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IDENTIFICACIO N DE LA LISTERIA

INTEGRANTES     

Aroni Lozada Katherine Morales Roca Yesenia Nuñez Casio Carlos Reyes Manrique Cintya Tineo Cruz Brenda

DOCENTE: Ing. Sonia Herrera CURSO: Microbiologia

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OBJETIVOS  Identificar la presencia de Listeria.  Conocer las características de la Listeria  Conocer los medios de cultivo que podemos utilizar.

IDENTIFICACION DE LA LISTERIA

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MARCO TEORICO Es una bacteria que se desarrolla intracelularmente y es causante de la Listeriosis. Es uno de los patógenos causante de infecciones alimentarias más violentos, con una tasa de mortalidad entre un 20 a 30%, más alta que casi todas las restantes toxicoinfecciones alimentarias.L. monocytogenes es un bacilo Gram positivo, pequeño (0,4 a 0,5 micrones de ancho x 0,5 a 1,2 de largo) no ramificado y anaerobio facultativo capaz de proliferar en un amplio rango de temperaturas (1 °C a 45 °C) y una elevada concentración de sal. Es catalasa positivo y no presenta cápsula ni espora. Tiene flagelos perítricos, gracias a los cuales presenta movilidad a 30 °C o menos, pero es inmóvil a 37 °C, temperatura a la cual sus flagelos se inactivan. Concepto Listeria monocytogenes recibe su nombre del cirujano inglés Joseph Lister(Listeria) y de su capacidad de que extractos de su membrana son capaces de estimular la producción — generar— monocitos (monocytogenes) en el conejo, aunque no en la enfermedad del ser humano. Caracteristicas: El género se encuentra definido por poseer un contenido de DNA G+C, aproximadamente de un 38% además en sumembrana celular tiene una pared celular de mureina, péptidoglucano que contiene ácido meso-diaminopimélico que se encuentra fijo a la membrana celular por el ácido teicoico y el ácido lipoteicoico presentes en la membrana celular. Puede ser aislada de diversos ambientes como suelo, agua fresca, aguas residuales y vegetación y puede llegar a infectar numerosos animales domésticos contaminando la vegetación y el suelo donde habitan. Es también un contaminante frecuente de los productos alimentarios, ya que es capaz de generar biopeliculas en alimentos que se encuentren en refrigeración, porque tiene la capacidad de crecer hasta a 4 °C. La infección por L. monocytogenes, en el contexto del embarazo, suele diagnosticarse de forma tardía, produciéndose un cuadro muy grave, llamado granulomatosis infantisepticum, llegando a provocar abortos. También se ha relacionado conMeningoencefalitis y meningitis especialmente en neonatos, ancianos e IDENTIFICACION DE LA LISTERIA

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inmunodeprimidos, así como bacteriemia en mujeres gestantes, inmunodeprimidos y neonatos (granulomatosis infanto-séptica). Patogenia L. monocytogenes es un patógeno facultativo intracelular que puede crecer en los macrófagos, las células epiteliales y losfibroblastos en cultivo. Tras la ingesta de alimentos contaminados, L. monocytogenes puede sobrevivir a la exposición aenzimas proteolíticas, ácido gástrico y sales biliares. Principalmente contiene una proteína denominada internalina la cual interactúa con el receptor de las células del hospedero para la adhesión celular, esta se denomina E-cadherina la cual induce la fagocitosis, siendo estas específicas para cada tejido. La presencia de internalinas facilita la entrada del microorganismo a las células. El organismo reacciona creando una especie de fagosoma con el fin de encapsular la bacteria pero esta produce listeriolisina O y fosfolipasas C que le permiten destruir el fagosoma hidrolizando los lípidos de su membrana. Esta listeriolisina está codificada por el gen hly. Al estar dentro del citosol L. monocytogenes utiliza una proteína de superficie denominada ActA la cual genera la polimerización intracelular de la actina.2 Estos filamentos se reorganizan en una larga cola que se extiende desde un solo extremo de la bacteria. Mediante los movimientos de la cola el microorganismo migra por el citoplasma hacia la membrana de la célula huésped. En la periferia se forman protrusiones (filópodos) que pueden penetrar en las células adyacentes y que permiten el ingreso de la bacteria. Esto explica la necesidad de una inmunidad mediada por células. Puesto que los microorganismos nunca son extracelulares, los anticuerpos humorales del huésped no serían efectivos

Identificación patológica L. monocytogenes se desarrolla muy bien en agar sangregenerando colonias grisáceas y presentando beta hemolisis. Es un bacilo catalasa positivo, móvil y se evidencia en medios de cultivo semisólido donde a los 25 °C el microorganismo forma una especie de sombrilla. Se desarrolla de manera adecuada en bilis, por lo que se utilizan medios inclinados con agar bilis esculina. Esta prueba consiste en determinar la capacidad que tiene L. monocytogenes de hidrolizar la esculina a esculetina y la glucosa en presencia de sales biliares. La esculetina generada reacciona con los iones de hierro que contiene el cloruro férrico en el medio y genera una coloración negra, siendo esta positiva. IDENTIFICACION DE LA LISTERIA

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L. monocytogenes presenta un metabolismo fermentativo al generar ácido a partir de la glucosa y por producir acetona, lo que conlleva a una reacción de Voges-Proskauer positiva y no fermenta la xilosa. La fermentación de estos azúcares se evidencian por la técnica de vogesproskauer, la cual consiste en identificar si L. monocytogenes genera ácidos y diacetilo ya que el medio contiene azúcares fermentables. Para ver la reacción se utilizan los reveladores alfa-naftol y KOH. Si la suspensión se torna color rosa la prueba es positiva.2 La prueba de CAMP es utilizada para la identificación de L. monocytogenes Consiste en sembrar en agar sangre una estría en forma horizontal de L. monocytogenes y una perpendicular a esta de S.aureus sin unirse entre sí. El resultado esperado será que L. monocytogenes genere el factor CAMP el cual produce un sinergismo con la beta lisina producida por Staphylococcus aureus sobre los eritrocitos generando una lisis de estos.

Tratamiento

Al ser la listeriosis una enfermedad relativamente rara en humanos, no hay estudios prospectivos y controlados que establezcan el mejor tratamiento antibiótico. Dado que la mayoría de los antibióticos son bacteriostáticos para Lysteria monocytogenes, actualmente se considera que las mejores opciones son las combinaciones de gentamicina conpenicilinas de espectro ampliado como la ampicilina.1 5 Se han descrito fallos terapéuticos con estos antibióticos, pero nunca se ha demostrado in vitro resistencia al compuesto β-lactámico utilizado. En el manejo de estas infecciones son de gran importancia el empleo de dosis altas y la duración adecuada del tratamiento, que deben individualizarse. En las enfermedades graves como la cerebritis o la granulomatosis infantiséptica, el inicio precoz del tratamiento es fundamental para el control de la infección. Estudios in vitro han demostrado sinergia de ampicilina y penicilina con aminoglucósidos. Esta asociación debe utilizarse en casos de granulomatosis infantiséptica o de sepsis neonatal. En aquellos pacientes conmeningoencefalitis pueden asociarse aminoglucósidos, administrados por vía intratecal, al tratamiento base de penicilina oampicilina. IDENTIFICACION DE LA LISTERIA

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La combinación de trimetoprim y sulfametoxazol se ha utilizado con éxito en pacientes alérgicos a penicilinas, considerándose en la actualidad la terapia alternativa en esta circunstancia. La duración apropiada del tratamiento tampoco está clara. Tras dos semanas de terapia se han descrito recurrencias en pacientes inmunodeprimidos. Parece conveniente, por tanto, prolongar la terapia entre tres y seis meses en estos casos. En general dos semanas parecen ser suficientes en bacteriemias mientras que en meningitis se deberían utilizar ciclos más largos.

Resistencia antibiótica Listeria es resistente a las penicilinas naturales (penicilina G, penicilina V), penicilinas resistentes a β-lactamasa (meticilina,nafcilina, isoxazoilpenicilina— oxacilina, cloxacilina, dicloxacilina—) y a todas las cefalosporinas. Pero es susceptible a las penicilinas de espectro ampliado.

Alternativas Otras alternativas son cotrimoxazol, tetraciclinas, carbapenémicos, entre otros.

eritromicina,

cloranfenicol,

rifampicina,

Igualmente, en agosto de 2006, la FDA (Food and Drug Administration) de Estados Unidos aprobó el uso de bacteriófagosen ciertas carnes con el fin de acabar con la bacteria Listeria monocytogenes.

Profilaxis Es necesario un control exhaustivo en todas las fases. En las empresas alimentarias se debe implantar un programa de autocontrol de los procesos según el Sistema APPCC: [cita requerida]

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En la granja hay que controlar el ensilado para que acidifique cuanto antes, porque en el medio ácido la bacteria se desarrolla muy mal. IDENTIFICACION DE LA LISTERIA

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Almacenar la leche a menos de 4 °C, para evitar el desarrollo microbiano.

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Durante el procesado de los alimentos se debe evitar la contaminación cruzada, evitando que contacten los alimentos ya cocinados con los crudos.

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El trabajador que tenga síntomas de padecer la enfermedad debe abstenerse de manipular alimentos.

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Se deben cocinar los alimentos a temperaturas elevadas y durante el tiempo suficiente, así mismo evitar consumir alimentos crudos.1

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Los vegetales se deben lavar y desinfectar si se van a consumir crudos.

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Es de suma importancia su control en la industria cárnica, evitando contaminaciones cruzadas de los canales con materias fecales durante el sacrificio de los animales.

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La bacteria crece con relativa facilidad a temperaturas bajas, por ello es importante que los equipos de refrigeración funcionen dentro de unos rangos de temperatura menores de 4 °C.

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MATERIALES Y REACTIVOS -

Solución salina al 8% 25g de queso fresco Agua destilada Agar Base Sangre Placas Petri Pipetas Vaso Probeta Mechero

PARTE EXPERIMENTAL

1. Primero colocamos el Agar Base Sangre en un vaso precipitado de 250ml que para someterlo a calor por medio de un mechero y así fusionar al agar.

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2. Luego preparamos la solución salina al 0,08% 

10 gr de sal en agua destilada

3. Pesamos 25g de muestra que es QUESO.

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4. A los 10gr de la muestra, agregamos 90ml de solución salina (concentración de la solución = 10-1 g/ml), luego de ésta mezcla separamos 1ml en un tubo y agregamos 9ml de solución salina (concentración de la nueva solución = 10-2 g/ml).

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5. De la solución de 10-2 g/ml, tomamos 1ml, colocamos en la caja Petri y adicionamos 20ml del medio líquido (agar Base Sangre) y lo dejamos enfriar.

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6. Colocamos a la incubadora a 37o C por un tiempo de 2 o 3 días.

7. Después sacamos nuestra muestra de la incubadora y contamos colonias.

}

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Conclusiones  La inocuidad de las muestras no se ve comprometida en cuanto a los resultados

obtenidos, ya que si cumplen con todos los parámetros microbiológicos establecidos por la R.M 591-2008 1.I.8  En el recuento de Listeria de la muestra, esta en el limite de lo recomendado por

la R.M 591-2008 1.I.8. Por lo tanto, si cumplen con la inocuidad y al cumplir con ésta, si están aptas para su consumo.

INFORME DE ENSAYO Análisis:

Microbiológico de queso fresco

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Lugar : Supermercado Metro Breña-Av. Alfonso Ugarte 15082 intersección con Av. Venezuela (Lima) Fecha de muestreo: Ejecución:

06 / 05 / 2015 06 / 05 /2015

Resultados microbiológicos

Microorganismo

Queso fresco

Limite permisible

Listeria monocytogenes

Ausencia/25g

Ausencia/25g

Listeria monocytogenes

El producto analizado es apto para el consumo

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