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• Thalia Echevarria

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MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS | PROF. PEDRO BARZOLA

Practica: CONTROL MICROBIOLÓGICO DE SUPERFICIES VIVAS E INERTES

I. INTRODUCCION La limpieza y la desinfección son procedimientos de gran importancia, ya que permiten controlar la presencia de microorganismos sobre las superficies. La desinfección es un proceso que implica la destrucción de microorganismos perjudiciales (formas vegetativas), a través del uso de sustancias químicas o agentes físicos aplicados sobre superficies inertes. La limpieza debe ser un paso previo a la desinfección ya que con este proceso, además de eliminar muchas sustancias que pueden servir como nutrientes para los microorganismos, se eliminan sustancias que pueden impedir que las soluciones desinfectantes actúen eficientemente. En el Laboratorio de Microbiología estos procesos deben realizarse de rutina, ya que el trabajar con microorganismos exige que se tomen medidas para evitar la contaminación del ambiente, del material de trabajo y del personal. Es por ello que se debe conocer y controlar la calidad microbiológica del aire y de las superficies de trabajo posterior a estos procesos, ya que los microorganismos podrían ser fuente de contaminación para el material con el que estamos trabajando. La evaluación de la calidad microbiológica del ambiente nos indica la cantidad de microorganismos que están presentes en un área determinada. Los microorganismos generalmente no están flotando en el aire sino que se encuentran sobre partículas inertes, por ejemplo polvo, gotas de agua, etc. que le sirven como medio de transporte, las cuales pueden depositarse sobre las superficies; es por ello que mientras más limpia es un área, menor será el número de microorganismos presentes en el aire de la misma. Las personas también son una fuente de contaminación, ya que liberan gran cantidad de partículas al moverse, toser, estornudar, por exfoliación de la piel, etc.

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Algunas de estas partículas llevan microorganismos que podrían contaminar el material con el que estamos trabajando; en este sentido los antisépticos, deben ser usados por el personal para descontaminar la piel y los tejidos expuestos antes de entrar a las áreas. CONTROL MICROBIOLÓGICO DEL AIRE: El método utilizado es el de sedimentación en placas de agar, que consiste en exponer placas con un medio nutritivo sólido al ambiente durante un periodo determinado, incubar las placas y hacer el recuento de las colonias obtenidas. Con este método se detectan los microorganismos que caen sobre la superficie de la placa, lo cual simula lo que ocurre normalmente cuando estamos trabajando en el laboratorio. Como las condiciones ambientales influyen en la sedimentación de los microorganismos es necesario que, cuando se realiza este método, las placas se expongan siempre en el mismo lugar y bajo las mismas condiciones para poder comparar los resultados obtenidos. CONTROL MICROBIOLÓGICO DE SUPERFICIES: El control microbiológico de superficie nos proporciona información sobre la cantidad de microorganismos presentes sobre una superficie, la cual puede ser un equipo, mesón, ropa, etc. II. OBJETIVO Conocer la metodología para el análisis microbiológico de superficies vivas e inertes. III. MATERIALES Y EQUIPOS Pipetero metálico Pipetas de 2 ml Pipetas de 10 ml 4 bolsas de plástico transparente 2 esponjas estériles Benzol

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Agua peptonada 0.1% Placas de agar bilis rojo violeta Placas de agar cuenta estándar Hisopos estériles. Guantes desechables Autoclave u Horno a 180°C Balanza digital Cuenta colonias Refrigerador Incubadora a 35°±2°C IV. PROCEDIMIENTO 4.1 SUPERFICIES VIVAS: MANOS SUCIAS a) Vaciar 100 ml de agua peptonada al 0.1 % en una bolsa de plástico nueva. b) Introducir y lavar las manos de la persona en la bolsa que contiene el agua peptonada al 0.1 %. c) Regresar el agua peptonada al frasco de dilución siendo esta la dilución 10-1 después realizar la dilución 10-2 en un tubo que contiene 9 ml de agua peptonada al 0.1 %. d) Sembrar por duplicado la dilución 10-2 para organismos mesofílicos y para organismos coliformes. e) Determinar organismos coliformes y organismos mesofílicos aerobios en UFC/cm2.

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4.2 SUPERFICIES VIVAS: MANOS LIMPIAS a) La misma persona ahora se lava las manos con jabón y agua de la llave, después se vuelve a lavar las manos en la bolsa de plástico que contiene 100 ml de agua peptonada al 0.1%. b) Regresar el agua peptonada al 0.1 % al frasco siendo esta la dilución 10-1. c) Sembrar por duplicado la dilución 10-1 para organismos mesofílicos y para organismo coliformes. d) Determinar organismos coliformes y organismos mesofílicos aerobios en UFC/cm2. 4.3 SUPERFICIES INERTES: SUPERFICIES SUCIAS a) Medir 25 X 25 cm2 de la superficie de la mesa. b) Limpiar el área con una esponja estéril humedecida con agua peptonada al 0.1 %. c) Lavar la esponja dentro de la bolsa que contiene 100 ml de agua peptonada al 0.1 %, el agua se regresa al frasco, siendo ésta la dilución 10-1 y realizar la dilución 10-2. d) Sembrar por duplicado la dilución 10-2 para organismos mesofílicos y para organismos coliformes. e) Determinar organismos coliformes y organismos mesofílicos aerobios en UFC/cm2. 4.4 SUPERFICIES INERTES: SUPERFICIES LIMPIAS a) Limpiar el área seleccionada con benzol, después limpiar con una esponja estéril humedecida con agua peptonada dejar secar y lavarla dentro de la bolsa que contiene 100 ml de agua peptonada al 0.1%. b) Regresar el agua peptonada al 0.1 % al frasco, siendo ésta la dilución 10-1.

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c) Sembrar por duplicado la dilución 10-1 para organismos mesofílicos y para organismos coliformes. d) Determinar organismos coliformes y organismos mesofílicos aerobios en UFC/cm2

V. BIBLIOGRAFIA 1. Luna Fontalvo, Jorge. Manual de prácticas de laboratorio de Microbiología. Editorial Unimagdalena.España.2012 2. Madigan Michael, Martinko John: Brock–Biología de los Microorganismos.10a Ed. Editorial Prentice Hall-Iberia. España 2004