Universidad de las Fuerzas Armadas ESPE Departamento Ciencias de la Vida y la Agricultura Carrer
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Universidad de las Fuerzas Armadas ESPE Departamento Ciencias de la Vida y la Agricultura Carrera de Biotecnología Laboratorio de Biología Vegetal I Práctica N° 1
NRC:4397
Tema: Citología e histología vegetal Integrantes: Jinez Ivonne Estefanía Manzano Jhon Eduardo Márquez Milton Paul
Marco teórico: En cada planta y en cada estructura diferente que se obtenga de una muestra podemos encontrar células vegetales de diferente funcionalidad o que tienen características que difieren de otras pero lo que les hace comunes son una serie de características estructurales y morfológicas. La primera característica que hace diferenciar del resto de células es su pared celular y según la Universidad de los Andes de Venezuela, (2016) es que todas las células vegetales poseen pared celular que las recubre en el exterior y a su vez limita con las células de sus alrededores y la constitución depende la muestra obtenida, del tejido o de la especie que se observa. La Universidad Nacional de Rosario (2011) acota que en una célula vegetal la pared primaria es la que más diferencia a la unidad mientras que la pared secundaria es la que marca el grosor y es la que más podemos observar en el laboratorio ya que con facilidad se distingue y es porque esta capa crece hasta que la planta llega a su madurez. (La Universidad Nacional de Rosario, 2011) Explica que las células que están presenten en tejidos vegetales no solo son vivas sino que también incluyen a varias células muertas que tienen la funcionalidad de sostén y de protección para estructuras internas como es el caso de las células que se agrupan para formar la esclerénquima la cual está presente en la corteza de los árboles, en la cáscara de la pera, Pyrus communis, o de la yuca, Manihot esculenta. Los reactivos o colorantes que se usan en la identificación de varios orgánulos, células o tejidos sirven para observar con mayor enfoque cada uno de los o simplemente para la distinción de otros para ayudar al estudio detallado de algún en específico. Una de las soluciones que se usa con frecuencia es el agua destilada ya que ella permite que la muestra quede fija y tenga un contraste acuoso. Otro reactivo que es muy usado en laboratorios o prácticas en es la safranina que también es conocido por el nombre dimetil safranina o rojo básico 2 (Aguirre, 2012). La (Facultad de Biología Universidad de Vigo España, 2016) sostiene que la safranina es indispensable a la hora de una diferenciación exitosa de orgánulos en tejidos vegetales ya que gracias a que su molécula es un catión en totalidad (molécula cargada positivamente y que puede ser a fin con lípidos), los resultados de teñir con este reactivo es que la pared primaria se tinte de color azul mientras que las paredes secundarias se vuelven de color rojo. El lugol también es usado para muchos tejidos vegetales y (Martín, Martin, & Pinto, Enero) explican que esta sustancia química está hecha a base de yodo teniendo así la capacidad de reaccionar con estructuras vegetales como los almidones (yuca, Manihot esculenta o papa Solanum tuberosum). Las células que tiene un organismo vegetal son muy variables ya sea en estructura, tamaño o forma y depende de las especies que se analizan o simplemente el lugar de la planta en donde se obtuvo la muestra. (García, 2009) nos da una idea de que
todo depende de lo que se estudia y es proporcional a los observable a simple vista ya que para observar los orgánulos que forman parte del polen de varias especies en general es muy difícil por su pequeño tamaño, mientras que la observación de los amiloplastos de papa, Solanum tuberosum, son muy fáciles de observar si se lo hace con Lugol ya que el yodo en el reacciona fácil con el almidón, mientras que para la observación de cloroplastos es muy importantes obtener la muestra desde el envés de la hoja o para observar células meristemáticas en plena división celular se lo suele hacer desde el ápice las raíces; en general cada tipo de tejido es observable dependiendo del lugar de la muestra y de las condiciones del mismo. Los tejidos vegetales son la agrupación de varias células para que hagan una función definida, dentro de los cuales se dividen los tejidos de acuerdo a la tarea que realizan. El tejido más importante en cuestión a reproducción y vida es el meristemático ya que toda planta lo posee en alguna parte de su estructura por más adulta que sea la misma ya que esta es la encargada de realizar toda función de reproducción celular es decir dividirse. La (Escuela Universitaria de Ingeniería Agrícola, 2015) explica sobre los tejido vegetales varios fundamentos: explica que los meristemos de la planta hace que pueda crecer en longitud y grosor desde que el nacimiento hasta la muerte de la mismo y se las puede diferenciar porque en todo momento está en división celular para generar, además tienen formas cuadrangulares. Por otro lado dice que el tejido que en funciones es el más fundamental es el parenquimatoso ya que tiene la función que hace que tenga la cualidad de la nutrición autótrofa característica de las plantas y también sus células son las cuales tiene plastos, en forma de una esfera, que almacenan almidón en casi toda la célula como es el caso de papa, Solanum tuberosum, o de la yuca, Manihot esculenta. En otra de sus definiciones está la de tejido de sostén que están divididos en dos: la colénquima (células vivas) y el esclerénquima (células muertas), los tejidos colenquimáticos tiene una forma de esferas que están compuestas de mucha celulosa y pectina que hace que sea firme la planta, mientras que los tejidos esclerenquimáticos tienen en su interior a las esclereidas que tiene una forma de estrella. También fundamenta que el tejido de conducción que se clasifica en Xilema y Floema, el Xilema transporta la savia bruta y tiene forma de red continua de vasos grandes comparados con el floema que tiene muchos más vasos pero pequeños que transportan la savia elaborada. Por último, el tejido de protección, dentro de las cuales están las células epidérmicas que tienen forma de discos muy alargados con la función de protección, en este tejido se encuentran los estomas y a su vez los cloroplastos.
Objetivos: ● Observar algunos tipos de células vegetales. ● Observar algunas estructuras celulares como pared celular, cloroplastos, núcleo,etc. ● Determinar la importancia de ciertos colorantes y soluciones en la identificación de estructuras y sustancias celulares. ● Verificar que las células tienen formas y tamaños variables. ● Conocer la morfología y funcionamiento de los principales tejidos vegetales en base a observaciones realizadas en el microscopio. Materiales: Reactivos: ❖ Lugol ❖ Safranina ❖ Aceite de inmersión. ❖ Azul de metileno. Equipos: ❖ Microscopios. Insumos: Protección personal: ❖ Mandil. ❖ Guantes. Material de laboratorio: ❖ Placas portaobjetos. ❖ Cubreobjetos. ❖ Pipetas desechables. ❖ Mecheros de alcohol. ❖ Papel especial para limpieza de microscopios. ❖ Papel toalla. ❖ Pinzas. ❖ Agujas de disección. ❖ Hojas de bisturí. ❖ Mangos de bisturí. ❖ Agua. Material Vegetal: ❖ Cebolla paiteña. ❖ Tomate riñón. ❖ Papa. ❖ Lechugín. ❖ Tallo de rosa. ❖ Tallo de apio cocinado. ❖ Tallo de cucarda.
❖ Hojas y tallo de geranio. ❖ Rama d e cepillo. ❖ Yuca. Metodología: Células vegetales: A. Cebolla Paiteña (Allium Cepa) 1.Se separó una porción pequeña de la membrana externa dividiendo la cebolla en ocho partes. 2.Se extiéndió sobre un portaobjetos. 3.Se agregó una gota de agua 4.Se procedió a poner un cubre objetos. 5. Se comparó la muestra realizando un montaje con agua y otra agregando una gota de solución de lugol. Resultados:
Tomado de: http://practicasbiologia.unileon.es/practicasconsusfotos/practicas1y2/fotosacomprimirpracticas1y2/cel ulasepidermicasdecebolla.jpg UNIVERSIDAD DE LEÓN
Muestra: Allium Cepa Tinción: Lugol Lente objetivo: 40x Tejido: Epidérmico Corte: Longitudinal. A. Pared Celular B. Núcleo C. Citoplasma . B. Lechuguín (Eichhornia Crassipies) 1.Se colocó una hoja de la planta acuática sobre un portaobjetos. 2.Se agregó una gota de agua y se colocó un cubreobjetos. 3.Se procedió a realizar la observación en 40x Resultados:
Muestra:Eichhornia Crassipies Lugar: Raíz A. Cloroplastos B. Pared Celular C. Células D. Citoplasma
Lente objetivo: 40x
C. Papa (Solanum Tuberosum) 1.Con una cuchilla se retiró la cáscara a un pedazo de papa. 2.Se sacaron porciones en forma de palitos de aproximadamente medio centímetro de ancho. 3.Se realizó un corte muy delgado y transparente en uno de los extremos y se depositó sobre un portaobjetos. 4.Finalmente se agregó una gota de agua para proceder a cubrirlo y observar. Resultados:
A.Amiloplastos B.Citoplasma C.Pared Celular
Muestra: Solanum Tuberosum Tinción: Lugol Lente objetivo: 10x, 40x Los amiloplastos se tiñen de color violeta por la presencia de Yodo en la tinción. D. Tomate (Solanum lycopersicum) 1.Se cortó con la hoja de bisturí una pequeña sección de epidermis del tomate. 2.Se colocó en un portaobjetos una gota de agua, y sobre ella se acomodó el corte de tomate. 3.Se colocó el cubre objeto. 4.Se añadió una gota de aceite de inmersión y se observó en 100x Resultados:
A. Citoplasma B. Pared Celular C. Vacuola D. Cromoplastos Muestra:Solanum lycopersicum Lente objetivo: 100x
Observación: Aceite de inmersión
A. Observación de tejido parenquimático de almacenamiento en yuca (Manihot esculenta). 1. Se realizaron cortes transversales muy finos de la yuca. 2. Se colocó los cortes en una caja Petri . 3. Se sumergió los cortes en lugol durante 5 minutos. 4. Se procedió a lavar los cortes en agua destilada varias veces. 5. Se colocó los cortes en un portaobjetos. 6. Se tapó la muestra con un cubreobjetos y se procedió a observar en el microscopio. 7. Se observó las estructuras que se tiñen de morado.
Resultados:
Muestra: Manihot esculenta Lente objetivo: 40x Corte: Longitudinal. Descripción de estructuras: D. Amiloplastos teñidos con lugol. E. Pared Primaria. F. Membrana plasmática. G. Pared secundaria.
Tinción: Lugol Tejido: Parenquimático de reserva
B. Observación de tejidos de sostén en tallos de rosa (Rosa canina). 1. Se realizó cortes transversales finos del tallo de rosa. 2. Se colocó los cortes en una caja Petri. 3. Se sumergió los cortes en safranina durante 5 minutos. 4. Se procedió a lavar los cortes en agua destilada varias veces. 5. Se colocó los cortes en un portaobjetos. 6. Se tapó la muestra con un cubreobjetos y se procedió a observar en el microscopio. 7. Se observó las estructuras que se tiñen de rojo-rosado.
Resultados:
Muestra: Rosa canina Lente objetivo: 4x Descripción de estructuras: A. Médula B. Floema C. Xilema D. Cambium E. Esclerénquima F. Parénquima
Tinción: Safranina Corte: Transversal
C) Observación de tejido esclerenquimático en cepillo (Callistemon citrinus) y yuca (Manihot esculenta). 1. Se limpió el material vegetal. 2.Se realizó un corte fino longitudinal a la rama seca del cepillo. 3. Se extrajo una capa fina de la cáscara. 4. Se colocó ambas muestras en un portaobjetos con una gota de agua. 5. Se tapó la muestra con un cubreobjetos. 6. Se observó en el microscopio.
Resultados:
Muestra: Tallo de Callistemon citrinus Lente objetivo: 40x Tejido: Esclerenquimático Descripción de estructuras: A. Pared celular. B. Células Esclerenquimáticas
Muestra: Manihot esculenta Lente objetivo: 40x Tejido: Esclerenquimático Descripción de estructuras: A. Esclereidas.
Tinción: Montaje con agua Corte: Longitudinal
Tinción: Montaje con agua Corte: Longitudinal
Tomado de: https://mmegias.webs.uvigo.es/1-vegetal/guiada_v_sosten.php Universidad de Vigo Muestra: Hoja de Camellia ssp. Tinción: safranina y azul de metileno Tejido: Esclerenquimático. Células: Esclereidas. D) Observación de tejidos de sostén y parénquimas en hojas y tallos de geranios (Geranium spp.): 1. Se realizó cortes transversales muy finos del tallo y longitudinales a la hoja. 2. Se colocó los cortes en un portaobjetos. 3. Se tapó la muestra con un cubreobjetos y se procedió a observar en el microscopio. Resultados:
Muestra: Hoja de Geranium ssp. Lente objetivo: 10x
Tinción: montaje con agua Corte: Longitudinal
Tejido: Parenquimático. Descripción de estructuras: A. Epidermis B. Parénquima en empalizada C. Floema D. Xilema E. Parénquima esponjoso F. Parénquima esponjoso o lagunar G. Estomas
Muestra: Tallo de Geranium ssp. Lente objetivo: 40x Descripción de estructuras: A. Tricomas B. Sistema vascular C. Parénquima esponjoso o lagunar D. Colénquima. E. Parénquima de empalizada. F. Epidermis
Tinción: Montaje con agua Corte: Transversal
E) Observación del sistema vascular en apio (Apium graveolens). 1) Se realizó un corte fino y longitudinal, tomando una muestra de la parte más rígida del tallo previamente cocido.
2) Se colocó agua y las muestras en una caja petri. 3) Se cortó en pequeñas partes las muestras. 4) Se colocó una de ellas sobre un portaobjetos y se aplastó para obtener una capa fina. 5) Se cubrió con el cubreobjetos. 6) Se observó en el microscopio óptico de campo claro. Resultados:
Muestra: Apium graveolens Tinción: Montaje con agua Lente objetivo: 40x Corte: Longitudinal Tejido: De conducción. Descripción de estructuras: A. Sistema vascular: Vasos liberianos y leñosos. F) Observación de tejidos de parénquima en hojas de muestras variadas. 1. Se realizó cortes transversales muy finos en las hojas. 2. Se colocó una gota de agua y tapar la muestra con un cubreobjetos y se procedió a observar en el microscopio. 3.Se identificó los tejidos del parénquima en empalizada y esponjoso de las hojas de las muestras entregadas.
Resultados:
Muestra: Hoja de Hibiscus rosa-sinensis Lente objetivo: 10x Descripción de estructuras: A. Epidermis B. Parénquima de empalizada C. Xilema D. Floema E. Parénquima esponjoso
Tinción: Montaje con agua Corte: Transversal
Muestra: Hoja de Eichhornia crassipes
Tinción: Montaje con agua
Lente objetivo: 40x Tejido: Parenquimático Descripción de estructuras: A. Células parenquimáticas B. Pared celular C. Cloroplastos
Corte: Transversal
Conclusiones: ● Se observó de manera efectiva como las células vegetales dependen de la muestra de la especie ya que cada planta es diferente y por ende sus estructuras no son iguales. ● Se distinguió correctamente los diferentes orgánulos que son visibles como la pared celular, los amiloplastos, vacuolas y cloroplastos. ● Se concluyó que para la observación de tejidos o células vegetales depende de la especie y de la muestra ya que para algunas fue necesario solo poner agua mientras que en otras en necesario utilizar reactivos para distinguir de otros orgánulos. ● Se observó que depende del tipo de célula que se estudia es necesario utilizar un enfoque en el microscopio más grande, es debido a que algunas células vegetales son más pequeñas que otros. ● Se divisó que cada tejido tiene su diferente tipo de organización y a su vez una estructura diferente lo que hace que cada estructura no tenga la misma morfología que otra. Recomendaciones: ● Tener los equipos de laboratorio listo para el uso y no tener que sacarlos en ese instante. ● Organizarse para que todos lleven lo que es necesario para la práctica y no esperar que otras personas lleven el material o la muestra. ● Tener los envases para los desechos en cada mesa de trabajo. Anexos: Actividades Previas: Función de los colorantes en la tinción de células y tejidos vegetales. Montaje con agua: Permite la fijación de la muestra al portaobjetos y además proporciona un contraste acuoso a la imagen que se observa en el microscopio. Safranina: La molécula de safranina es un catión en su totalidad (molécula cargada positivamente y que puede ser a fin con lípidos), su uso tiene como resultado que la
pared primaria de la célula se tiñe de color azul mientras que las paredes secundarias se vuelven de color rojo. Lugol: reactivo compuesto por yodo molecular y yoduro potásico reacciona positivamente con el almidón debido a que este tiene la capacidad de absorber yodo provocando que los amiloplastos se tiñen de morado o azul. Esta reacción tiene lugar gracias a la presencia de agentes oxidantes que reducen el yodo a ión yoduro (Sánchez, 2013). Cuestionario: PREGUNTAS PLANTEADAS EN CADA PROCEDIMIENTO. a. Cebolla paiteña -¿Qué forma tienen las células de la cebolla? Forma alargada, en conjunto forman celdas parecidas a un panal. -¿Qué diferencia encuentra en relación con la observación que hizo anteriormente? Se notan más claramente la forma de celdas y su núcleo a la vez es más visible a parte de otros organelos. b. Cebollín ¿Se ve el núcleo celular? Se puede apreciar el núcleo c. Papa ¿Cómo se llaman los plastos vistos? Amiloplastos ¿Qué coloración toman los plastidios? ¿Por qué? Toman un color violeta, por la presencia de Yodo el la tinción que interacciona con la membrana celular. Bibliografía: Aguirre, H. (Septiembre de 2012). Colorante safranina O. Obtenido de www.medigraphic.com: http://www.medigraphic.com/pdfs/invdis/ir-2012/ir122f.pdf Escuela Universitaria de Ingeniería Agrícola. (2015). "TIPOS CELULARES VEGETALES". Obtenido de inea.org/: http://lan.inea.org:8010/web/materiales/web/histologia/celulas_meriste maticas.htm Facultad de Biología Universidad de Vigo España. (17 de 05 de 2016). "TINCIÓN: SAFRANINA AZUL ALCIÁN / VERDE RÁPIDO ". Obtenido de https://mmegias.webs.uvigo.es/: https://mmegias.webs.uvigo.es/6-tecnicas/protocolos/p-tincion-safranin a-a-v.php
Garcia, J. (Diciembre de 2009). Tamaño y forma de las células. Obtenido de www.raco.cat: http://www.raco.cat/index.php/ensenanza/article/viewFile/21448/93411 La Universidad de los Andes de Venezuela . (Marzo de 2016). "CÉLULA VEGETAL". Obtenido de http://www.forest.ula.ve/. La Universidad Nacional de Rosario. (2011). "Introducción a las células". Obtenido de http://bibliotecas.unr.edu.ar/: http://bibliotecas.unr.edu.ar/muestra/medica_panamericana/97860777 43187.pdf Martín, M., Martin, T., & Pinto, G. (Enero). scielo.org.mx. Obtenido de 2013: http://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0187-893 X2013000100006 Mauseth, James. (1998). Botany: An introducción to plant biology. 2da edición. Subdury, Massachusetts. Jones and Bartlett Publishers Rueda, Darwin. (2014). Botánica sistemática. 4ta edición. Quito-Ecuador. Publi &compu. Sánchez, Martin. (2013). Reactivo de Lugol: Historia de su descubrimiento y aplicaciones didácticas. Obtenido de: www.scielo.org.mx/scielo.php?sc ript=sci_ortlex&pid=S0187-893X2013000100006