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• Paula Andrea Villafañe Romero

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11. Accede al siguiente link http://biomodel.uah.es/lab/cromat/columna.htm es donde encontrarán un simulador de cromatografía, explorarlo y generar una discusión de resultados En la experiencia del simulador de cromatografía se conoció de que manera se pueden relacionar las proteinas con respecto a su exclusión molecular, intercambio iónico y afinidad con el fin de separar una muestra con componentes proteicos, se observó de la misma manera lo valores entregados de M r (masa molecular relativa) y pI (punto isoeléctrico), generando una idea de lo que podría suceder, es importante conocer que las proteinas disminuyen su nivel de solubilidad cuando su pI posee las mismas condiciones en el medio (pH), lo anterior se debe a aquellos iones dipolares que conforman a la proteina no presentan carga neta y conducen a la cristalización generando la llamada insolubilidad a ese pH, esto se puede encontrar esquematizado en el simulador cuando en el tampón de elución poseía un pH parecido, siendo esto que inhibe una eficaz cromatografía. Proteinas tales como la anhidrasa carbónica, ovalbúmina y aldolasa estuvieron sujetas a la matriz cromatográfica, cuando se tomó la llamada Sephacryl TM 300 la anhidrasa carbónica y ovalbúmina estuvieron en casi conjunto, donde fueron separadas por un pequeño volumen de eluyente, eso se observó en el volumen de elución (ml) que se encuentro en el eje x, en el eje dependiente de estos valores encontramos un A280 que simboliza la absorbancia A 280 nm que estima la concentración de las proteinas; por otro lado, para probar si esto pasaba en todas la pruebas se utilizó una nueva matriz cromatográfica denominada HiTrap Chelating HP, el resultado fue totalmete diferente, ya que no pudo separar las mezcla de proteinas, todo esto teniendo encuenta el mismo tampón de elución citrato con un pH= 5,1, por ende, se debe elegir un elemento que coincida en la busqueda de separación de proteinas. En el punto mas alto de la grafica representa la caida del compuesto separado, es de agregar que cuando no hay una separación hay una gran posibilidad de que sea causada por el pI y pH cuando sucede eso en laboratorios hacen un cambio de pH del solvente de manera progresiva de manera que varie el punto isoeléctrico y dejar fluir a las proteinas en la cromatografía

https://www.fbioyf.unr.edu.ar/evirtual/pluginfile.php/6799/mod_r esource/content/0/Separacion_de_biomoleculas.pdf http://biomodel.uah.es/lab/cromat/como-se-hizo.htm https://www.bioted.es/protocolos/PRINCIPIOS-CROMATOGRAFIAFILTRACION-GEL.pdf http://biomodel.uah.es/lab/cromat/columna.htm?es