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UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA DE LA SELVA

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS PECUARIAS

FACULTAD DE ZOOTECNIA PRÁCTICA IV: OBSERVACION DE MUESTRAS invivo

CURSO

:

MICROBIOLOGIA ANIMAL

PROFESOR : Med.Vet.TAFURZEVALLOS, LIZANDRO ROGER

ALUMNO

:

MOREL CASTRO WILDER ALEX

FECHA DE ENTREGA:

04-10-2017

TINGO MARIA – PERÚ

I.

INTRODUCCIÓN

En la naturaleza, los microorganismos se encuentran formando poblaciones mixtas con otros tipos de microorganismos. Los cultivos de estas mezclas se llaman por ello cultivos mixtos. Sin embargo, el conocimiento de los microorganismos se consigue mediante el estudio de cepas aisladas, cultivadas en el laboratorio en cultivos puros (o axénicos). En ocasiones el estudio molecular conduce a la caracterización de los microorganismos, aún en poblaciones mixtas. Sin embargo la identificación bacteriana y la caracterización completa solo es posible tras el aislamiento de la bacteria y la obtención de cultivos puros. Por ello el primer problema al estudiar una bacteria es su aislamiento del resto de los microorganismos presentes (enn una muestra patológica, de agua, de suelo, de alimentos, etc.). Una vez que se ha logrado el aislamiento es posible obtener la bacteria de interés en cultivo puro. Un medio de cultivo intenta el crecimiento y reproducción in vitro de las bacterias, para observar sus propiedades y conseguir un mejor estudio bioquímico e inmunológico, al contar con material en cantidad suficiente. Por ello constare de lagunas propiedades (pH adecuado, sales, nutrientes, condicione de aero-anaerobiosis, etc.), que serán las más idóneas para la bacteria que deseamos estudiar y se citan en cada una de ellas en particular, en la bacteriología sistemática.

Los medios de cultivo se dividen por su finalidad en: medios de enriquecimiento que tratan de aumentar el número de bacteria existentes , si consideramos que se encuentran en cantidad muy exigua, a la vez que inhiben la flora de asociación acompañante( y de aislamiento ( que tienen por fin conseguir una colonia o clon, es decir, grupo de bacterias procedentes de una sola, con todas sus propiedades); los dos primeros son principalmente líquidos y los segundos, sólidos  OBJETIVOS  Identificar métodos eficaces para el aislamiento de microorganismos.  Conocer algunos métodos para obtener un cultivo puro.

II.

REVISIÓN BIBLIOGRAFICA

Microorganismos en la boca: estas son las especies que podemos encontarr según el estado del paciente:

PACIENTESANO

Gram + Streptococcus: sanguis, gordonii, oralis, mitis Actinomyces: naeslundii, israelii, viscosus Gram – Veillonellaparvula Fusobacteriumnucleatum

GINGIVITIS

Gram + Streptococcus: sanguis, oralis, mitis, intermedius Peptostreptococcus micros Actinomyces: naeslundii, israelii, odontolyticus Eubacterium: brachy, timidum Gram – Veillonellaparvula Fusobacteriumnucleatum Campylobacterrectus Bacterioidesgraciis Prevotella: nigrescens, loeschii Capnocytophaga: ochracea, gingivalis, sputigena Selenomonasnoxia Eikenellacorrodens

Factores químicos: La acidez de las secreciones gástricas mantienen sin duda la esterilidad habitual del estómago. El Ph bajo de la piel (3-5), debido en gran parte a los productos ácidos del metabolismo bacteriano, frena sin duda el crecimiento de muchos microorganismos que toman contacto con sus superficie.

Factores microbianos: La flora de la región faríngea presenta problemas peculiares para el aislamiento e identificación de microorganismos, por lo tanto se refiere a los componentes de la flora normal como a microorganismos con acción patógena. Se encuentran ampliamente distribuidos por la naturaleza, y a menudo forman parte de la flora bacteriana de la piel y el tracto respiratorio superior; muchas de las especies que se encuentran en el hombre son comensales. La especie predominante patógena para el hombre es el staphylococcus aureus, constituye la causa más común de las infecciones supurativas para el hombre. El aislamiento de S. aureus a partir del exudado faríngeo y exudado de piel, no tiene importancia diagnóstica, ya que se considera parte de la flora normal de la faringe y nasofaringe, por lo que no tiene significado clínico.

PROCEDIMIENTO: A). Raspado de piel 1. Limpiar y esterilizar el área a trabajar con fenol al 5% 2. Prender el mechero fischer cerca de donde se va a trabajar, si es posible colocar otro 3. Humedecer el hisopo en solución salina estéril, pasarlo sobre la superficie de la piel (con o sin pelo) 4.- Descargar el hisopo en dos cajas de petri con el medio ya preparado. (Es recomendable que para cada dos cajas se utilice un solo hisopo con muestra). No retires completamente las tapas de losmedios de cultivo para evitar que se contaminen 5.- quemar el hisopo y tirarlo. 6.- Esteriliza el Asa de platino hasta el rojo vivo, enfríalo introduciéndolo en un extremo del Agar 7.- Realiza el sembrado de los microorganismos por el método de estría utilizando el asa y como se muestra en la figura. Evita destapar completamente la tapa de los medios de cultivo. 8- Repetir el mismo proceso con otro hisopo estéril y con solución salina para otras dos cajas . siembra por estría utilizando el Asa de platino y así hasta que se terminen se sembrar todos los medios preparados. 9.- Incubar a 37ºC por 24-48 horas y observar resultados.10.- Repite el mismo procedimiento pero ahora toma muestra de la faringe con hisopos estériles en las zonas afectadas como: amígdalas,pared posterior de la faringe, en general cualquier área que manifiesta signos de inflamación, exudados y úlceras, procurando no tocar con el hisopo la lengua.

B) CULTIVO DE BACTERIAS A PARTIR DE UN FROSTIS FARÍNGEO

OBJETIVOS 

Comprender el concepto de colonia bacteriana, medio de cultivo y halo de inhibición



Conocer las técnicas de siembra y cultivo de bacterias



Ser consciente de la importancia de la higiene y el cuidado en la manipulación de materiales biológicos.



Comprender la importancia de la eliminación de los residuos orgánicos



Conocer el instrumental de laboratorio necesario en microbiología y los procedimientos para su utilización

MATERIALES 

Depresor de lengua



Torunda o hisopo estéril



Placas de agar-sangre



Asa de siembra



Rotulador de vidrio



Cinta adhesiva



Contenedor de residuos orgánicos

DESARROLLO DE LA PRÁCTICA Antes de empezar 

No se puede tocar nada que vaya a tomar contacto con la muestra biológica con las manos (depresor, asa de siembre, torunda,...) para evitar contaminaciones.



Una vez utilizado este material ha de ser eliminado en un contenedor especial.

Estos

una planta

de

contenedores tratamiento de

serán residuos

llevados

posteriormente

biológicos,

donde

a

serán

incinerados. 

Todos los materiales o muestras tomadas deben estar perfectamente identificados: nombre, grupo, fecha e indicativo del tipo de muestra.



Las placas sembradas deben sellarse con cinta adhesiva al finalizar para evitar su contaminación o la nuestra.



Al acabar la práctica, se deben lavar bien las manos.

Toma de la muestra 

Se abre con cuidado, por un extremo, el depresor de madera, sin tocar el otro extremo para mantenerlo estéril.



Distribuidos por parejas, uno de los miembros de la pareja sujeta con el depresor la lengua del otro, colocándola pegada al suelo de la boca, manteniendo despejada la abertura bucal.



CON CUIDADO, se introduce una torunda y se tocan suavemente las amígdalas, en donde se encuentran bacterias, intentando evitar el contacto con la lengua u otras zonas. Es normal que se provoque un reflejo de arcada. En este caso, se separa la torunda y se vuelve a intentar.



Al finalizar, se tira el depresor al contenedorde desechos orgánicos.



Se tapa la torunda y se rotula con el nombre del donante y la fecha, indicando con una F, que se trata de un frotis faríngeo.

SIEMBRA : A continuación se toma una placa de agar-sangre y se procede a la siembra del material recogido con la torunda o Hisopo. Se extrae la funda de la torunda y se pasa SUAVEMENTE por la superficie, cubriendo el área señalada en el dibujo como (A) Al finalizar, se tira el hisopo al contenedor de desechos orgánicos.

AISLAMIENTO Para intentar que las colonias crezcan separadas tomamos un asa de siembra y se realizan resiembras en dos zonas: 

(B) Tocando con el asa la zona (A) se realiza una línea zig-zagueante SUAVEMENTE sobre la superficie (no hay que perforar la superficie del agar-sangre) (C) Sin tocar las anteriores zonas. Se tapa y se sella la placa con cinta adhesiva.



Se rotula la tapa indicando el nombre del donante, su grupo-clase, la fecha y la F (de frotis faríngeo).



INCUBACIÓN Y OBSERVACIÓN Se llevan las placas a incubar a 37ºC (temperatura corporal), durante 24 horas. Tras este período se recogen las placas y SIN ABRIR se observa el crecimiento bacteriano. Al finalizar la práctica se entregan las placas al profesor para que sean destruidas junto con el resto de material empleado.

OBSERVACIÓN El medio de cultivo agar-sangre es un medio nutritivo general, no selectivo, en el cual pueden crecer casi todos los tipos de microorganismos. Su nombre deriva de que contiene un 5-10% de sangre desfibrinada (no coagula) extraída de caballo, conejo o, sobre todo, de carnero. Las bacterias existentes en la faringe pueden ser de dos tipos: 

Flora bacteriana propia o normal, de vida saprofita (crecen sobre restos de comida).



Flora

patógena,

que

provoca

enfermedades

(especialmenteStreptococcus pyogenes, responsable de la faringitis aguda, la fiebre reumática, angina estreptocócica, escarlatina, erisipela)

Al tomar una muestra de la faringe, las bacterias existentes empiezan a dividirse. De una bacteria se forman miles o millones, dando lugar a una colonia, visible a simple vista.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS:

A) REACCIONES POSITIVAS EN DISTINTOS MEDIOS

GELOSA SANGRE

Para el aislamiento, cultivo y detección de actividad hemolítica de Staphylococcus, Streptococcus y otros microorganismos fastidiosos. Se observan colonias blancas casi grises, Grandes, convexas de consistencia butirácea, Presentan bordes regulares. Se observa que Presenta hemólisis.

MANITOL SAL AGAR (MSA) Se utiliza como medio selectivo, para cultivar y enumerar especies clínicas de estafilococos El manitol cuando es utilizado por los microorganismos, vira de su color original rojo a amarillo. Se observan colonias chicas, blancas, convexas, de consistencia butirácea , presentan bordes irregulares. S. aureus Manitol sal Colonia amarilla S. epidermidis Manitol sal Colonia incolora

AGAR VOGEL Y JONSON (AVJ) Para la detección de Staphylococcus aureus coagulasa-positivo, se observan colonias negras Pequeñas. bordes irregulares con halo amarillo. Para S. epidermidis y otros Pequeñas, negro-grisáceos, sin halo, El medio presenta un vire de rojo pálido a amarillo.

ESTAFILOCOCO S110 S110 Colonias blancas un poco amarillentas, Se observan colonias chicas, convexas, De consistencia butirácea y bordes Regulares.

B)

DESCRIPCIÓN

DEL

TIPO

DE

COLONIAS

OBTENIDAS

Observar las colonias obtenidas y describirlas teniendo en cuenta las siguientes características: 

Forma: Puntiforme, Circular, Rizoide, Irregular, Filamentosa.



Tamaño: Grande (más de 3Mm.), Mediana (2-3Mm.), Pequeña (1-2 Mm.)



Color: Reportar el color final después de la incubación



Borde: Entero, Ondulado, Lobulado, Filamentoso, Ondeado



Elevación: Plano, Elevado, Convexo, Pulvinado, Umbonado



Superficie: Suave, Brillante, Rugosa, Plegada, Seca, Polvorienta

III.

3.1.

MATERIALES Y METODOS

Lugar y Fecha

La practica acerca de observación de microorganismos invivo lo realizamos en el laboratorio de sanidad animal de la facultad de zootecnia de la Universidad Nacional Agraria de la Selva (UNAS - Tingo Maria) ubicado en el distrito de Rupa Rupa, provincia de Leoncio Prado, departamento de Huanuco. Geográficamente, esta zona se encuentra situada entre las cordilleras central y oriental. Esta considerada como bosque Tropical. Ubicado a una latitud sur 9° 17”58” y longitud oeste 76° 01”07” a 660 m.s.n.m. el clima que presenta es tropical húmedo, temperatura media anual de 24°C, tiene un precipitación pluvial de 3.660 mm y una humedad relativa de 84% .

3.2.

Materiales



Asa de COLLE



Mechero



Placas Petri con la muestra de la bacteria respectiva



Plumón indeleble



Tubos de caldo nutritivo



Guantes quirúrgicos



Mascarilla

3.3.

Métodos

El método utilizado en la práctica fue teórico práctico con las adecuadas indicaciones del encargado del curso.

IV.

RESULTADOS

V.

DISCUSION

En la preparación de medios de cultivos en forma liquida (caldo nutritivo) y sólida (gelificantes) se trata es de conseguir un medio que reúna las condiciones fisiológicas necesarias para que las células se desarrollen. Los parámetros más importantes a tener en cuenta son la presencia de agua, la temperatura, el pH y el oxígeno. Los medios de cultivo pueden ser sólidos, semisólidos o líquidos, con composición química conocida o indefinida.

VI.

CONCLUCIONES

Al finalizar el trabajo práctico estamos en capacidad y condiciones de:aislar yPreparar adecuadamente medios de cultivo a partir de sus ingredientes y a partir de medios de cultivo deshidratados. El medio de cultivo líquido (caldo nutritivo) y gelificante fue preparado específicamente para el aislamiento de salmonella shigella bacteria estudiada y posteriormente aislada.

VII.

BIBLIOGRAFIA

-

http://www.danival.org/notasmicro/medioscult/_madre_medios.html

-

http://www.ucv.ve/Farmacia/Micro_web/Catedras02/medicult.pdf

-

http://www.geocities.com/CapeCanaveral/Hall/3081/natural/caldo.htm

-

http://www.wikilearning.com/diferenciacion_en_los_medios_de_cultivowkccp-17561-3.htm

-

http://www.etsea2.udl.es/invitro/preparac.htm

-

http://100cia.com/opinion/foros/showthread.php?t=2585