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Escuela Normal Superior FEP Organización molecular y celular de la vida Práctica 2 Determinación de azúcares reductores por el método de Lane - Eynon Fundamento: Las muestras se someten a una hidrólisis ácida fuerte para desdoblar los almidones y obtener glucosa, la que tiene la propiedad de reducir al cobre de las soluciones alcalinas, según el método volumétrico de Lane y Eynon.

Reactivos Solución A Solución de sulfato de cobre pentahidratado (CuSO4•5 H20): Se disuelven 3.463 g en agua, hasta completar un volumen de 50 mI y se filtra a través de lana de vidrio o papel filtro. Solución B Solución alcalina de tartrato de sodio y potasio: 1. Se disuelven por separado 17.3 g de tartrato doble de sodio y potasio (Sal de Rochelle, K NaC4H406.4H20) y 5.0 g de hidróxido de sodio(NaOH) en agua 2. Se mezcla y se diluyen hasta completar un volumen de 50 ml, se deja reposar. 3. Filtrar a través de papel filtro. Solución patrón de sacarosa invertida al 1%. 1. Se pesa en balanza analítica 0.95 g de sacarosa, 2. Se añaden 0.5 mI de HC1 concentrado y se diluye con 10 ml de agua, se deja reposar 30 min a una temperatura entre 20 y 15° C. 3. Se afora con agua destilada a 100 mI. Esta solución es estable por un período de 3 ó 4 meses. 4. Se neutraliza una alícuota con NaOH 1N y se diluye a una concentración conocida, inmediatamente antes de usarse. Solución acuosa de azul de metileno al 0.2%. HCl concentrado Hidroxido de sodio, en escamas, 1:1 p/v y solución 1N

Procedimiento Titulación de la solución patron de sacarosa invertida 1. Se toman 10 ml. de la solución de sacarosa invertida previamente neutralizada y se aforan a 100 ml. Se colocan en una bureta. 2. Se deja caer la solución de sacarosa invertida a un matraz que contenga 5 ml de la solución A, 5 ml de la solución B y 50 ml. de agua en ebullición. 3. Antes de la total reducción del cobre Se añade 1 ml. de la solución de azul de metileno al 0.2% y se termina la titulación hasta la decoloración del indicador 4. Si se gastan menos de 15 o más de 50 ml de sacarosa se repite la operación para que el gasto quede comprendido en estos líimites. 5. Tíitulo: Multiplicar los mililitros gastados por mg/ml de la solución a titular. Muestra: 6. Colocar 5 a 10 g de la muestra en un matraz Erlen Meyer de 500 ml. añadir 150 ml. de agua y 25 de HCl concentrado. 7. Calentar de 60 a 75 min. 8. Enfriar y neutralizar. 9. Colocar el hidrolizado en un matraz aforado de 250 ml. Aforar con agua y filtrar para colocar en una bureta. 10. Realizar la titulación con este hidrolizado.

Expresión de resultados y reproducibilidad La fécula o almidón contenido en la muestra se calcula con la siguiente fórmula:

g de fécula o almidón en 100 g de muestra = (Título de la solución A+B) (250/ml de muestra)(100/g de muestra) (0.09) Donde: 0.09 = Factor de conversión de glucosa a almidón . La diferencia entre los valores de 3 determinaciones efectuadas inmediatamente una después de otra, sobre la misma muestra, por el mismo analista y con los mismos reactivos y aparatos, no debe exceder en 0.1 mg. En caso contrario, debe repetirse la determinación. El resultado final debe expresarse como el promedio de los 3 análisis.