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UNIVERSIDAD DE LA SALLE DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BASICAS BIOQUIMICA I PRACTICA 5: Identificación de carbohidratos Valeria Fernanda Giraldo Arias RESUMEN En esta práctica se tomarán 6 tipos de reacciones de carbohidratos con diferentes monosacáridos o disacáridos y con agua. En general se usaba la glucosa, la fructuosa, la arabinosa, sacarosa y el almidón. En cada una de la reacción se usaba 1ml o 3ml; dependiendo el procedimiento a seguir. En este laboratorio se debe tener un previo conocimiento de las características y comportamientos de los monosacáridos, disacáridos, azucares, reductores, polisacáridos, hexosas, pentosas y de las reacciones al realizar. ABSTRACT In this practice, 6 types of carbohydrate reactions with different monosaccharides or disaccharides and with water will be taken. In general, glucose, fructose, arabinose, sucrose and starch were used. In each of the reaction 1ml or 3ml was used; depending on the procedure to follow. In this laboratory you must have a prior knowledge of the characteristics and behaviors of monosaccharides, disaccharides, sugars, reducers, polysaccharides, hexoses, pentoses and the reactions to perform. INTRODUCCION Los carbohidratos son moléculas formadas por carbono, hidrógeno y oxígeno (C, H, O) e incluyen algunas de las moléculas más relevantes en la vida de los organismos, como son la glucosa, que es universalmente utilizada por las células para la obtención de energía metabólica, el glucógeno contenido en el hígado y el músculo, que forma la reserva de energía más fácilmente accesible para las células del organismo y la ribosa y desoxirribosa que forman parte de la estructura química de los ácidos nucleicos.

Desde el punto de vista químico, los carbohidratos son polihidroxi aldehídos o cetonas y sus polímeros y existen en tres categorías principales distinguibles por el número de unidades de azúcar que los forman: monosacáridos, oligosacáridos y polisacáridos. Los polisacáridos liberan a la hidrólisis centenares o millares de monosacáridos; mientras que los oligosacáridos producen de dos a l0 monosacáridos y los monosacáridos mismos son las unidades mínimas de los carbohidratos que

ya no se pueden hidrolizar. Se les llama carbohidratos debido a que su estructura química semeja formas hidratadas del carbono y se representan con la fórmula Cn (H2O)n.

Los carbohidratos tienen diversas funciones en el organismo destacan: su papel como combustible metabólico (1 g de carbohidrato produce 4 Kilocalorías); como precursores en la biosíntesis de ácidos grasos y algunos aminoácidos y; como constituyentes de moléculas complejas importantes: glucolípidos, glucoproteínas, nucleótidos y ácidos nucleicos.

Monosacáridos Hay dos familias de monosacáridos las ALDOSAS y las CETOSAS. Las aldosas y cetosas más abundantes en la naturaleza tienen entre 3 y seis átomos de carbono. Normalmente, las cetosas se denominan insertando la sílaba ul en el nombre de la aldosa correspondiente. Ejemplo: Aldosas ----> Cetosas Ribosa ----> Ribulosa Eritrosa ----> Eritrulosa GLICERALDEHÍDO y DIHIDROXIACETONA: Ambas moléculas se encuentran en la vía de la glucólisis formando los intermediarios llamados las “triosas fosfato” pues las dos están presentes como ésteres del ácido fosfórico, que se transforman de manera reversible una en la otra, por la acción de la enzima triosa fosfato isomerasa. RIBOSA y RIBULOSA: Ambas son importantes por participar en el ciclo de las pentosas y en el Ciclo de Calvin de la fotosíntesis. La ribosa tiene la función adicional de formar parte de todos los nucleótidos del RNA y cuando pierde el oxígeno del carbono 2, se transforma en la desoxiribosa, presente en todos los nucleótidos del DNA. GLUCOSA y FRUCTOSA: La aldohexosa glucosa es tal vez el monosacárido de mayor importancia para el metabolismo celular, pues todas las células la aceptan para alimentar las vías principales del metabolismo: La glucosa puede, siguiendo el eje metabólico central, oxidarse totalmente hasta CO2 y agua, impulsando la síntesis de ATP; dirigirse hacia la síntesis del glucógeno; alimentar el ciclo de las pentosas; dirigirse hacia la síntesis de los ácidos grasos y los triacilgliceroles o bien terminar en la producción de lactato, cuando las células funcionan en condiciones de carencia de oxígeno.

PROCEDIMIENTO: Reacción de Molish-Udransky 1. Colocar en una gradilla 6 tubos de ensayo

2. 3. 4. 5. 6.

Etiquetar y enumerar del 1-6 Añadir a cada tubo 3 ml de cada solución Agregar a todos los tubos 2 gotas del reactivo Agitar la mezcla Añadir a cada tubo 1ml de Ácido sulfúrico

Reacción de Fehling 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8.

Colocar 5 tubos de ensayo Etiquetar y enumerar del 1-5 Añadir a cada tubo el reactivo de Fehling, agregando 2 ml de solución A y 2 ml de Solución B Agitar hasta que quede bien Añadir a cada tubo 3 gotas de las soluciones Colocar los tubos en baño maría a ebullición durante 5 minutos Dejar enfriar a temperatura ambiente Observar

Reacción de Barfoed 1. 2. 3. 4. 5. 6.

Preparar 4 tubos de ensayo Etiquetar y enumerar del 1-4 Añadir a cada tubo 3 ml del reactivo de Barfoed Añadir 1 ml de las soluciones Colocar los tubos a baño Maria a ebullición Observar y registrar el tiempo que tarda en aparecer un precipitado rojo

Reacción de Bial 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10.

Preparar 3 tubos de ensayo Etiquetar y enumerar del 1-3 Agregar a cada tubo 3 ml del reactivo de Bial Añadir a cada tubo 0,5 ml de las soluciones Colocar los tubos a baño maría a ebullición durante 5 minutos Retirar Diluir cada tubo con 5 ml de agua destilada Agregar 2 ml de n-Butanol Agitar los tubos Dejar reposar durante 5 minutos

Reacción de Seliwanof 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8.

Preparar 4 tubos de ensayo Etiquetar y enumerar del 1-4 Añadir a cada tubo 1 ml de las soluciones Añadir a cada tubo 0,5 del reactivo de Seliwanoff Colocar los tubos a baño maría a ebullición, mantener exactamente por 60 segundos. Sin retirar los tubos del baño de Maria observar los cambios y tomar nota Continuar calentando Observar el cambio de color a intervalos de 1-5 minutos y registrar resultados

RESULTADOS Tabla #01: Reacción de Molish-Udransky Tubo

Solución

Resultado

1 2 3 4 5 6

Formaldehido Glucosa Fructuosa Arabinosa Sacarosa Almidón

Negativo Positivo Negativo Positivo Negativo Positivo

Tabla #02: Reacción de Fehling Tubo

Solución

1 2 3 4 5

Glucosa Fructuosa Arabinosa Sacarosa Almidón

Resultado precipitado color rojo Si Si Si No No

Propiedad de reductor o no reductor Si Si Si No No

Clasificación

Resultado precipitado color rojo Si Si No Si

Propiedad de reductor o no reductor Si Si No Si

Propiedad de reductor o no reductor Monosacarido Monosacarido Disacarido Disacarido

Monosacarido Monosacarido Monosacarido Polisacarido Polisacarido

Tabla #03: Reacción de Barfoed Tubo

Solución

1 2 3 4

Glucosa Arabinosa Lactosa Maltosa

Tabla #04: Reacción de Bial Tubo

Solución

Clasificación

1 2 3

Glucosa Arabinosa Agua

Pentosa Hexosa

Resultado amarillo o azul Amarillo Azul Amarillo

Tabla #05: Reacción de Seliwanoff Tubo 1

Solución Glucosa

2 3 4

Arabinosa Agua Fructosa

Transparente Naranja Claro Transparente Transparente Rosado Rojo intenso

Resultados 60s- 2m 4m-5m 60s-5m 60s-5m 60s 2m-5m

Clasificación Aldosa Aldosa Cetosa

DISCUSIÓN DE RESULTADOS Durante el laboratorio se realizó la identificación de los diferentes carbohidratos mediante los distintos experimentos como el de Molisch-Udransky al cual es una reacción que tiñe cualquier carbohidrato presente en una disolución, como resultado formaldehido es positivo, glucosa es precipitado morado, fructuosa es positivo, arabinosa se obtuvo un morado en la superficie, sacarosa es un morado en la superficie, pero no la tiñe comple y finalmente el almidón dio un precipitado morado. El reactivo de Fehling es una disolución que se utiliza como reactivo para la determinación de azucares reductores en nuestros resultados todas y cada una; en los resultaron mostraron que más de la mitad tenía una aparición del precipitado rojo. El reactivo de Barfoed el cual es utilizado para detectar monosacáridos como en la reducción de cobre obtuvimos los siguientes resultados la glucosa se precipito de color rojo, la arabinosa al igual se precipito de color rojo, la lactosa no tuvo esos resultados, la maltosa también obtuvo un color rojo. Determinante de una reacción de oxido cuproso. Por último, la prueba es la Seliwanoff la cual es una prueba química para distinguir aldosas y cetonas realizando la prueba en la Glucosa, Fructuosa y agua. CONCLUSIÓN A través de la realización de la practica establezco las siguientes conclusiones: 1. En la prueba de Molish se identifico de manera muy clara cuando hay presencia de glúcidos. 2. En las pruebas de Lugol, Molisch y Fehling se relacionaron de manera concreta los conceptos teóricos de la práctica de laboratorio. 3. La prueba permitió diferenciar los elementos determinantes para que una reacción química sea positiva o negativa