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Practica Nª5 Digestión enzimática del almidón NOMBRE: Reyes Paredes, Marjorie

GRUPO: 2-2

En cada tubo de ensayo se colocaron las medidas correspondientes de sustancias como muestra el cuadro: TUBO Nº ALMIDON 1%; ml BUFFER FOSFATO pH 6.8:ml HCL O,3N : ml CLNa 0,9%: ml Agua dest.:ml Baño María 37º x 5´ Amilasa Salival: ml

1 2.0 1.0 3.0 -

2 2.0 1.0 2.4 -

3 2.0 1.0 2.4

4 2.0 3.4 -

-

0.6

0.6

0.6

Luego mezclamos e incubamos en Baño María 37°C x 20’ Obtuvimos como resultados:  





Tubo 1: No se produce hidrólisis por no hay enzima. Tubo 2: Si hay hidrolisis porque hubo enzima y la presencia de un activador (ClNa) y un buen medio. Tubo 3: Hay menor hidrolisis porque hubo agua destilada en vez del activador de la amilasa salival (cloruro de sodio). Tubo 4: No hay hidrolisis ya que no se encuentra pH adecuado por la presencia de HCl que acidifica el medio y esto inactiva la amilasa salival que trabaja en un pH alcalino.

A. DETERMINACION EL SUSTRATO: TUBOS Nº DIGERIDO DEL TUBO 1: ml DIGERIDO DEL TUBO 2: ml DIGERIDO DEL TUBO 3: ml DIGERIDO DEL TUBO 4: ml HCL 0.05N : ml Sol. de Lugol: ml Dejar en reposo por 15 minutos. (660nm)

5 6 7 8 0.5 0.5 0.5 0.5 5 5 5 5 0.5 0.5 0.5 0.5 Leer al fotocolorímetro con filtro rojo

TOMANDO EN CUENTA Almidón + lugol  Azul Almidón + enzima + lugol Incolora







Tubo 5: Ya que el tubo 1 no hubo hidrolisis porque no había enzima, entonces todavía persiste el almidón y al mezclarse con la solución del lugol se torna color azul precisamente por la presencia del almidón Tubo 6: En el tubo 2 si hubo hidrolisis total porque se dieron las condiciones óptimas entonces al no encontrar el almidón que pueda reaccionar con la solución del lugol, se obtiene una muestra incolora. Tubo 7: En el tubo 3 observamos que hubo una hidrolisis parcial porque no hubo activador (cloruro de sodio) por lo que la mezcla se vio rojiza. Tubo 8: En el tubo 4 no hubo hidrolisis por la presencia de HCl, entonces el almidón persiste y reacciona con la solución de lugol tornandose azul oscuro.

B. DETERMINACION DEL PRODUCTO TUBOS DIGERIDO DEL TUBO 1: ml DIGERIDO DEL TUBO 2: ml DIGERIDO DEL TUBO 3: ml DIGERIDO DEL TUBO 4: ml SOLUCION DE GLUCOSA 1%: ml SOLUCION BENEDICT : ml

9 0.5 2

10 0.5 2

11 0.5 2

12 0.5 2

13 0.5 2

Mezclar, Incubar en Baño María a 100°C x 5’ y enfriar en agua helada e interpretar. 









Tubo 9: Al no haber hidrólisis en el tubo 1 porque no había presencia de enzima amilasa en consecuencia no hubo producto y como el almidón es una agente reductor, por lo tanto no hay reacción con Benedict y se mantiene la coloración turquesa inicial. Tubo 10: Aquí se encuentra el producto porque hubo hidrolisis gracias a la enzima y además porque presenta el activador ClNa por ello el almidón se degrada al reaccionar con Benedict obteniéndose un color azul verdoso y con un precipitado que se va tornando color rojo ladrillo en la base. Tubo 11: Se encuentra menor cantidad de producto porque no hay presencia del activador ClNa por lo tanto no ha ocurrido una hidrolisis total como en el caso anterior; en consecuencia se obtiene cierta cantidad de producto pero mínima obteniéndose un color azul verdoso con un precipitado color rojo ladrillo en la base. Tubo 12: Al no haber hidrólisis en el tubo 4 porque el pH no fue óptimo en consecuencia no hubo producto y como el almidón es una agente reductor, por lo tanto no hay reacción con Benedict y se mantiene la coloración turquesa inicial. Tubo 13: Al mezclarse 0.5 mL de solución de glucosa 1% con 2 mL de solución de Benedicct se observa un precipitado rojo ladrillo en mayor proporción del tubo 10 y 11 la presencia de glucosa.

1. Explique, cuales son las condiciones óptimas para una hidrólisis enzimática del almidón soluble.    

Un pH óptimo alcalino, ya que a esa condición trabajó adecuadamente la enzima, a diferencia de la pepsina que era a un pH ácido. Presencia de activador ClNa ya que sin su presencia no se produciría la hidrolisis. Presencia de amilasa salival ya que es la que la va a hidrolizar la sustancia. Una adecuada temperatura (37°) ya que el incremento de temperatura auenta el número de colisiones y por lo tanto la actividad enzimática.

2. Interprete la reacción de Benedict. Esta reacción es específica para azucares reductores libres como lo es la lactosa, glucosa, maltosa en soluciones alcalinas, pueden reducir Cu+2 que tiene color azul, el cual precipita la solución alcalina como Cu2O de color rojo naranja. La coloración desprenderá de la concentración del óxido de cobre a su vez de la reducción del cobre.