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MELANIE SALAS MOREIRA *_* BACTERIOLOGÍA PRÁCTICA

INSTRUMENTOS MATERIAL DE VIDRIO Y APARATOS DE USO FRECUENTE EN BACTERIOLOGÍA ASA DE INOCULACIÓ N Posee un mango de KOLLE revestido de ebonita (caucho), que sirve como aislante del calor para proteger al manipulador. Termina en asa (bolita) y sirve para tomar la muestra que se usará en el medio de cultivo.

AGUJA DE INOCULACION Es un instrumento semejante al anterior, con la diferencia de que el alambre es recto. Se lo utiliza especialmente para cultivos de profundidades.

PIPETA GRADUADA Instrumento graduado que sirve para aspirar cantidades específicas de líquidos y transferirlo de un recipiente a otro. Tiene un filtro arriba que hace que el líquido pipeteado no contamine la boca, y que la boca no contamine el líquido pipeteado.

CAJA PETRI Es un recipiente redondo de vidrio o plástico donde se almacenan los medios de cultivo solidos sobre los cuales se van a efectuar siembras bacterianas. Mide 9 mm.

TUBOS DE ENSAYO Instrumento no graduado que almacenan los medios de cultivo semisólidos o líquidos al igual que agua destilada.

TUBOS DE DURHAM Tubos de gas de fermentación, es mas pequeño que el de ensayo. Sirven para comprobar si el cultivo es fermentador o no de gas. LAMINAS PORTA- OBJETO Estas láminas de vidrio son de borde romo y sirven para depositar en ellas el material o observarse al microscopio. LAMINILLAS CUBRE-OBJETO. Cubre la muestra para ser observadas en fresco, lo que permite una distribución uniforme del material y a la vez impide que se contamine el lente del microscopio. VASO DE PRECIPITACION Es un instrumento graduado de vidrio, metal o de un plástico en especial que sirve para preparar los medios de cultivo. Protege al elemento del calor.

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MELANIE SALAS MOREIRA *_* BACTERIOLOGÍA PRÁCTICA

MATRAZ De base plana, es cónico. Tiene un túbulo redondeado hacia arriba. Sirve para el transporte de la muestra.

FIOLA Base plana no cónica. Al igual que el matraz tiene un túbulo redondeado hacia arriba pero más alargado. Sirve para el transporte de muestras.

KITAZATO Base plana cónica con una protuberancia en su túbulo en la parte superior. Sirve como bomba al vacío.

BALON No posee una base plana. Tiene un túbulo en la parte superior y un cuerpo esférico. Sirve para el transporte de una sustancia.

PROBETA De vidrio, graduado, volumétrico y de base pentagonal. Sirve para medir una cantidad exacta de agua destilada necesaria para la preparación de los medios de cultivo.

FRASCO GOTEROS Sirve para el almacenamiento de colorantes que serán usados en los medios de tinción. En la tapa tiene un canal por donde sale el colorante.

MECHEROS DE GAS Utilizado para la esterilización de elementos que se vayan a usar. Tiene una llama mas firme y potente.

MECHEROS DE ALCOHOL Al igual que el de gas es usado para esterilizar elementos a usar pero este no posee una llama tan firme.

VASOS DE COPLIN De vidrio con base redonda. Sirve para almacenar sustancias como el Xilol el cual es utilizado para limpiar las placas que contienen aceite de inmersión.

ACEITE DE INMERSION Sirve para observar las bacterias en lente de 100x. Esta hecho de cedro.

HORNOS E INCUBADORAS Las incubadoras Sirven para obtener una temperatura de 37°c, temperatura adecuada para toda vida bacteriana. Los hornos brindan una temperatura de 100 a 140°c por lo cual se los llama Hornos Pasteur.

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AUTOCLAVE Esterilización de instrumentos que han sido contaminados. Se lo realiza a temperatura de 121°c por 15 minutos.

PERLAS DE VIDRIO Son redondas y sirven para la desfibrinación de la sangre.

TOMA, TRANSPORTE, ALMACENAMIENTO Y TRATAMIENTO DE LAS MUESTRAS GENERALIDADES   

Cualquier muestra debe estar libre de contaminantes. Los contaminantes crecen mejor que las bacterias patógenas. Los contaminantes opacan el crecimiento de las bacterias que se desea investigar e impiden crecimiento.

REGLAS GENERALES PARA EL TOMO ADECUADO DE MUESTRA    

Debe tomarse la muestra en el sitio anatómico apropiado y en lo posible antes de iniciar el tratamiento con antibióticos. Debe tenerse en cuenta la etapa de la enfermedad, pues de ella depende la localización de la bacteria en cierta área o espécimen. La muestra deber ser obtenida en cantidad suficiente. Los recipientes en donde se depositan las muestras deben ser química y biológicamente estériles.

TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS   

Las muestras por lo general deben ser analizadas en el laboratorio lo más pronto posible luego de haber sido obtenidas. (1 hora) Los recipientes deben ser protegidos contra roturas y fugas. El tiempo que dure el transporte es sumamente importante debido a que los patógenos que podrían estar en la muestra pueden tomarse no viables si este es problongado y también porque las bacterias no patógenas pueden ganar en crecimiento o las patógenas. (Medio de Stuart).

MANEJO DE DIVERSOS TIPOS DE MUESTRAS SANGRE  

La piel debe ser limpiada cuidadosamente con tintura de yodo al 3.5%, con una solución de etanol al 70%. Alcohol isopropilico al 70-95%. Uso de guantes, aplicación de un torniquete y localización de una vena fija para la palpación.

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MELANIE SALAS MOREIRA *_* BACTERIOLOGÍA PRÁCTICA        

Se deja secar bien el alcohol para no introducir nada de él a la aguja y por lo tanto en la muestra. Una vez desinfectada la piel no debe palparse la vena a puncionar. El volumen de la muestra varía acorde a la edad. Neonatos: 0.5 a 1ml- Jóvenes 10ml, - Adultos 20 ml La mitad de la muestra se coloca en un tubo para cultivo aeróbico y la otro mitad en un tubo para cultivo anaeróbico. Debemos recordar que ciertas sustancias coagulantes de la sangre tienen acción bactericida o bacteriostática cuando se utiliza sangre completa. Por lo tanto se recomienda utilizar 3 ml de una solución de citrato sódico al 2% a 1 mg de heparina por 10 ml de sangre. La sangre debe transportarse rápidamente al laboratorio y sembrarlo, debido a que la sangre completa se desintegra rápidamente y se torna muy eficaz como agente antibacteriano.

ORINA

  

Debe obtenerse la primera orina de la mañana por ser más concentradas. El primer chorro debe descartarse, y el chorro ¨intermedio¨ introducir directamente en un frasco esterilizado y herméticamente tapado. En la mujer lo ideal es que se obtengan muestras cateterizadas, y de no ser posible debe practicarse previamente a la toma de la muestra, un lavado de los genitales externos; y al momento de recolectar la orina ¨intermedia¨ deben separarse los labios mayores de la vulva.

TIPOS DE MUESTRA

Métodos no Invasores

Métodos Invasores

Punción Supra pública

Cateterización vesical

Orina de 2do chorro

Orina por recolectar

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MELANIE SALAS MOREIRA *_* BACTERIOLOGÍA PRÁCTICA

DETERMINACION

VOLUMEN

COMENTARIOS

BACTERIAS

0.5-1

Primera orina de la mañana

HONGOS

>20

Primera orina de la mañana

MYCOBACTERIAS

>20

Primera orina de la mañana tres días consecutivos

ANAEROBIOS

1

VIRUS

10-15

Aspirado supra público enviar en un sistema de trasporte para anaerobios. Primera orina de la mañana, enviar con hielo y transporte al laboratorio inmediatamente. Orina de 24 horas

PARÁSITOS

LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO



Depositar la muestra en un recipiente bien tapado y mantener el líquido caliente durante el transporte. Se puede usar el calor del cuerpo de una mano o colocando el tubo en un vaso de agua tibia. (evitar temperaturas inferiores a los 35°C)



Una vez obtenida la muestra debe centrifugarse a 1.500 rpm durante 10 minutos. Luego se siembra rápidamente si sedimento en un medio adecuado. °

MUESTRA DE HERIDAS EXPUESTAS

 



La muestra debe recolectarse con un hisopo estéril o con aspirado mediante aguja y jeringuilla desde el área mas húmeda. Las bacterias del centro absoluto pueden no ser viables, por lo que se prefiere obtener cultivos de la periferia, donde los microorganismos son más viables y activos, (pliegues interno y externo). Eliminar cuidadosamente el aire de la jeringuilla después de la recolección.

MUESTRA DE ÁREA GENITAL    

En los hombres puede obtenerse muestras de la uretra inflamada. En las mujeres existen diversas áreas que puedan ser afectadas. Todos los hisopados deben ser sembrados inmediatamente en agar chocolate o en medio de Thayer Martin. Cuando no es posible hacerlo inmediatamente se sumerge el hisopo en el medio de Stuart en donde incluso hasta el gonococo sobrevive 48 horas.

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ESPUTO  

  

 

El mejor momento para la recolección del esputo es por la mañana muy temprano. El paciente debe proporcionar la muestra para la cual debe traer directamente sobre un recipiente estéril, informándole que lo importante es el esputo propiamente dicho antes que la saliva. Cuando hay tos no productiva, el empleo de vapor nebulizando puede ayudar a obtener la muestra. Si el esputo es muy viscoso puede agregársele unos pocos milímetros de solución salina estéril, luego se agita ligeramente sin formas aerosoles. Esta ligera agitación será suficiente para desprender suficientes bacterias, bastando con efectuar la siembra de una gota de la suspensión con el asa de inoculación en el medio de cultivo respectivo. Pacientes ancianos: nebulización previa. Pacientes inconscientes: Broncoscopia

HECES FECALES





Se recomienda no recoger las heces desde la taza del retrete; lo mas aconsejable es que el paciente tome su propia muestra defecando directamente en un recipiente estéril de cartón encerado. Cuando no puede obtenerse excrementos, debe practicarse hisopados rectales, no anales, y el hispo se coloca luego en un tubo estéril topando con algodón y conteniendo medio de transporte.

MEDIOS

DE

CULTIVO

Un medio de cultivo es un conjunto de sustancias que brindan a la bacteria condiciones necesarias para su desarrollo y formación de colonias Colonias.- conjunto de bacterias que forman manchas o puntos visibles en un medio de cultivo y la cual constituye la descendencia de una sola bacteria, tienen características que van de acuerdo a: -

Consistencia: viscosa o mucoide Trasparencia: translucidos u opacos Capacidad de hacer o no pigmentos

Respecto de ésta última, las colonias pueden producir los mas variados colores, entre los que tenemos 1. 2. 3. 4.

Amarillo dorado (Estafilococos aureus); Amarillo verdoso (Micrococcusluteus); Rojo (Serratia marcescens); Blanco (Estafilococcus Epidermidis).

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MELANIE SALAS MOREIRA *_* BACTERIOLOGÍA PRÁCTICA

CONDICIONES QUE DEBE REUNIR UN MEDIO DE CULTIVO. 1. Tener un contenido nutritivo adecuado para que la bacteria se desarrolle. 2. PH alcalino ente 7 y 7,8. 3. Recolectado en recipientes adecuados y estériles. PRINCIPALES OBJETIVOS DE UN MEDIO DE CULTIVO. 1. Obtener cultivos puros, para estudiar las bacterias y mantenerlas vivas indefinidamente. 2. Observar el aspecto de las colonias a simple vista o con pequeño aumento, con fines diagnósticos. 3. Obtener cantidades apreciables de bacterias para fines industriales: como la elaboración de vacunas y antígenos para reacciones de aglutinación. 4. Facilitar el hallazgo de las bacterias en un producto patológico. 5. Estudiar la fisiología de las bacterias. 6. Estudiar la toxigénesis y las cualidades de las toxinas.

CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO Sencillo a) Medios naturales.- Son aquellos que no han sido creados artificialmente por el hombre: liquido ascítico, papa, leche, etc. b) Medios artificiales.- Son aquellos elaborados por el hombre agar sangre, agar chocolate. Consistencia: consistencia los medios de cultivos pueden clasificarse en: a) Solidos b) Semisólidos c) Líquidos.

-

Cuando no se tiene agar hay medios de cultivo líquidos como el agua de peptona. Con el agar al 1% se obtienen medios de cultivo semisólidos. Con el agar al 1,5% se obtienen medios de cultivo sólidos. El agar tiene un gel transparente similar a la gelatina. La incubación de las bacterias es a 35°c y el de la gelatina es 25°c, por eso no se la usa porque se hace liquida.

Otros. Básicos: Formados por extractos de carne, peptona, sal y agua. Brinda vitaminas a las bacterias, sal y pequeñas cantidades de oligoelementos. o o o

La sal más usada es el NaCl. Se usa agua destilada y no de la llave porque puede contener cobre impidiendo así el desarrollo de algunas bacterias. Ejemplo: Agar nutritivo profundo.

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Enriquecidos: Son los mismos medios de cultivos básicos a los cuales han sido agregados líquidos corporales y vitaminas. o

Ejemplo: Agar sangre

Selectivos: Mismos medios de cultivos básicos o enriquecidos que se le ha agregado sustancias que impiden el crecimiento de sales biliares. Puede favorecer al crecimiento de otras bacterias. o

Ejemplo: Agar McConckey que permite el crecimiento de bacterias Gram negativas e inhibe el crecimiento de las bacterias Gram positivas.

Diferencial: Se les ha agregado un indicador de Ph como el azul de bromotinol los cuales ejercen un cambio de color al medio de cultivo según su ph. o

Ejemplo: Agar citrato, Agar urea.

Enriquecimiento: Medios de cuktivo enriquecidos. Continen sustancias inhibidoras con el que se ve un medio favorable para determinadas bacterias. Especiales: M.C que no han sido catalogados como los anteriores por ejemplo Medio de ENJH para el crecimiento de leptospira.

EN TUBOS DE ENSAYO

Solidos   -

Agar nutritivo inclinado Agar nutritivo profundo Para bacterias no exigentes de su requerimiento nutritivo

 -

Medio de Lowenstein Jensen Es de color verde. Crecimiento de bacilo de Koch

 -

Agar TSI Aislamiento de bacterias y para saber si las bacterias son fermetadoras o no se glucosa y sacarosa, para observar si la bacteria es capaz de producir acido sulfúrico y gas de fermentación.

 -

Agar citrato Para bacterias cuya fuente de enrgia es el carbono.

 -

Agar urea Para bacterias que usan el nitrógeno como fuente de enrgia.

 -

Agar pie o huevo Se utiliza para el crecimiento de bacilo diftérico.

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MELANIE SALAS MOREIRA *_* BACTERIOLOGÍA PRÁCTICA Semisólidos  -

Agar motilidad Sirve para ver si la bacteria tiene o no movimiento.

Líquidos  -

Caldo nutritivo Para bacterias que no son exigentes de requerimiento nuritivo.

 -

Agua de peptona Sirve para demostrar si la bacteria es capaz de producir indol.

 -

Caldo de tetrationato Crecimiento de bacterias intestinales inhibiendo el crecimiento de aquellas que no son habitantes en el intestino.

En caja de Petri  -

Agar sangre Se lo utiliza para saber si la bacteria produce o no hemolisis

 -

Agar chocolate Crecimiento de gonococo y meningococo

 -

Agar SS (salmonella-shigella) Para cultivo de Salmonella y Shigella

 -

Agar McConckey Crecimiento de Gram – e impide el crecimiento de Gram +

 -

Agar Muller Hinton Para las pruebas de antibiograma. Susceptibilidad o resistencia de las bacterias ante antibióticos.

 -

Agar Bismuto sulfito Se usa para el crecimiento de Salmonella typhi y otros.

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MELANIE SALAS MOREIRA *_* BACTERIOLOGÍA PRÁCTICA

OBSERVACIÓN

EN

FRESCO

Y

TINCIÓN

SIMPLE

Pigmento bacteriano -

Profundidad: Pigmento pioceanico Superficie: Amarillo dorado- Estafilococos aureus Blanco- Estafilococos epidermidis Rojo- Serratia marcescens Amarillo limón- Micrococo lutius

El medio en fresco se realiza sin colorantes. Ventaja.- Permite ver a la bacteria en movimiento en el campo del microscopio. No se debe confundir el movimiento de las bacterias con los movimientos bromianos. No vemos deformaciones cuando el frotis de la bacteria se fija a la llama. Desventajas.- Se seca de manera rápida. No se puede ver estructuras especiales como por ejemple flagelos y esporas. Técnica Se realiza entre lámina y laminilla. Se coloca de 4 a 5 gotas de suspensión bacteriana en el centro del portaobjeto con lente de 10x y 40x. -

Bacilos suptilis.- poco motil Proteus.- se mueve más Estafilococo.- no tiene movimiento

Métodos de tinción Simple: un solo colorante -

Violeta de genciana: se cubre por un minuto, se lava con agua y se seca con papel filtro Azul de metileno: se cubre por un minuto, se lava con agua y se seca con papel filtro.

Compuesta: se usa más de un colorante a la vez.

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MELANIE SALAS MOREIRA *_* BACTERIOLOGÍA PRÁCTICA

TINCIONES

COMPUESTAS

Tinción compuesta de Preston Morrel para bacterias Gram positivas y Gram negativas. 1. Aplicar oxalato de amonio de cristal violeta por 30 segundos. 2. Aplicar yodo lugol el cual sirve para que se fije el oxalato de amonio, y dejar actuar por 30 segundos. 3. Lavar completamente con Iodo acetona y dejar actuar por 30 segundos. 4. Lavar con agua. 5. Aplicar carbol fucsina diluida durante 30segundos. 6. Lavar con agua. 7. Secar con papel filtro y observar con lente de 100x. Resultados:  

Gram positivos: Morado Gram negativos: Rosado

Tinción compuesta de Ziehl Neelsen para bacterias BAAR y NO BAAR. 1. Inundar el frotis con carbol fucsina fuerte y calentar hasta la emisión de vapores por 5 minutos. 2. Lavar con agua. 3. Decolorar con ácido hidroclórico al 3% hasta eliminar el exceso de carbol fucsina. 4. Lavar con agua. 5. Contrastar con azul de metileno durante un minuto. 6. Lavar con agua, secar con papel filtro y observar en lente de 100x. Resultados: 1. BAAR: Rojo 2. NO BAAR: Azul

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MELANIE SALAS MOREIRA *_* BACTERIOLOGÍA PRÁCTICA

P

L

A

C

A

S

ESTAFILOCOCO -

forma de racimo de uva. Mide de 0,5 a 1,5 um de diámetro. Se tiñe por el método de Preston Morrell Se diagnostica mediante la prueba de la coagulasa.

Prueba de la coagulasa.- principal prueba para el diagnóstico de los estafilococos aureus. TECNICAS DE LA PRUEBA DE LA COAGULASA Coagulasa en placa -

Consiste en colocar en una placa, una gota de suspensión + 0.5 ml de plasma de conejo, con movimientos circulares. Si es coagulasa positivo aparecen grumos blancos. Si los grumos aparecen antes de añadir el plasma quiere decir que estaba contaminado. Si no se forman grumos se hace la segunda prueba.

Coagulasa en tubo -

Al plasma de conejo se le añade un cultivo solido de 18-24 horas o 0.1 ml de un cultivo líquido. Se incuba en baño maría en 37°c y se examina cada 30 minutos durante 4 horas para ver la formación de coágulos. Si no se forman lo coágulos en 4 horas se lo realiza en 6 horas. Si en 24 horas no aparece el coagulo es Coagulasa negativa.

BACILOS SUPTILIS -

Es Gram + Se tiñe de morado por el método de Preston Morrell

MICROCOCCUS LUTEUS -

Gram + Diplococo en parejas o tétradas Se puede ver un haz de luz de 1 a 2 micras Es viscoso negativo Se lo puede relacionar como contaminante de cultivo y produce endocarditis Se tiñe de morado por Preston Morrell

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MELANIE SALAS MOREIRA *_* BACTERIOLOGÍA PRÁCTICA GONOCOCO -

Gram – Se tiñe d rosado por Preston Morrell Se lo ve individual o en pares Mide de 0,6 a 1 micra de diámetro Ejemplo: Neisseria Gonorrhoeae

STREPTOCOCO -

Gram + Se tiñe de morado por Preston Morrell Mide de 0.6 a 1 micra de diámetro Forma de cadena

VIBRIO -

Es un bacilo (Cólera) Gram – Se tiñe de rosado palido por Preston Morrell Mide de 1,5 a 3 micras de longitud Es un bastoncillo curvo con forma de coma

ENTEROCOCO -

Es un coco Gram + Mide de 0,5 a 1 micra de diámetro Se lo encuentra en forma de diplococo Se tiñe de morado por Preston Morrell Ejemplo: Shigella

TINCION DE PARED CELULAR (BASILOS SUPTILIS) -

-

1) Se prepara un frotis relativamente concentrado 2) No se fija a la llama 3) Antes de que la suspensión bacteriana se seque, se lo cubre con Ácido Fosfomolibdico (hidroliza el citoplasma sin afectar la pared) y se deja reaccionar por 4 minutos. 4) Inclinar la placa para deja drenar el acido 5) Agregar verde de metilo sobre el frotis húmedo durante 5 minutos. 6) Lavar con agua evitando desprende mucho colorante y se lo seca al aire sin papel filtro. COLORANTE USADO: VERDE DE METILO

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MELANIE SALAS MOREIRA *_* BACTERIOLOGÍA PRÁCTICA

TINCION DE CAPSULA POR EL MÉTODO DE TINTA CHINA -

1) 2) 3) 4) 5) 6)

Se hace un frotis delgado del material Se lo seca al aire y se lo fija suavemente en la llama Colocar una gota de tinta china y extenderla con la laminilla cubre objeto Se lo deja secar al aire Teñir con Safranina durante un minuto se lava con agua, se seca y se observa con aceite de inmersión.

COLARANTE USADO: SAFRANINA

  

RESULTADOS: Espacios incoloros: Capsula Cuerpo bacteriano: Rojo Fondo negro

BACILOS GRAM – -

Bacilos que se tiñen de rosado por Preston Morrell Ejemplos: Proteus, Klebsiella, Rickettsia

TINCION DE ESPORAS POR EL MÉTODO DE WIRTZ CONKLIN -

Frotis delgado, fijar a la llama Cubrir con suspensión acuosa de verde de malaquita al 5% Se calienta durante 5 minutos Se lava con agua y se tiñe con safranina durante un minuto Se lava, se seca y se observa el frotis con aceite de inmersión COLORANTES USADOS: SAFRANINA Y VERDE DE MALAQUITA AL 5%

 

RESULTADOS: Esporas: verdes Cuerpo bacteriano: rosado

TINCION DE ESPORAS POR EL MÉTODO DE ZIEHL NEELSEN COLORANTES USADOS: CARBOL FUCSINA FUERTE Y AZUL DE METILENO

 

RESULTADOS: Esporas: rojas Cuerpo bacteriano: azul

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MELANIE SALAS MOREIRA *_* BACTERIOLOGÍA PRÁCTICA

BACILO DE KOCH POR ZIEHL NEELSEN -

Es una bacteria alcohol acido resistente (BAAR) Se lo observa de color rojo COLORANTES USADOS: CARBOL FUCSINA FUERTE Y AZUL DE METILENO

TINCION DE ESPORAS POR EL MÉTODO DE FLEMING MODIFICADO -

Se coloca carbol fucsina fuerte y se calienta por 5 minutos Se lava con agua Se decolora con ácido hidroclórico Se lava nuevamente Se extiende una gota de tinta china con el cubre objetos y se deja secar COLORANTES USADOS: CARBOL FUCSINA FUERTE

  

RESULTADOS: Esporas: rojas Cuerpo bacteriano: incoloro Fondo negro

LEPTOSPIRA POR EL MÉTODO DE ROJO CONGO -

Fondo azul Tiene un centro brillante en espiral Se ve en forma de ondas y grietas

BACILO DIFTÉRICO POR MÉTODO DE PRESTON MORRELL COLORANTES USADOS: OXALATO DE AMONIO DE CRISTAL DE VIOLETA Y CARBOL FUCSINA DILUIDO. RESULTADO: Se lo observa como acúmulos

U R O C U L T I V O Diagnostico bacteriológico de las infecciones urinarias. -

La orina es aséptica aunque es un caldo nutritivo excelente para contaminarse con bacterias saprofitas de la próstata, prepucio y heces fecales en caso de niños. Para tomar una muestra de orina en bebes se debe sondear.

Bacteriuria: Presencia o multiplicación de bacterias en la orina.

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MELANIE SALAS MOREIRA *_* BACTERIOLOGÍA PRÁCTICA Contaminación: Bacterias que han penetrado accidentalmente a la orina generalmente al momento de recolectar la muestra. Contagio bacteriano: Es la determinación de la cantidad de bacterias que existen por centímetro cubico de orina.   

Por encima de 100.000 bacterias por cc de orina, demuestra una infección. Debajo de 10.000 es orina normal. Entre 10.000 y 100.000 es contaminación.

Forma de recolección: El paciente no debe tomar antimicrobianos 24 horas antes de la toma de muestra. Hay que recolectar la primera orina de la mañana y de esa dividir el primer chorro en tres. De esa división se toma el chorro de en medio. En un frasco estéril y herméticamente cerrado. Si no se toma inmediatamente la muestra hay que refrigerar. METODO -

Se coloca 5 tubos de ensayo y se hace dilución. 1/10 1/100 1/1.000 1/10.000 1/100.000

-

1/10: primer tubo con la muestra de orina y 9cc de solución salina. 1/100: segundo tubo con 1cc del primer tubo y 9cc de solución salina. 1/1.000: tercer tubo con 1cc del segundo tubo y 9cc de solución salina. 1/10.000: cuarto tubo con 1cc del tercer tubo y 9cc de solución salina. 1/100.000: quinto tubo con 1cc del cuarto tubo y 9 cc de solución salina.

Se toma 5 cajas de Petri y se coloca 1cc de cada tubo. Se usa tripticasa fundida, esta se deja enfriar hasta 45°c y se coloca de 10-15 cm3 en cada caja y se deja enfriar de 15-20 minutos. Si no hay tripticasa fundida se puede usar Muller Hinton tibio. Una vez entibiado coge una consistencia dura. Se lo deja a una temperatura de 34°c entre 24 a 48 horas para que crezca la bacteria. Una vez pasada las 48 horas se procede a la lectura de acuerdo a la cantidad de colonias que encontremos.   

Se recomienda contar las colonias en 1/1000 y 1/10.000 Si se encuentran 50 colonias en 1/1000 se le aumentan los ceros, es decir tendríamos 50.000 bacterias por cm3. Si se llega a 1/100.000 y las bacterias siguen concentradas y no se pueden ver se denomina INCONTABLE NUMERO DE BACTERIAS POR CM3

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MELANIE SALAS MOREIRA *_* BACTERIOLOGÍA PRÁCTICA BACTERIAS EN INFECCION -

E. Coli Proteus Pseudomona aeruginosa Enterococo E. Aureus Estreptococo betahemolitico

BACTERIAS EN CONTAMINACION -

E. Epidermidis Difteroides Estreptococo alfahemolitico Levaduras

COPROCULTIVO Es la siembra apropiada de una muestra apropiada de heces en un medio de cultivo en donde crecen bacterias intestinales patógenas. Muestra apropiada:   

Cuando se encuentra en suficiente cantidad Cuando es tomada en la fase aguda de la enfermedad Antes de que se administren antibióticos

Para tomar muestras se usan porción de heces frescas o hisopado rectal el cual consiste en introducir el hisopo 4 o 5 cm en el recto. MEDIO DE CULTIVOS UTILIZADOS: Caldo de Tetrationato MEDIO DE ENRIQUECIMIENTO Se le añade 0,2 cc de solución de yodo yodurada. Esta sustancia se combina con el Tiosulfato de sodio que contiene el medio transformado a su vez en Tetrationato de sodio, que inhibe el crecimiento de la mayor parte de bacterias intestinales. Caldo de tetrationato: Salmonella Agar SS: Salmonella, Shigella -

LAS COLONIAS APARECEN INCOLORAS PORQUE NO FERMENTAN LACTOSA.

-

CUALQUIER OTRO TIPO DE BACTERIA QUE FERMENTE LACTOSA LA COLONIA APARECE ROJIZA.

Agar Bismuto sulfito: en este medio, las colonias de Salmonella Typhi aparecen negras rodeado de un halo metálico brillante. Otras aparecen de un tono verde oscuro o negro pero sin el halo metálico.

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MELANIE SALAS MOREIRA *_* BACTERIOLOGÍA PRÁCTICA

METODO DE SIEMBRA En el caldo de Tetrationato se siembra una porción de heces con el asa de inoculación, luego con otra porción de heces hacemos suspensión de solución salina y a partir de esta suspensión sembramos en agar bismuto sulfito y en SS por agotamiento, en el cual colocamos en el asa una gota de suspensión que contienen las heces. Se debe incubar en medio de cultivo: -

Bismuto sulfito: 48 horas a 37°c SS: 24 horas a 37°c

Si no existe crecimiento de bismuto sulfito y SS se recomienda efectuar otras siembras pero a partir del caldo de tetrationato el cual se incuba por 24 horas a 37°c. En caso de haber crecimiento se forman 3 colonias de las mas aisladas de cada uno de los medios de cultivo. Estas se las trasladan al agar TSI y se hace lo que se conoce como siembra mixta. Primero se clava en el fondo del agar TSI con la aguja de inoculación y luego sucesivamente se clava en la superficie inclinada. En la lectura del TSI se considera: superficie, profundidad, presencia o no de SH2 y gas de fermentación.    

Superficie: Acida (amarilla), Alcalina (roja o fucsia) Profundidad: Acida (amarilla), Alcalina (roja o fucsia) SH2: Se observa negro si es positivo Gas de fermentación: presencia de grietas si es positivo

Salmonella Typhi en SS: TRANSPARENTE E. Coli: FUCSIA EN MCCONCKEY

ANTIBIOGRAMA METODO DE KIRBY-BAUER MODIFICADO Procedimiento:  

Se utilizan enterobacterias o cualquier bacteria patógena de fácil crecimiento. Se procede a leer según las tres categorías: 1. Sensible: no hay crecimiento de colonias alrededor del antibiótico, es decir que no hay colonias dentro del halo debido a que el metabolismo de la bacteria no se ve afectado. 2. Intermedio: no habrá crecimiento por dentro pero si en el límite del halo del antibiótico. 3. Resistente: presencia de colonias en el halo del antibiótico.

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MELANIE SALAS MOREIRA *_* BACTERIOLOGÍA PRÁCTICA

REACCIONES

BIOQUIMICAS

Son reacciones que ayudan a identificar bacterias que no pueden ser identificadas por microscopio y que depende de ciertos patrones de características pertenecientes a cada tipo de bacteria. -

Si en el primero observamos lleno de líquido el tubito más chiquito jaja NO hay gas, si ese mismo esta vacío SI hay gas. Si se observa de color rojo o fucsia es POSITIVO Si es incoloro es NEGATIVO En el tubo INDOL se evalúa si es positivo o no, y si hay presencia de SH2. Si hay presencia de SH2, el papel que se encuentra en la parte superior se ve quemado. En el agar Citrato, cuando es azul es positivo y cuando es verde es negativo. En el agar Urea, cuando es fucsia o rasado es positivo y cuando es melón es negativo. En el agar rojo de metilo, cuando posee su tercio superior rojo es positivo y cuando solo es amarillo es negativo. En el agar Motilidad observamos presencia de movimiento cuando es de color negro o simplemente hay una especie de torbellino en el centro.

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