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UNIVERSIDAD

SAN IGNACIO DE

LOYOLA FACULTAD DE INGENIERIA PRÁCTICA N° 4

ACTIVIDAD DE LA ENZIMA AMILASA DURANTE LA GERMINACIÓN INTEGRANTES:  CAMPIAN BASILIO, Marcela Soraida

1420842

 CAPCHA ORIHUELA, Kathia Milena  CASTILLO SULLCA, Katy Felicita

1420849 1420866

 HUAMANI AMARILLO, Fidela Sofia1421028  RODRIGUEZ TILIRIO, Helen Yajayra 1421185 CURSO: BIOQUÍMICA PROFESORA: CANCINO CHAVEZ, keidy

PERÚ-LIMA 2016-01

I.

INTRODUCCION:

Durante la formación de las semillas, se acumulan grandes cantidades de sustancias de reserva, los cuales servirán para el crecimiento y desarrollo de la plántula. El carbohidrato de reserva más importante es el almidón, constituye del 45 al 58% del peso seco y se localiza en el endospermo. Durante la germinación, el almidón se degrada por un conjunto de enzimas, entre las cuales está la α-amilasa. La concentración de esta enzima es muy baja en la semilla, pero a medida que germina, se incrementa, alcanzando un máximo a los 6 días. La semilla más germinada que duro más de 6 días pierde una gran cantidad de carbohidrato y aumenta un poco de enzimas, esto hace se reproduzca más rápido, pero el crecimiento de la semilla necesita agua luz solar entre otros. La semilla es la estructura resultante del desarrollo del óvulo tras la fecundación de las plantas espermatofitas. Cada semilla está formada por el embrión, el endospermo, tejido nutritivo y las membranas que protegen el embrión. Si las condiciones ambientales en las que se encuentra una semilla son favorables germina, es decir, inicia su desarrollo para convertirse en una nueva planta.

II. OBJETIVO

2

Determinar la variación en la actividad enzimática de la enzima α-amilasa, durante la germinación.

III. MATERIALES

Semillas germinadas: 1, 4 y 5 días • Su contenido de vitaminas, minerales, oligoelementos y enzimas pueden multiplicarse por varias centenas durante la germinación Mortero • Es un utensilio usado en laboratorio o en cocina para machacar distintas sustancias.

Espectrofotómetro • Es un instrumento usado en el análisis químico que sirve para medir, también es utilizado en los laboratorios de química para la cuantificaciónde sustancias y microorganismos

Centrífuga

• Es una máquina que pone en rotación una muestra, también se utiliza para determinar el hematocrito mediante una toma de muestra capilar Beakers de 50 ml • Es un recipiente cilíndrico de vidrio borosilicatado fino que se utiliza muy comúnmente en el laboratorio, sobre todo, para preparar o calentar sustancias y traspasar líquidos

Fiola 25 ml • Se emplean en operaciones de analisis quimico cuantitativo ,para preparar soluciones de concentraciones definidas.

3

Tubos de centrífuga • Es util para análisis volumétrico de separable (líquido inmiscible o sólido-líquido) y muestras.

Pipetas de 1 ml y 10 ml • Es un instrumento volumétrico de laboratorio que permite medir la alícuota de un líquido con bastante precisión

Solución de almidón • Es una macromolécula compuesta de dos polisacáridos, la amilosa y la amilopectina, Es el glúcido de reserva de la mayoría de los vegetale. Esto se puede encontrar en los carbohidratos.

Solución de lugol • es una disolución de yodo molecular, esto se utiliza para reconocer si hay almidon en la muestra preparada.

IV. PROCEDIMIENTO:

1.

Tomar 5 semillas. Retirar el coleoptilo y dejar el endospermo .

4

Triturar con cuidado en un mortero las semillas con una 2.

3.

cantidad de tampón acetato.

Filtrar utilizando tocuyo. Enrazar en una fiola de 25 ml con tampón acetato.

4.

Colocar en tubos de centrífuga, parte del extracto y centrifugar a 3500 rpm por 5 minutos.

5

5.

6.

Decantar el sobrenadante y mantenerlo en tubo de ensayo.

En un tubo de ensayo, pipetear 1 ml de tampón y 1 ml de almidón. Agitar.

7.

8.

Agregar 1 ml del extracto enzimático y 10 ml de agua destilada, agitar y esperar 10 minutos.

Transcurrido el tiempo, agregar 1 ml de lugol. Agitar. Esperar 10 minutos y leer en el espectrofotómetro a 620 nm.

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9.

Preparar previamente un tubo blanco, que no contiene el extracto enzimático, para calibrar el equipo.

Preparar previamente un tubo blanco, que no contiene el

10.

extracto enzimático, para calibrar el equipo. V. RESULTADOS: Tiempo (días) Tubo1 (B) Tubo 2 (A)

1 2.57 2.58

2 2.56 2.63

4 2.55 2.56

6 2.61 2.63

Donde: A=Absorbancia del blanco B= Absorbancia de la muestra V= Volumen de aforo N= N° semillas V=25 ml N= 5 1.-Calcular la actividad enzimática para cada tiempo de germinación, según fórmula.

7

TIEMPO(DÍAS)

CÁLCULOS

ABSORBANCIA ( ∆A )

1

2

4

6

∆ A=

( 2.58−2.57 ) ×25 ml 5 ×10

0.005

∆ A=

( 2.63−2.56 ) ×25 ml 5 ×10

0.035

∆ A=

( 2.56−2.55 ) ×25 ml 5 ×10

0.005

∆ A=

( 2.63−2.61 ) × 25 ml 5 ×10

0.01

1. Grafique sus resultados como absorbancia (eje y) vs tiempo (eje x) para cada experiencia. Tiempo (días)

1

2

4

6

Absorbancia

0.005

0.035

0.005

0.01

8

0.04

0.04

0.04 0.03 0.03

Absorbancia 0.02 0.02

0.01

0.01

0.01

0.01

0.01 0

0

1

2

3

4

5

6

7

Tiempo (dias)

VI. DISCUCIONES: Una

temperatura

correcta

es

importante

para

la

germinación;

generalmente las semillas no germinan por debajo de una cierta temperatura diferente según la especie. La luz también es importante para la germinación de algunas semillas. Las semillas muy pequeñas tienen tan solo mínimas cantidades de alimento almacenado para los principios del crecimiento del embrión, por lo que les es necesario volverse autótrofas cuanto antes. La germinación de otras semillas es inhibida por la luz. La longevidad de las semillas es un factor de importancia en la germinación. Contrariamente a la creencia popular, pocas son las que pueden sobrevivir durante muy largo tiempo. Ha habido muchos intentos de estudiar el metabolismo de semillas en estado de inactividad o en dormición (es decir, que no germinan porque las condiciones no son buenas. El letargo implica incapacidad de germinar aun en condiciones ideales). Sin embargo, parece que la bajísima absorción de oxígeno de tales semillas probablemente es el resultado de procesos no metabólicos, destructores, de lenta auto oxidación.

9

El crecimiento inicial requiere la utilización de las sustancias de reserva que previamente se habían almacenado en el endospermo o en los cotiledones. Para ello, tiene que haber un proceso de hidrólisis previa y movilización que genere moléculas de pequeño tamaño que puedan ser utilizadas por la plántula en desarrollo. La hidrólisis de proteínas está catalizada por diversos tipos de endopeptidasas y exopeptidasas, que liberan pequeños péptidos y aminoácidos. La movilización de lípidos implica a tres tipos de orgánulos: los cuerpos lipídicos, los glioxisomas y las mitocondrias; las enzimas clave en la metabolización de los lípidos, que pueden ser transformados en hexosas, son la isocitrato liasa y la malato sintetasa, cuyos niveles aumentan notablemente durante la germinación. El almidón, principal carbohidrato de reserva, puede hidrolizarse mediante la acción de α–amilasas y β–amilasas, o por la almidón fosforilasa, liberándose monosacáridos, disacáridos y oligosacáridos. La movilización de las reservas de fosfato se produce por acción de la fitasa. El embrión puede ejercer un control de las distintas actividades enzimáticas mediante la síntesis y liberación de fitohormonas. El ejemplo más típico de control hormonal es el de la hidrólisis de almidón por activación de las α–amilasas mediada por giberelinas en semillas de cereales. Mientras que las giberelinas, y parece ser que también el etileno, tienen un claro efecto estimulador de la germinación, el ácido abscísico, por el contrario, inhibe los procesos relacionados con la germinación.

VII. CONCLUSION: En conclusión hemos logrado determinar la variación en la actividad enzimática de la enzima α – amilasa, durante la germinación pudiendo calcular la absorbancia dependiendo a la cantidad de días de germinación de la semilla.

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Al realizar los cálculos de la absorbancia nosotros podemos ver que cuantos más días de germinación hay mayor es la absorbancia en esta práctica pudimos observar la absorbancia de 6 tiempos diferentes y esta nos enseña que la absorbancia es mayor dependiendo al tiempo.

VIII. BIBLIOGRAFIA:

[1] http://bioquimica-germinacion.shtml#ixzz468N7zGqJ

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