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BETA ACU-COLOR Principio Gonadotropina coriónica humana (hCG) es una hormona secretada por la placenta en desarrollo poco después de la fecundación. En un embarazo normal. hCG se puede detectar en general, como a los 7 días después de la concepción (1-4). Se duplica cada 1,3 a 2 días. La primera vez que perdieron el periodo menstrual, la concentración de hCG es de unos 100 mlU / ml, se ve al final del primer trimestre. La aparición de hCG después de la concepción y su posterior aumento en la concentración durante el crecimiento gestacional temprano lo convierten en un excelente marcador para la detección temprana del embarazo. El siguiente gráfico muestra la curva normal de excreción de hCG en el embarazo. Los niveles elevados de hCGcomparables a los observados al inicio del embarazo también puede estar asociada con neoplasia trofoblástica o notrofoblásticas (6-7), como mola hidatidiforme, coriocarcinoma, por lo tanto, la posibilidad de enfermedad, se debe descartar antes de que un resultado positivo de hCG es considerados para el diagnóstico de embarazo. El BETA ACU-COLOR-es un inmunoensayo enzimático sándwich (8-9) para la determinación de la gonadotropina coriónica humana en la orina o el suero. El método emplea una combinación única de anticuerpos monoclonales y policlonales para identificar selectivamente hCG en orina / suero con un alto grado de sensibilidad en menos de 8 minutos, los niveles elevados de hCG tan poco como 25 mlU / ml puede ser detectado. La especificidad inmunológica de la prueba prácticamente elimina la interferencia cruzada de la relatividad de las hormonas glicoproteína estructuralmente relacionados hFSH, hLH y TSH a niveles fisiológicos. Muestra del paciente se le permite reaccionar con el conjugado enzimático de anticuerpos y los anticuerpos en la fase sólida de forma simultánea en la presencia de hCG, un anticuerpo-anticuerpo-enzima compleja que se forman en la superficie del pocillo de microtitulación. Después de la enzima conjugado no unido se elimina mediante lavado con chorro de agua del grifo, el pozo se incubaron con el sustrato de los reactivos. El desarrollo del color azul en el pozo indica la presencia de hCG.

Comparando la intensidad del color de las muestras de pacientes con la de la siempre sabe de referencia, la cantidad de hCG puede ser visualmente estimado en mayor o menor que 25mlU/ml. Reactivos 1. Conjugado enzimático contiene peróxido de hidrogeno anticuerpo monoclonal de ratónperoxidasa estabilizador de proteínas y 0,02% de timerosal. 2. Un reactivo de sustrato: Contiene peróxido de hidrogeno y el estabilizador. 3. Sustrato reactivo B: contiene cromógeno de sustrato. 4. HCG estándar-25 mlU/ml: contiene 25 mUI/ml hCG (2da IS) y 0,02% de timerosal. (Opcional). 5. HCG estándar-50 mlU/ml: Con el 50 mUI/ml hCG (2da IS) y el 0,02% de timerosal (opcional). 6. De referencia positiva (HCG-100 estándar mlU/ml): contiene 100 mUI/ml hCG (ES 2da) y 0,02% de timerosal. 7. Referencia negativa: Contiene peróxido de hidrogeno la orina negativo y el 0,02% de timerosal. 8. Pocillos de microtitulación: Contiene peróxido de hidrogeno anticuerpos policlonales (IgG) dirigidos contra hCG. Instrucciones para Conservación 1. Almacenar los reactivos a la temperatura del refrigerador (2° a 8°C) cuando no se utiliza NO CONGELAR. 2. Lleve los reactivos y muestras a temperatura ambiente (20° a 25°C) antes de la prueba. Precauciones 1. No agregue Azida de Sodio a las muestras como conservante, ya que inhibe la actividad enzimática. 2. No mezcle los reactivos de lotes diferentes y no utilizar los componentes del kit después de la fecha de vencimiento. 3. No intercambie las tapas de botellas. 4. No exponga el reactivo sustrato B a la luz fuerte durante el almacenamiento o blanco en uso. Recaudación de Muestra

La muestra debe recogerse en un recipiente limpio y seco, ya sea de plástico o de vidrio, sin conservantes muestra recogida en cualquier momento se puede utilizar. Sin embargo, la orina de la mañana por lo general contiene la mayor concentración de la hormona. Todas las muestras pueden ser refrigeradas (2° a 8°C) y se almacena hasta 72 horas antes del ensayo. Si las muestras son refrigeradas, deben alcanzar la temperatura ambiente antes que los especímenes de prueba presenten partículas visibles, se debe filtrar, se centrifuga y se deja reposar y limpia obtenida para la prueba. No hay una preparación especial de la muestra del paciente se requiere. Aditivos tales como azida de sodio se debe evitar estudios limitado de la muestra indicó que la muestra de plasma preparado a partir de EDTA se puede utilizar en lugar de suero. Suero no se vaya a analizar inmediatamente almacenados en un refrigerador o un congelador llevar estas muestras a temperatura ambiente antes de la prueba NO congelar y descongelar repetidamente. Material Previsto 1. Conjugado enzimático 2. Reactivos sustrato A 3. Reactivos sustrato B 4. HCG I. Standard 25 mlU/ml (sólo para cuatro kit estándar) 5. HCG II Standard. 50 mUI/ml (sólo para cuatro kit estándar) 6. HCG Standard 100 mUI/ml (referencia positiva) 7. referencia negativa 8. Micro título de pozos 9. Las pipetas desechables 10. Micro título titular Bueno Material No Previsto 1. Contenedores de recolección de muestras 2. Temporizador 3. Agua corriente del grifo 4. Toallas de papel absorbente Procedimiento de Prueba Todos los reactivos y muestras deben estar a temperatura ambiente y se mezcla a fondo antes de comenzar la prueba. A. Prueba de ELISA cualitativa

1. Lugar pocillos de microtitulación para probar en el soporte. 2. Depositar 1 gota (50ul) de muestra del paciente y de una gota (50ul) de referencia hCG estándar y negativo, que se desea, en el etiquetado adecuadamente pocillos de microtitulación. Use una pipeta desechable por separado para cada muestra. 3. Añadir 1 gota de conjugado enzimático en cada pocillo. 4. Incubar 3 minutos a temperatura ambiente. 5. Eliminar el contenido accionando el titular de microtitulación y en el fregadero, seguido de un enjuague los pozos 5 veces con agua corriente del grifo (o agua destilada). Nota: Evite también a la contaminación y de exceso de agua durante el primer enjuague. La separación de los pozos en el titular y sería de ayuda. 6. Y 1 gota de reactivo de sustrato A y 1 gota de reactivo sustrato B en cada pocillo y se incuban a temperatura ambiente durante 2 minutos. Comparar el color desarrollado en los pozos de muestras con la de los pozos de referencia positiva en contra de un tiempo de fondo. Lea el resultado en 5 minutos. Nota: a. Dependiendo de la concentración de hCG en la muestra, el color puede aparecer de forma instantánea b. Incubación del reactivo de sustrato más allá de 5 minutos puede provocar un leve matiz de azul y mucho menos intenso que el de la referencia positiva de los resultados negativos en 5 minutos. Esto aún debe ser considerado negativa. Interpretación de Resultados 1. Positivo: Los pozos mostrando color azul indican la presencia de los resultados de hCG, o positivo. 2. Negativo: Los pozos que no muestran el color de 2 a 5 minutos (paso 7) indican que no detectan cantidad de hCG en la muestra. Un ligero tinte azulado, mucho más ligero que la referencia positiva así, puede resultar de lavado insuficiente y debe ser considerado

negativo. Si la muestra del paciente muestra un resultado negativo, pero se sospecha de embarazo, la prueba debe repetirse con una nueva muestra obtenida 2-3 días más tarde. B. Procedimiento de lectura cuantitativa Para ejecutar una curva estándar, prueba de hCG normas incluidas en el kit el mismo método que el de sus muestras. Siguiendo el paso 6 en A. PRUEBAS DE ELISA CUALITATIVA, si un lector de microtitulación está disponible para su lectura cuantitativa a 450 nm, proceder de inmediato a los dos minutos de incubación. 1. Rápidamente agregar la solución de 50ul vaciar el recipiente (HCL 1N, no incluido) en cada pozo incluyendo su muestra de la prueba, todas las normas de hCG y de referencia negativo. 2. Registrar las densidades ópticas (DO) a una longitud de onda de 450nm de cada pocillo utilizando un lector de microtiter. 3. Calcular la concentración de hCG de la curva estándar.

Los hombres sanos y mujeres sanas no embarazadas no tienen hCG detectan probado por BETA ACUCOLOR. El nivel de hCG de 25mlU/ml se puede llegar en la primera falta del período menstrual. Los niveles de GCH pico de aproximadamente 8 semanas después del último período menstrual y el embarazo. Tras el parto, los niveles de hCG decrecen rápidamente y regresan a la normalidad en cuestión de días después del parto. Sensibilidad y Especificidad La sensibilidad de la BETA ACU-COLOR se ha fijado en 12.5mlU/ml. La Norma 12.5mlU/ml hCG (calibrado a la 2da norma internacional) fue diseñado como el punto de corte para la prueba ya que las concentraciones de hCG en este rango de general, logra la concepción semana después de la 2da. Especificidad de la BETA ACU-COLOR se determinó a partir de estudios de reacción cruzada con cantidades conocidas de hormona luteinizante (hLH). Hormona folículo estimulante (hFSH) y hormona estimulante del tiroides (TSH) 500mlU/ml hLH, hFSH 1000mlU/ml y hTSH 1000mlU/ml todas dan resultados negativos a la prueba.

Límites del procedimiento 1. Una serie de causas distintas del embarazo, incluyendo enfermedad trofoblástica y ciertos neoplasmas no trofoblásticos causan niveles elevados de hCG. Estos resultados del diagnóstico se deben tomar en consideración en su caso a la evidencia clínica. 2. Cuando una muestra de orina es muy diluida (es decir, la gravedad específica baja), no puede contener un nivel representativo de la hCG. Si el embarazo se sigue sospechando una orina de la mañana debe ser obtenida 3. La exposición directa de la luz solar prolongada puede causar la activación espuria del cromógeno. Por esta razón, el temor no debe realizarse ni leer con luz solar brillante. 4. Al igual que con todas las pruebas de diagnóstico, un diagnóstico clínico definitivo no debe basarse en los resultados de un ensayo, sino que sólo debe ser realizada por el médico después de todo, los hallazgos clínicos y de laboratorio han sido evaluadas. Características del Procedimiento

Precisión BETA ACU-color muestra el 99,4% de acuerdo con los resultados obtenidos por el uso de otras pruebas inmunológicas en el embarazo calificado, las condiciones reales de clínica. Las muestras de orina de los cinco conocidos no embarazadas que se enriquecieron con la hCG para la concentración de 0, 40,400 mlU / ml. Un total de 75 de estas muestras fueron etiquetadas ciegos y probados con BETA ACU-COLOR. Prueba de interferencia La sustancia se agregaron los siguientes en 12.5mlU/ml hCG orina negativas de pinchos. Ninguna de las sustancias en una concentración a prueba interfirió en el ensayo. La Oficina de Biología ha pedido a todos los fabricantes de productos de prueba de embarazo para incluir la siguiente declaración, para su información. Falsos positivos y falsos embarazos biológicos e inmunológicos han sido reportados en las pruebas o muestras de las personas que toman una variedad de drogas. Las reacciones falsas pueden estar relacionados con el donante y las drogas, la medida de

lo posible, lo mejor es poner a prueba las muestras de los donantes que no están tomando medicamentos.