo. – E. aureus coloniza la vagina. Niñas postmenarquia 5-15%. Alcanza 30% durante la menstruación. – E. aureus coloniza un 60% de los adultos en forma intermitente y 20-30% tienen colonización persistente (diabéticos, UDE, HIV, pacientes diálisis) y 30% no son portadores.

ESTAFILOCOCOS

COCOS GRAM POSITIVOS • ESTAFILOCOCOS • ESTREPTOCOCOS

• Propiedades importantes: – E. aureus tiene algunos componentes importantes pared celular: • Proteína A: Es un factor de virulencia. Se une a la porción Fc de la inmunoglobulina. Previene la activación del complemento. Propiedades antifagocitarias • Acido teicoico (polimeros fosfato poliribitol): Media la adherencia a la célula • Muchos E. aureus tienen una microcápsula que tiene función antifagocítica. • El peptidoglicano tiene propiedades parecida a endotoxina que puede estimular la secreción de citoquinas por macrófagos, activación del complemento y la cascada de coagulación. • Resistencia meticilina por la presencia gen mecA codifica unión penicilina a proteína 2a.

ESTAFILOCOCOS

ESTAFILOCOCOS • Estafilococos coagulasa positivos – E. aureus

• Estafilococos coagulasa negativos – – – – – – – –

E. epidermidis E. saprophyticus E. hominis E. haemolyticus E. warneri E. lugdunensis E. capitis E. cohnii

- E. saccharolyticus - E. xylosus - E. auricularis - E. simulans - E. schleiferi - E. caprae - E. pasteuri

ESTAFILOCOCOS ESTAFILOCOCOS ESPECIE E. Aureus

COAGULASA +

HEMOLISIS

CARACTERISTICAS

Beta

Flora nasal Flora cutánea Colonias amarillas

E. epidermidis

-

Ninguna

Flora cutánea Colonias blanca

E. saprofíticus

-

Ninguna

Resistente Novobiocina

• E. aureus produce: • Enzimas: – Catalasa, coagulasa, fibrinolisina, hialuronidasa, termonucleasas, estafiloquinasas, bacteriocinas, penicilinasas y ADNasas.

• Toxinas: – Citotoxinas: Hemolisinas alfa, beta, gamma, delta – Enterotoxina: Hay 6 tipos inmunológicas A-F – TSST-1: es un superantígeno que ocasiona la liberación de IL-1, IL-2 y FNT – Exfoliatina: toxina epidermolítica que actúa como una proteasa que desdobla los desmosomas y separa la epidermis de la capa de células granulares – PVL (Panton Valentine Leucocidin): Toxina que produce necrosis de piel, partes blandas y pulmón (neumonía hemorrágica severa).

BACTERIOLOGÍA 1

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ESTAFILOCOCOS • Estafilococo aureus

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FORUNCULO

– Invasión tisular • Piel y mucosas – Foliculitis, abscesos, forunculosis, tromboflebitis, infección de herida operatoria, antrax ó carbunco, botriomicosis.

• Partes blandas – Celulitis, mastitis y absceso mamario, hidradenitis supurativa, bursitis séptica, artritis séptica, piomiositis tropical.

• Huesos – Osteomielitis.

• Neumonía (CAMRSA, HAP, VAP, HCPA) y empiema • Endocarditis • Meningitis post-operatoria, meningitis o cerebritis asociado a bacteremia/endocarditis • Absceso epidural o paraespinal • Infecciones asociadas a catéteres y prótesis

ESTAFILOCOCOS

IMPETIGO BULOSO

• Estafilococo aureus – Producción toxinas • Intoxicación alimentaria (enterotoxinas) • Síndrome de piel escaldada (Enfermedad de Ritter) (Toxina Exfoliatina A o B dirigida estrato granuloso) – Forma localizada (Impétigo Buloso) – Forma generalizada

• Síndrome de shock tóxico (Toxina 1 o exotoxinas B y C)

ESTAFILOCOCOS INFECCIONES

CARBUNCO

FOLICULITIS

Absceso

BOTRIOMICOSIS

BACTERIOLOGÍA 1

ABSCESO MAMARIO

PIOMIOSITIS TROPICAL

OSTEOMIELITIS

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EMPIEMA

TAC ABSCESO PULMONAR

ENDOCARDITIS

NEUMONIA

ESTAFILOCOCOS INTOXICACIONES

BACTERIOLOGÍA 1

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SINDROME DE PIEL ESCALDADA

ESTAFILOCOCOS • Estafilococo epidermidis – – – –

Infecciones de catéteres endovenosos Infecciones de implantes protésicos Peritonitis en pacientes con peritoneo-diálisis Infecciones asociadas a válvulas de derivación ventrículo-peritoneales – Osteomielitis post-esternotomía – Causa de sepsis en neonatos – Endoftalmitis post-cirugía ocular

• Estafilococo saprofíticus – Infección urinaria en mujeres jóvenes sexualmente activas

SINDROME DE PIEL ESCALDADA

SINDROME SHOCK TOXICO

E. epidermidis

ESTAFILOCOCOS • Diagnóstico: – Coloración gram – Cultivos – Reacción Novobiocina: E. epidermidis es sensible y E. saprofíticus resistente – No son útiles tests serológicos ni test de piel

• Tratamiento: – Mupirocina, Penicilinas, Cefalosporinas, Macrólidos, Quinolonas, Rifampicina, Aminoglucósidos, Glicopéptidos, Oxazilidinonas, Estreptograminas, Daptomicina

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BACTERIOLOGÍA 1

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