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• Diego Alejandro Escobar Madrid

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Guia honey tek Versión 1.2 Basada en una guía de Daniel Bravo, de grupo facebook “Estudio y cultivo de hongos Psilocybe en Chile” Con alguna imágenes tomadas por Belenus Taranis, grupo facebook “Micología Enteógena / Estudio~Cultivo de Setas Magicas(Reducción de daños)” Actualizada, ampliada y editada por Nathan Vrmil, de grupo facebook “Exploradores~Psicodélicos”

*El Honey tek genera micelio a partir de la germinación de esporas o la reproducción de micelio vivo. La tenencia de esporas en Argentina está penada por la ley. Tanto en Argentina como en Chile, la producción y tenencia de micelio están penadas por la ley. Esta información se provee únicamente con fines de estudios, y no debe ser interpretada como un aval de dicha actividad, úsese bajo su propio riesgo* “El Honey tek puede ser visto como el mayor milagro de la micología enteógena y el chamanismo urbano, como una pieza fundamental de la psiconáutica en general, dado que asegura un stock casi “infinito” de LC, haciendo que el usuario no tenga que volver a comprar jeringas o sellos de esporas, y dándole la posibilidad de generar un poderoso enteógeno – los hongos psilocibios– sin la necesidad de un laboratorio, y a un costo relativamente ínfimo. El Honey tek es lo que abastece a la emergente cultura enteógena, de los países donde los psicodélicos-enteógenos no existen, no crecen naturalmente, no están disponibles, o lo están a costos elevados.” Aclaración con respecto a la versión 1.2: Cuando se escribieron las primeras dos versiones de esta guía, los autores y la comunidad no estaban del todo enterados de la senectud (senescence) de las culturas líquidas, por lo que en un comienzo, se creyó que se podría replicar el micelio en un medio líquido de forma infinita. Hoy en día hemos aprendido por las malas, que esto no es cierto. Existe un cierto límite, más impuesto por el tiempo que por la cantidad de generaciones, durante el cual el micelio comienza a envejecer y morir.

Cultura Liquida (LC) ¿Qué es una cultura líquida? Una cultura líquida o LC (del inglés liquid culture) es una solución nutritiva en donde se produce y reproduce micelio vivo, que puede ser utilizada para inocular grano y comenzar un cultivo de hongos psilocibios. Una ventaja que tiene el LC sobre el uso de esporas, es que, a través de la cultura líquida el usuario se ahorra el tiempo que se demora en germinar las esporas (aprox 4 a 7 días), se cerciora que estas no contengan contaminantes, y en caso de aislarse una cepa, puede poseer una estabilidad genética mayor (honguitos más uniformes). Una desventaja que tienen las jeringas de LC frente a las jeringas de esporas, es que no pueden congelarse, dado que eso mataría el micelio. Y en caso de ser un LC mal conservado o viejo, este traerá problemas de cultivo (lo que obliga a siempre preguntar que generación de LC es, o cuánto tiempo tiene). ¿Qué es el Honey tek? El Honey tek es la técnica de cultivo que nos permite crear y reproducir las culturas liquidas. Se basa en generar un cultivo en un ambiente que provea lo necesario para hacer crecer y reproducir el micelio, a base de esporas o micelio. Generalmente se realiza en una solución de agua y miel natural esterilizada que luego es inoculada, pero existen muchas otras recetas (miel de palma, extracto de malta, solución dextrosa, jarabe de maíz, etc), es un tek flexible ya

que puede hacer fácilmente en tarros de diferentes tamaños, siempre que se mantenga la proporción adecuada entre los azúcares y el agua. Este tek tiene la ventaja de no necesitar muchas esporas o micelio para reproducirlo de forma abundante, de solo una pequeña porción ínfima de sello o LC, se puede sacar un centenar de jeringas (o en el caso de un frasco de mermelada, por lo menos 15 jeringas de LC) que a la vez pueden volver a usarse para sacar otros centenares de jeringas (así por 3 o 4 generaciones). Y al ser un tek relativamente “hermético”, puede realizarse en condiciones de cultivo en las que las esporas podrían contaminarse. Una desventaja que tiene el utilizar honey tek frente a utilizar las jeringas de esporas directamente para cultivar, es que si las esporas están contaminadas, también lo estará el LC, y la contaminación se desarrollará más rápido en este. Aunque esto puede ser utilizado para descartar sellos aun con la contaminación más pequeña, y asegurar la asepsia del cultivo. La otra desventaja que tiene, es la senectud del micelio, es decir, el envejecimiento y degradación del micelio a medida que pasa el tiempo y las generaciones de este. Aunque hay quienes recomiendan reproducirlo de forma infinita (como las versiones anteriores de esta misma guía), o hasta una cuarta o quinta generación, no se recomienda pasar de la tercera o el año y medio de cultivo. Si el usuario se encuentra próximo a comprar o conseguir una jeringa o vial de LC, nunca debe olvidar preguntar cómo fue conservada, y el tiempo o la generación que tiene dicha jeringa o vial.

Todas las generaciones posibles:

Materiales a utilizar: 1.- Frascos de vidrio (mermelada no curvos de 200ml) o Polipropileno (pp5) 2.- Miel de abeja natural (solida) o miel de palma 3.- Bebida isotónica/rehidratante/deportiva (gatorade o powerade azul) 4.- Agua destilada/agua mineral sin gas (no usar agua del grifo) 5.- Dos jeringas (para medir e inocular) 6.- Lysoform, lavandina/coro, guantes, alcohol, encendedor y mascarilla (equipo de esterilización) 7.- Papel aluminio 8.- Bolitas de polipropileno o trozos de vidrio/cerámica 8.- Olla a presión o autoclave 9.- Sello/jeringa de esporas, jeringa de LC, trozo de agar colonizado 10.- Incubadora y termómetro 11.- Clavo y martillo, o perforadora 12.- Fastix color rojo o silicona de alta temperatura 13.- Gotas oftálmicas de gentamicina 0,3% (opcional) 14.- Aerosol antioxidante (opcional)

Procedimiento: Preparación de las tapas y frascos: Lo primero que se debe hacer con una anticipación de 24-48hs (dependiendo la marca de silicona y su tiempo de curado) son las tapas de los frascos. Estas deben perforarse usando un clavo y martillo, o una perforadora (opcionalmente también puede colocarse un poco de

antioxidante en el agujero para prevenir el óxido), para luego ser selladas de ambos lados con silicona de alta temperatura o fatix rojo.

Este será el puerto por donde el usuario inyectará las esporas o el LC, en caso que se trabaje con jeringas (que es lo más recomendado). Se recomienda limpiar los frascos con alcohol previamente, junto con los pedazos de vidrio/bolitas de polipropileno que irán dentro. Alternativamente también puede hacerse un segundo puerto de intercambio gaseoso, relleno de vellón sintético, cinta microporosa de papel, o un filtro de 0,45micrones que soporte altas temperaturas. Pero con este otro puerto se perderá la hermeticidad del LC, y no podrá agitarse, por lo que deberá valerse de otros medios (incrustar una jeringa por ejemplo) para romper el micelio, o tener que cosecharlo en etapas tempranas.

Preparación de la solución: Lo siguiente que se debe preparar es la solución nutritiva (en este caso, se utilizará una mezcla agua-miel). La receta aquí empleada no es la única, en shroomery.org hay varias otras, y muy seguramente existan muchas todavía no descubiertas. Se recomienda derretir la miel solida primero a baño maría en un frasco. En frascos de 200ml, no se recomienda colocar más de 150ml de solución (que producirá para aprox. 15 jeringas de 10ml). Primero se coloca el agua en los frascos, luego la miel derretida, se lo agita hasta que se disuelve, y por último se coloca la bebida isotónica. La receta, en función del agua utilizada, es la siguiente: Agua 150 ml 250 ml 500 ml

Miel 1 - 1,5 ml 2 - 2,5 ml 4 - 5 ml

Gatorade 0,5 - 2 ml 1,5 - 4 ml 3,5 - 8 ml

Si se tiene pensado inocular desde una jeringa de LC o un trozo de agar, se puede agregar opcionalmente a la solución agua-miel un antibiótico leve resistente a la temperatura de esterilización (como un par de gotas oftálmicas de sulfato de gentamicina 0,3%), pero en caso de usarse esporas, no se recomienda el uso de antibióticos. Si el usuario posee un equipo de filtro que le permite deshacerse de partículas de aire y filamentos pequeños, se recomienda filtrarlo, aunque no es del todo necesario (la esterilización destruirá cualquier tipo de contaminación, pero las partículas pueden dificultar la visualización de micelio en sus primeras etapas). Aunque las guías en internet recomiendan utilizar cerca del 4% de miel, no se recomienda utilizar más miel de la arriba especificada por peligro a la cristalización durante la esterilización.

Esterilización: Antes de cerrar los tarros con las tapas, se debe colocar dentro de ellos, trozos de vidrio o bolitas de polipropeleno, de manera que ayuden en un futuro a destruir el micelio que allí se formará, y sea más fácil cargarlo en las jeringas.

Luego de esto, y de haber colocado la solución nutritiva en los frascos, se procede a esterilizarlos para eliminar toda contaminación que puedan contener. Las tapas deben colocarse levemente flojas (muy levemente), de manera tal que quede suficiente espacio para que salga/entre vapor durante la esterilización, pero que se hermeticen al descender la temperatura (y el metal de la tapa se contraiga), por lo general bien cerradas las tapas suelen tener una pequeña abertura-falla que es más que suficiente. Se puede colocar un aluminio sobre gran parte de ellas para que las proteja de una entrada masiva de vapor exterior.

SI se utiliza una olla a presión (que es lo más probable debido al difícil acceso a los autoclaves), se debe colocar una rajilla o un paño en el fondo, entre la olla y la base de los frascos, de manera tal que los frascos no exploten por exceso de temperatura. También puede colocarse una camiseta o trapo que los proteja de los costados de olla. Se debe colocar agua dentro de la olla, hasta que cubra la mitad de los frascos.

Para comenzar la esterilización, se debe cerrar la olla y calentarla a fuego alto hasta que la válvula superior comience a largar vapor, a partir de ese momento se debe pasar a fuego lento y calentar durante 25 - 35 min. No se recomienda más tiempo por el peligro de cristalizar la miel (aunque es aceptable que se oscurezca un poco). Una vez terminada la esterilización, se debe esperar 6hs para que el interior de la olla se enfrié a temperatura ambiente.

Inoculación: Para inocular los frascos desde un sello de esporas o un trozo de agar colonizado, se debe contar si o si una glovebox con medio estéril y guantes incrustados, dado que será necesario abrir los frascos y su contenido estéril entrará en contacto con el medio. En este caso lo primero que se debe hacer es (utilizando guantes y mascarilla), esterilizar el interior de la glovebox con un atomizador cargado de una mezcla 80/20 agua-cloro, y una vez seco, rociar un poco de lysoform. Todos los elementos a usar (cuchillo, jeringa sello cerrado, exterior de los frascos) deben esterilizarse con alcohol de botiquín antes de meterse dentro.

Una vez dentro de la glovebox, si se cuenta con sellos, se puede armar las jeringas mezclando agua destilada y 1/8 del sello en un frasco vació, cargarse y luego inyectarse, o puede volcarse 1/8 directamente sobre el frasco abriendo la tapa (aunque esto puede ser peligroso, puesto que se “deshermetizará” la tapa). En caso de contar con un trozo de agar, puede intentar disolverse en un frasco con agua destilada, cargarse en jeringas y luego inyectarse, o puede también abrirse la tapa y volcarse directamente dentro, para luego agitarse y destruirlo.

Si se cuenta con jeringas de esporas o LC dentro de la glovebox, estas deben inyectarse directamente en los puertos de silicona de los frascos esterilizados. En caso de las jeringas de esporas no se necesita inocular más de 0,5 - 1 ml (incluso, puede que menos si la concentración de esporas es alta), pero en el caso de las jeringas de LC esto puede ser muy variante, dependiendo la cantidad de micelio que contenga la jeringa. Antes de usarse, debe voltearse y girarse levemente intentando despegar/romper el micelio guardado (esto no debería de ser muy difícil, dado que el micelio debió de ser destruido antes de cargarse en las jeringas). El usuario debe asegurarse de inyectar suficiente micelio hasta ver en la solución pequeñas hifas flotando, y en caso de haber utilizado antibióticos, la cantidad de micelio inoculado debe ser alta. En caso de poseer una jeringa de LC con poco micelio, se la puede dejar incubando hasta que tenga una carga media, pero esto es peligroso, dado que el micelio puede crecer tanto hasta ser imposible de destruir en trozos y tapando la aguja al apelmazarse. El usuario tiene que tener en cuenta que, al inyectar la aguja a través del puerto de silicona, puede que el recipiente se encuentre hermetizado, por lo que es posible que la jeringa baje sola tendiendo a vaciarse rápidamente. El usuario debe evitar esto sosteniéndola firmemente del émbolo (la parte de atrás). En caso de no contar con una glovebox, no se podrá trabajar con trozos de agar o sellos de esporas. Pero si se puede trabajar con jeringas de esporas o LC si se posee una habitación pequeña como un baño o una zona con poca circulación de aires, de manera que sea posible esterilizarla. Para ello, utilizando guantes y mascarilla, se debe rociar las paredes con alcohol de botiquín o solución 30/70 de lavandina-agua (se elige uno, nunca ambos juntos), y el aire con lysoform o desinfectante. Una vez dentro de la habitación estéril, se debe trabajar con rapidez. La olla a presión debe abrirse dentro de la habitación, y la aguja de las jeringas debe esterilizarse con la llama de un encendedor antes de inyectarse en los puertos de silicona. Para ello se debe quemar hasta que se vuelva roja, y luego se deja 30 segundos enfriar (o enfriarlo con un algodón empapado en alcohol).

Incubación: Una vez inoculados los frascos, el usuario debe asegurarse que están bien cerrados (sobre todo si es que fueron abiertos), el frasco debe poder agitarse fuertemente sin tener ningún tipo de fuga. En su tapa puede colocarse aluminio tapando hasta los bordes para así ayudar a contrarrestar cualquier tipo de fuga.

Luego de ser asegurados, los frascos pueden extraerse del ambiente esteril o glovebox, y colocarse en una incubadora con termometro a 24 - 26º (aunque dependiendo la cepa, puede llegar a desarrollarse mejor a temperaturas bajas de 18º, o altas de hasta 29º). Para asegurarse la temperatura se pueden usar mantas/placas térmicas, calentadores de pecera, o resistencias. En caso de vivir en un lugar cálido, no es necesario colocar más temperatura que la propia del lugar. La incubadora puede ser un taper/caja grande, un cajón, un armario, o cualquier lugar donde se logre mantener la temperatura deseada. Preferentemente, se debe mantener en oscuridad.

A los 3 - 4 días ya podrá verse diminutas nubes de micelio flotando. Con 1 - 2 semanas de incubación es suficiente para que el micelio se desarrolle lo suficiente y pueda pasarse a jeringa, pero esto puede variar considerablemente (dependiendo de la cepa, temperatura, carga inicial de micelio, etc), incluso entre LC inoculados por una misma jeringa, algunos pueden llegar a ser muy rápidos, necesitando solo 5 - 6 días para tener una carga baja-media de micelio, o necesitar hasta 3 semanas para desarrollarse completamente. El LC no debe

llegar a copar todo el frasco, ni contener micelio blanco asomándose por la superficie, de lo contrario será imposible romperlo lo suficiente para que pueda cargarse en jeringas. Una vez desarrollado, el micelio parecerá una esponja blanca semitransparente, de forma homogénea. El LC no debe agitarse hasta que vaya a ser cosechado.

Conservación / Cosecha: Para conservar un LC, una vez desarrollado, puede guardarse en la nevera, donde se detendrá su crecimiento, y donde puede llegar a durar cerca de 1 año y medio. Una vez que se decida usarse, será necesario pasarlo a una jeringa. Para ello, se debe contar con una glovebox, o una habitación esteril donde trabajar. Luego de esterilizar el área de trabajo, y el exterior del LC, este debe agitarse hasta destruir con los trozos de vidrio todo el micelio homogéneo. Luego de eso tendrá el aspecto de muchos hilos dispersos. Con una jeringa esterilizada se debe absorber el líquido a través del puerto. En su tamaño ideal, los pequeños trozos de micelio podrán entrar dentro de la jeringa sin apelmazarse contra la punta de la aguja; en caso de haber sido incubado de más, no contener suficientes trozos de vidrio, o haber tomado completamente el frasco, el micelio será imposible de extraer en jeringas, y el LC deberá desecharse (o puede abrirse e intentar destruirse manualmente, hecho muy riesgoso y no recomendado).

LC con micelio intacto; LC con micelio destruido. Es normal que una vez agitado y destruido, el micelio se reduzca de tamaño (dado que se comprimirá en muchos trozos), y comience a flotar en la superficie. Por ello es necesario siempre agitar levemente el LC antes de empezar a extraer con la jeringa, para que los trozos se distribuyan a lo largo de todo el frasco. También es normal que, al estar hermetizado, cueste extraer el líquido, y el émbolo tienda a volver a vaciarse. Puede que el usuario necesite mover en forma de giro un poco la jeringa para que “entre” un poco de aire por la diminuta conexión puerto-jeringa. Cuidado al hacer esto, porque puede dañar la silicona y dejarle un agujero. No es aceptable que los trozos de micelio tapen la punta de la jeringa y no le permitan succionar, si esto sucede, es porque el micelio se desarrolló más de lo debido, y el usuario deberá luchar sucionando y expulsando con la jeringa, hasta romper o cargar trozos más pequeños. Siempre debe esterilizarse la punta de la jeringa antes de cargar el LC, y después de hacerlo, es decir, antes de colocarle su respectiva tapa. Una jeringa de LC puede conservarse en la nevera hasta que se necesite usarla por un año y medio (no se recomienda pasarla de la nevera a temperatura ambiente de forma continua, dado el peligro de germinar bacterias), y siempre puede usarse para comenzar un cultivo de hongos (una jeringa muy cargada no necesita inocular más de 1ml) sin importar la generación

que sea. Pero para volver a hacer un LC, no se pueden usar jeringas de tercera generación o superior (véase el organigrama de arriba). Alternativamente, si se trabaja en una glovebox, los frascos de LC semivacíos con un poco de micelio, pueden volver a llenarse con solución agua-miel esteril y volver a incubarse.

Como ya se mencionó, las jeringas de LC con poco micelio pueden ponerse a incubar para que este crezca, pero no se recomienda incubar mucho. También es normal que el micelio se concentre y parezca menos del cosechado inicialmente, por eso, como se dijo anteriormente, antes de usarse la jeringa debe girarse suavemente varias veces, para separar el micelio.

Contaminaciones y problemas: Los problemas por el uso de jeringas viejas, mal conservadas, o de muchas generaciones, son: la aparición de overlay voraz (algodón-costra dura de rápido crecimiento), rendimientos pobres, setas deformes o albinas que no esporulan, problemas de fructificación y perdida de potencial psicoactivo. Por ello se recomienda siempre volver a empezar de esporas pasada la tercera generación de LC. Un diagnóstico rápido de contaminaciones, puede ahorrarle al usuario muchos días de cultivo, y el invertir esfuerzo en una cosecha contaminada:

LC sano y LC contaminado por bacterias

Cualquier signo de turbidez es señal de contaminación por bacterias, y de prosperar esta, puede generar residuos visibles en la base del frasco. Por lo general las bacterias comerán los nutrientes más rápido que las esporas, evitando así que estas se desarrollen, aunque, en caso de contener suficiente micelio desarrollado, un frasco con turbidez puede intentar purificarse con antibióticos, pasando un poco de micelio contaminado a un frasco con un par de gotas de gentamicina 0,3%, luego esperar unos días a ver si hay bacterias o crecimiento de micelio, y repetir esto las veces que haga falta hasta que el líquido se vuelva transparente. Puntos negros, o de cualquier color, flotando en el líquido también son señales de contaminación, micelios y esporas de otros hongos. En este caso nada puede hacerse si ya se mezclaron los micelios al agitarse. Algodones blancos de formas muy concentrada, que flotan y parecen repelerse entre sí, también deben considerarse contaminación y no confundirse con micelio sano (que debería tener una apariencia más transparente antes de agitarse). Es necesario tener varios LC de una misma jeringa o fuente, para comparar el color del micelio una vez desarrollado. Dado los distintos niveles de azucares y bebida isotónica, no siempre el micelio lucirá blanco y armonioso, y puede tomar matices amarillos, dorado, e incluso de colores de la bebida isotónica (azul o rojo). Cualquier variación en uno de los LC de varios provenientes de una misma fuente, puede ser considerada una contaminación.