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UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERÍA FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA Y TEXTIL AREA ACADÉMICA DE INGENIERÍA QUÍMICA

INFORME N° 9 y 10 LABORATORIO DE BIOQUÍMICA Y MICROBIOLOGÍA PI-721 A TITULO: “MEDIOS DE CULTIVOS”

PROFESORA DE LABORATORIO:  DRA. JESSICA NIETO JUAREZ ALUMNOS:  Sanchez Vasquez Ruth Evelyn  Mamani Fuentes Rivera Lesly Rubi

PERIODO ACADEMICO: 2017-II REALIZACION DE PRÁCTICA:24/11/2017 ENTREGA DE PRÁCTICA: 30/11/2017

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NOTA

INDICE OBJETIVOS ................................................................................................................................. 3 FUNDAMENTO TEÓRICO......................................................................................................... 3 OBSERVACIONES .................................................................................................................. 4 DISCUSIÓN DE RESULTADOS ................................................................................................ 5 CONCLUSIONES ........................................................................................................................ 7 CUESTIONARIO ......................................................................................................................... 7 BIBLIOGRAFÍA........................................................................................................................... 9

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CULTIVOS OBJETIVOS  Familiarizarse con la esterilización, preparación y conservación de medios de cultivo.  En base al cultivo hecho identificar las posibles bacterias y hongos presentes en las placas. FUNDAMENTO TEÓRICO Medios de cultivo Un medio de cultivo es un sustrato o una solución de nutrientes que permite el desarrollo de microorganismos. En las condiciones de laboratorio para realizar un cultivo, se debe sembrar sobre el medio de cultivo elegido las muestras en las que los microorganismos van a crecer y multiplicarse para dar colonias. Los microorganismos son los seres más abundantes de la tierra, pueden vivir en condiciones extremas de pH, temperatura y tensión de oxígeno, colonizando una amplia diversidad de nichos ecológicos. Entre los requerimientos más importantes para su desarrollo están el carbono, el oxígeno, nitrógeno, dióxido de carbono e hidrógeno. Muchas bacterias sin embargo necesitan del aporte extra de factores de crecimiento específicos en forma de suero, sangre y extracto de levadura entre otros. La mayoría de las bacterias patógenas requieren nutrientes complejos similares en composición a los líquidos orgánicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos medios de cultivo es una infusión de extractos de carne y Peptona a la que se añadirán otros ingredientes. (Aires, 2017) El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparación de medios de cultivo. Con mínimas excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en él. Clasificación

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PARTE EXPERIMENTAL OBSERVACIONES Observaciones del sustrato   

Se utilizaron dos sustratos diferentes para hongos y bacterias. Sustrato potato es especial para hongos, presenta granos más grandes. Sustrato agar es especial para cultivar bacterias, presenta granos más pequeños.

Observaciones del cultivo

Pan con hongo

A simple vista se observó la proliferación de un hongo verde negruzco a lo largo del camino de siembra, con algunos puntos negros pequeños que representan la contaminación del cultivo.

Mucosa de la boca

Se observan puntos de color amarillo pálido dispersos en toda el cultivo.

Billete y moneda

Se observan diferentes tipos de cultivos en esta placa, los cuales son puntos de color amarillo brillante, de color blanco otros de naranja intenso; así como también se observa una parte donde hay un color negro que representa contaminación en el cultivo.

Semilla

Para el caso de la semilla, el hongo creció en forma radial y presenta una textura de algodón. También se observa contaminación de color negro.

Ilustración 2 Semilla de trigo en sustrato potato

Ilustración 4 Bacterias en el billete y moneda en sustrato agar

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Ilustración 1 Pan con hongo en sustrato potato

Ilustración 3. Bacterias de la mucosa de la boca en sustrato agar.

DISCUSIÓN DE RESULTADOS Pan con hongo  Para este caso se puede identificar fácilmente el tipo de hongo que crece en el pan, el cuál es Rhizopus nigricans.  Rhizopus nigricans pertenece al género de cigomicetos, hongos filamentosos que por lo general viven en el suelo y se alimentan de materia vegetal o animal en descomposición. Existen Rhizopus parientes de este hongo que afectan a plantas y frutos causando una pudrición blanda y acuosa. Características:  Se encuentran en el suelo, el compost y, principalmente, en vegetales en descomposición; así como también en el pan.  Pueden reproducirse de forma asexual y sexual.  En el ser humano se han registrado enfermedades causadas por una alta concentración de esporas de algunos Rhizopus.  Este hongo puede crecer tanto como color negro como tener algunas partes verdes oscuras.  Rhizopus forma colonias de crecimiento rápido que cubren prácticamente toda la superficie del sustrato afectado en aproximadamente tres días, a una temperatura promedio de 25 °C. (Ceibal, 2017) Semilla de trigo Encontramos un tipo de hongo que cumple con las características obtenidas: Erysiphe graminis Características del Erysiphe graminis  los primeros síntomas visibles de esta enfermedad son colonias de micelios y conidios que semejan parches de pelusa o polvillo de color blanco a gris pálido, sobre el anverso de las hojas y vainas florales (especialmente en las hojas de más abajo), a veces en las espigas.  El tejido fungoso más antiguo es gris amarillento. Este material fungoso superficial se quita fácilmente frotándolo con los dedos.  El tejido del huésped situado bajo el material fungoso se torna c1orótico o necrótico y, cuando la infección es grave, las hojas mueren.  Con el tiempo se desarrollan, en los micelios, estructuras de fructificación negras y esféricas (cleistotecios) observables a simple vista. (Prescott, 1995)

Ilustración 5. Erysiphe graminis

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Mucosa de la boca La bacteria en mayor cantidad encontrada en el cultivo fue la Streptococcus mutans. Características  Es una bacteria Gram positiva, anaerobia facultativa que se encuentra normalmente en la cavidad bucal humana, formando parte de la placa dental o biofilm dental.  Se asocia al inicio y desarrollo de la caries dental.  Es neutrofilo porque vive en medio con pH neutro, acidogénico por metabolizar los azúcares a ácidos y acidúrico por sintetizar ácidos a pesar de encontrarse en un medio de tales condiciones.  Metaboliza la sacarosa para producir polisacáridos extracelulares (sustancia laxa que facilita su adhesión a las caras libres de las piezas dentarias) e intracelulares (metabolismo energético).  Presenta un color amarillo es un streptococo pionero.

Ilustración 6 Streptococo mutans

Billete y moneda Aquí identificamos tres tipos de bacterias: Estafilococo blanco o albus Características:  es una bacteria de la familia de los estafilococos.  Está presente de forma natural en la piel humana (casi el 100% de los individuos son portadores) en la que forma parte de la flora natural.  En caso de déficit inmunitario o de implantación de un material (prótesis quirúrgica, cardíaca,...) puede volverse peligroso y provocar infecciones oportunistas. Micrococcus luteus Características:  Es una especie de bacteria gram positiva. Se trata de una bacteria saprófita, de la familia de las Micrococcaceae.  Posee una morfología de coco (esférico) y una agrupación en tétradas.  Es ureasa y catalasa positiva, lo que significa que tiene la capacidad de degradar la urea y el peróxido de hidrógeno.  Micrococcus luteus es una bacteria aerobia obligada (no puede vivir sin oxígeno), que puede ser encontrada en la tierra, polvo, agua y aire, formando parte de la microbiota bacteriana de la piel de los mamíferos.

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Serratia marcescens Características:  es un bacilo gramnegativo de la familia Enterobacteriaceae.  Puede ser peligroso para el hombre, ya que a veces es patógena, como causa de infecciones nosocomiales y urinarias.  Es un bacilo móvil que puede crecer a una temperatura que oscila entre 3.5-40 °C, en niveles de pH que varían entre 5 y 9.  El ambiente en el cual predomina es en condiciones húmedas, por esa razón es posible encontrarla creciendo en los baños y las alcantarillas, aunque puede ser eliminada mediante la aplicación de lejía y otros desinfectantes.

Ilustración 7 Serratia marcescens

CONCLUSIONES  El hongo hallado en pan es el Rhizopus nigricans.  El cultivo que crece alrededor de la semilla puede ser el hongo Erysiphe graminis ya que cumple con las características.  La bacteria hallada en mayor cantidad en el cultivo de la mucosa bucal es el Streptococcus mutans.  Las bacterias halladas en el billete y la moneda son Serratia marcescens (naranja), Micrococcus luteus (amarillo) y Estafilococo albus. CUESTIONARIO 1. Qué es el agar y cómo lo obtienen? El agar-agar es un extracto de color blanco-crema que se obtiene de distintos tipos de algas rojas, como por ejemplo Gelidium o Gracilaria, y aunque principalmente se recogen en el Océano Atlántico, también las podemos encontrar en el Mar Cantábrico y Océano Pacífico. Los medios de agar selectivos son utilizados para aplicar una presión selectiva a los organismos que crecen en ellos.

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2. Cuál es la composición del medio de cultivo de AN y PDA?, ¿cuál es su función? y qué clases de (micro)organismos se pueden identificar? PDA  El Agar Papa Dextrosa es utilizado para el cultivo de hongos. Es un medio de propósito general para levaduras y mohos que puede ser suplementado con ácidos o antibióticos para inhibir el crecimiento bacteriano.  El Agar Papa Dextrosa (PDA) puede ser usado para el cultivo de levaduras y mohos clínicamente significativos.  El Agar Papa Dextrosa está compuesto por Infusión de Papa deshidratada y Dextrosa que fomentan el crecimiento exuberante de los hongos. El agar es adicionado como agente solidificante. Muchos procedimientos estándares usan una cantidad específica de ácido tartárico estéril (10%) para reducir el pH de este medio a 3,5  0.1, y así inhibir el crecimiento bacteriano. No recalentar el medio acidificado, el calentamiento en estado ácido hidrolizará el agar. AN 

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El agar nutritivo es un medio de cultivo usado normalmente como rutina para todo tipo de bacteria. Es muy útil porque permanece sólido incluso a relativamente altas temperaturas. Además, el crecimiento bacteriano en este agar lo hace en la superficie, por lo que se distinguen mejor las colonias pequeñas. En un caldo de nutrientes, la bacteria crece en el líquido, y aparece como una sustancia espesa, con colonias difícilmente observables. El agar nutritivo contiene normalmente: 0,5% de peptona; 0,3% de extracto de carne/extracto de levadura; 1,5% de agar; 0,5% de cloruro de sodio; agua destilada; pH casi neutro (6,8) a 25 °C.

3. ¿Por qué el medio de cultivo AN, es un medio de cultivo de uso general para las bacterias?, Proponga que sustancias químicas agregaría para hacer que el medio sea selectivo para bacterias gram negativas? Esto es debido a que las peptonas, los carbonos y nitrógenos presentes en el agar nutritivo son nutrientes esenciales para el crecimiento de microroganismos en general. Si tuviera que identificar bacterias gram negativas como por ejemplo del tipo gonococos y meningococos utilizaría penicilina. 4. De ejemplos y describa la aplicación industrial de algunas bacterias y hongos 

Fermentaciones lácticas: fabricación del queso: La elaboración del queso y otros productos lácteos, como yogurth, cuajada y requesón, se debe fundamentalmente a las bacterias lácticas (Lactobacillus, Streptococus y Leuconostoc) , que se desarrollan en la leche. Hidrolizan el azúcar de la leche, la lactosa, en glucosa; por fermentación, la glucosa se degrada liberando energía (los 2 ATP de la glucolisis) y como producto final se obtiene ácido láctico.

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Fermentaciones alcohólicas: Se basan en la acción de levaduras (hongos unicelulares) sobre materiales ricos en glucosa. Estas levaduras degradan la glucosa a alcohol etílico, liberando CO2. Esta degradación proporciona a las levaduras energía (los 2 ATP de la glucosilis) Fabricación del vino El vino es un producto que se obtiene de la fermentación alcohólica del zumo de uva, realizada por levaduras (Sacharomyces ellipsoideus) que están en la superficie de las uvas. La elaboración del vino implica los siguientes procesos: En la industria farmaceútica: Ampicilina: Bacterias gram +

y gram -. Interfiere síntesis de pared celular.

Bacitracina: Bacterias gram +. Interfiere síntesis de pared celular. Cefalosporina C: Bacterias gram +. Interfiere síntesis de pared celular. Penicilina G: Bacterias gram +.Interfiere síntesis de pared celular. Cloranfenicol: Amplio espectro. Interfiere síntesis de proteínas. Tetraciclina: Amplio espectro. Interfiere síntesis de proteínas. Estreptomicina: Bacterias gram +

y gram -. Interfiere síntesis de proteínas.

Eritromicina: Bacterias gram +

y Rickettsias. Interfiere síntesis de proteínas.

BIBLIOGRAFÍA Universidad de Buenos (10 de 11 de 2017). microinmuno. Obtenido de http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioMedios.htm Ceibal, B. P. (10 de 11 de 2017). Reino de los hongos. Obtenido de http://contenidos.ceibal.edu.uy/fichas_educativas/_pdf/ciencias-naturales/reino-de-loshongos/005-hongo-negro-del-pan.pdf Prescott, J. (1995). Enfermedades y plagas del trigo. México: CIMMYT. Conoce cuántas bacterias llegan al organismo por medio de las manos https://diariolibresv.com/tendencias/2017/05/23/conoce-cuantas-bacterias-llegan-alorganismo-por-medio-de-las-manos/ Convenio de diversidad biológica. (1992)

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