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• Efrain Einer Condori Nestas

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PRUEBA DE TOLERANCIA ORAL A LA GLUCOSA INTRODUCCIÓN Los niveles de glucosa sanguínea son finamente regulados por mecanismos neurales y hormonales. En ayunas, los niveles de glucemia dependen fundamentalmente de la producción hepática (endógena) de glucosa (85%). De este modo, los niveles de glucemia en ayunas deben permanecer entre 70 y 100 mg/dl después de 8 horas de ayuno. Si un individuo ingiere una comida rica en carbohidratos, la glucosa que es absorbida a nivel de intestino delgado ingresa a la circulación sanguínea y, en segundos, estimula una rápida secreción de insulina por parte de las células βpancreáticas (páncreas endocrino). Del mismo modo, se produce una supresión de la secreción de glucagón por parte de las células α del páncreas. La insulina promueve la captación de glucosa por las células hepáticas, adiposas y principalmente en el tejido muscular (85%) para su posterior utilización. De este modo, los niveles de glucemia regresan a los valores normales. Se establece como normal que 2 horas después de una carga de 75 gramos de glucosa anhidra, los niveles de glucemia deben estar entre 70 y 140 mg/dl (Figura 1). I. OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA: Al finalizar la práctica las (os) alumnas (os) deberán estar en capacidad de: .Evaluar los mecanismos de control homeostáticos de los niveles circulantes de glucosa en sangre. .Entender los mecanismos de liberación y acción de la Insulina. .Conocer los métodos para determinar los niveles de glucosa en sangre y orina. .Realizar una prueba de tolerancia oral a la glucosa. .Leer e interpretar una curva de tolerancia a la glucosa.

II.

MATERIAL REQUERIDO PARA LA EXPERIENCIA PRÁCTICA:

Glucosa anhidra 600 gr o en su defecto sacarosa Tubos de ensayo 13 x75 (8 gradillas con 10 tubos c/u) Pipetas automáticas de 500 ul y de 10 ul Reactivo de Glucosa + estándar de la misma Espectrofotómetro Centrifuga 300 ml de limonada por grupo (SOLO LIMON Y AGUA) Vasos descartables, mandilones, plumones para marcar vidrio.

III.

PROCEDIMIENTO:

1.-Se seleccionarán con antelación voluntarios(as) entre el grupo de práctica correspondiente (Que no hayan sido debidamente diagnosticados como diabéticos con anterioridad)

2.-Los (as) voluntarios(as) seleccionados(as) deberán cumplir un ayuno nocturno riguroso, por Lo menos con 12 horas con anterioridad a la realización de la práctica. 3.-A cada voluntario (a) se le realizará una prueba de glicemia basal en ayunas, la cual se Realizará tomando una muestra de sangre que será la basa 4.-Preparar la solución glucosada: pesar 75 gr de Dextrosa y disolverlo en 300 ml de limonada que será ingerida en su totalidad en 3 minutos por el (la) voluntario 5.-Procédase a obtener muestras de sangre a los 30, 60, 90 y 120 minutos, después de 15 minutos centrifugar la sangre para obtener el suero con que se trabajara 6.- Medir los niveles de glicemia Enumerar 7 tubos T (blanco) ST (estándar) B(basal ) 30’, 60’,90’ y 120’ A cada tubo agregar 500 ul del reactivo de glucosa Luego añadir 5 ul de estándar, del suero basal, de 30’ etc., mezclar Leer en el espectrofotómetro, sacar los cálculos respectivos para obtener la concentración de la glucosa en mg% 7.-Anote los resultados obtenidos y grafíquelos para obtener la curva correspondiente -RESULTADOS OBTENIDOS-DISCUSION. IV.

RESULTADOS

TABLA N°1 VALORES OBTENIDOS DE GLICEMIA Glicemia ayunas (mg/dl)

en

Glocemia a las 30 min (mg/dl)

Glicemia a las 60 min (mg/dl)

Glicemia a los 90 min (mg/dl)

Glicemia a los 120 min (mg/dl)

0,1421

0,1807

0,2636

0,2814

0,2763

BASAL

ESTANDAR

0.1159

0.1254

 1.- Restamos PRUEBA ESTANDAR – PRUEBA BASAL.

0.1254−0.1159=0.0095  2.- Restamos los valores obtenidos de la resta VALORES DEL PLASMA PRUEBA BASAL 1. 2. 3. 4. 5.

GLICEMIA EN AYUNAS GLICEMIA A LOS 30 MIN GLICEMIA A LOS 60 MIN GLICEMIA A LOS 90 MIN GLICEMIA A LOS 120 MIN

0.1421 – 0.1159 = 0.0262 0.1807 – 0.1159= 0.0648 0.2636 – 0.1159 = 0.1477 0.2814 – 0.1159 = 0.1655 0.2763 – 0.1159 = 0.1604

Resultados Finales Basal 30 113.32 144

60 210

90 224

120 213

Curva de tolerancia a la glucosa 250 210

200 150

224

213

144

113.32 100 50 0 Basal

30

60

90

120

Curva de tolerancia a la glucosa

Grafico1: Se observa en la gráfica que la curva de tolerancia a la glucosa con sus resultado basal comparado con el resultado normal de 80mg/100ml. A los 30 y 60 minutos, nuevamente se eleva del rango normal 110mg/100ml y 170mg/100ml. En 90 y 120 minutos, los valores normales serian de 70mg/100ml a 120mg/100ml. Por haber comido antes de la prueba los valores pasan de 200mg/100ml.

V. -

DISCUSIÓN PARTE 1 Según la página Clínica Dam Análisis de glucemia, nivel de glucemia (azúcar en la sangre) o glucemia en ayunas es un análisis de sangre que mide la cantidad de un azúcar, llamado glucosa, en una muestra de suero. El examen se puede hacer mientras uno esté ayunando o en forma aleatoria. Si uno va a practicarse un examen de glucemia en ayunas, NO debe comer ni beber nada durante 8 horas antes del examen. Hasta 100 miligramos por decilitro (mg/dL) se consideran normales para un examen de glucemia en ayunas.

- Alumnos: La prueba de tolerancia la glucosa se realizó con una persona con malo estado de salud en ayunas. Se observó en la práctica que su primer resultado se obtuvo 113.32 ml por 100 ml, lo que significa que no está en los límites normales; los cuales 60 y 100mg /ml. - En este caso nuestro alumno puede haber comido antes esto haría con que el resultado saliera alterado. - Cuando se proporcionó a la persona la limonada azucarada se observó que los niveles de glucosa subieron. En la práctica no se utilizó glucosa, sustituyendo por sacarosa. -

Según el libro Houssay Fisiología pág. 54. El azúcar común, es la sacarosa, que contiene glucosa y fructosa, ambas moléculas tienen un peso molecular de 180 gramos. La fructosa no es utilizada inmediatamente por el organismo, de allí su uso en edulcorantes para diabéticos. Por lo cual, si vas a sustituir la glucosa, por el azúcar común, deberías usar el doble, o sea 150 gramos, pues en el proceso digestivo y de absorción, el azúcar, se desdobla y libera las moléculas de glucosa y las de fructosa. Si necesitas que el metabolismo tenga 75 gramos, si tomas solo los 75 gramos, tendrías la mitad de glucosa o sea 37.5 gr. Si tomas los 150, disueltos en un vaso de agua, tendrías los 75 g. metabólicos que necesitas para la prueba. -Alumno: En el experimento fue utilizado 100gr. de sacarosa siendo 75 gramos de glucosa y 25 gramos de fructosa se necesitaría de otros 75 gramos para que salga el valor normal en la prueba



Según FISIOLOGÍA HUMANA DE STUART IRA FOX pág. 84: Treinta minutos después de la ingestión de la glucosa, cuando ésta ya se haya trasladado al torrente sanguíneo, se realizará otra extracción: se tomarán muestras de sangre una, dos y tres horas después de beber la glucosa. Estas pruebas se analizarán para ver cómo ha respondido el cuerpo a la glucosa .Para que los resultados sean fiables la persona que se somete a las pruebas debe estar en buenas condiciones de salud, dado que, desafortunadamente, un simple resfriado o cualquier otra enfermedad podría falsear los resultados. También es imprescindible que la prueba se realice en ayunas, porque un solo café o bien

fumar un cigarrillo puede trastocar los niveles del análisis. Mientras se realiza la prueba oral de tolerancia a la glucosa, el paciente debe estar en reposo, por lo que se recomienda que lea un libro o vea la televisión. Las extracciones en el plazo de tres horas después de haber bebido la glucosa mostrarán el aumento y la disminución de los niveles de azúcar a lo largo del tiempo. Una persona que no padece Diabetes presentará un pico de los niveles de glucosa y, después, estos disminuirán rápidamente. Pero un diabético no será capaz de tolerar la glucosa y sus niveles presentarán un pico. Después irán disminuyendo gradualmente y con mucha más lentitud. Aunque las pruebas muestren niveles altos de Glucemia, la prueba oral de tolerancia a la glucosa deberá realizarse una segunda vez antes de poder emitir un diagnóstico firme de diabetes, con el fin de asegurar que ningún factor externo haya falseado los resultados. - Alumno: como refiere un autor un simple malestar puede alterar la prueba, este no fue el caso de nuestra prueba pero al parecer el compañero Percy ingirió un café y jugo. Esto es el resultado de su elevada glucosa en sangre que registra esta prueba por lo tanto esta prueba salió falseada.

-Según la pág. Nutrición para corredores cuando los niveles de azúcar en sangre empiezan a subir es la insulina la que se encarga de mantenerlos “a raya”, a través de varios mecanismos: estimula la entrada de glucosa en el músculo y en el tejido adiposo (retirándola del torrente sanguíneo), estimula la formación de glucógeno (utilizando la glucosa) en el hígado y en el músculo, estimula la formación de grasa (partiendo de la glucosa) en el hígado y en tejido adiposo, estimula la captación de aminoácidos por parte del músculo y favorece la síntesis de proteínas en el mismo. Por todo ello decimos que es una hormona hipoglucemiante (baja niveles de azúcar en sangre) y anabólica (estimula la formación del músculo y tejido adiposo). Alumno: En el cuarto y quinto resultado, la glucosa debería haber disminuido quiere decir que una glucosa de 200 mg/dl o más después de dos horas de haber tomado la solución glucosada. Confirma el diagnostico de que hubo un error en la prueba y no fue realizada conforme las indicaciones -

El ultimo resultado una persona diabética suele encontrase por encima de 110mg/100ml y muchas veces por encima de 140mg/100ml. Cuando estas personas ingieren glucosa, la concentración de esta aumenta mucho más en la sangre.

VI. DISCUSIÓN PARTE 2 1. ¿En qué lugar del tubo intestinal se absorbe la glucosa ingerida, y cuál es su mecanismo básico de absorción? Puede utilizar esquemas o dibujos La absorción de estos azúcares se realiza fundamentalmente en la porción final del duodeno e inicial del yeyuno, y las moléculas absorbibles son la glucosa, la galactosa y la fructosa, productos de la acción enzimática del ribete en cepillo. El resto de los posibles monosacáridos (por ejemplo la manosa) no se absorben y quedan en el lumen, de forma que el incremento de su concentración luminal puede llevar a un incremento de la presión osmótica luminal, con el consecuente trasvase de agua hacia el lumen intestinal y la aparición de diarrea. - Explicación: La absorción intestinal de monosacáridos se da por un mecanismo de cotransporte con el sodio. En primer lugar, el transporte activo de los iones sodio, que cruzan las membranas basolateras de las células del epitelio intestinal hacia la sangre, provoca el descenso de la concentración intracelular del ion. En segundo lugar, esta reducción de sodio intracelular induce el paso de sodio desde la luz intestinal al interior de la célula epitelial a través del borde en cepillo, gracias a un transporte activo secundario. El sodio se combina primero con una proteína de transporte pero esta no podrá llevar a cabo su función si no se combina con alguna otra sustancia adecuada, como la glucosa. La glucosa intestinal se combina también con la misma proteína de transporte, de modo que tanto el sodio como la glucosa se transportan juntos hasta el interior de la célula. La menos concentración de sodio dentro de la célula, “empuja” literalmente al ion y a la glucosa que lo acompaña al interior del enterocito. Una vez allí, otras proteínas de transporte y enzimas facilitan la difusión de la glucosa hacia el espacio paracelular a través de la membrana basolateral, y de ahí a la sangre.

2. Indique el lugar de producción de la insulina. La insulina se sintetiza en las células beta con la maquinaria celular habitual para la síntesis de la proteína, primero las ribosomas acoplados al retículo endoplasmático traducen el ARN de la insulina y forman y forman una prepoinsulina. Esta prepoinsulina inicial tiene un peso molecular de aproximada 11500, pero luego se desdobla en el retículo endoplasmatico para formar la proinsulina, con un peso molecular cercano a 9000 y cosiste en tres cadenas de péptido A, B Y C. La mayor parte de la proinsulina sigue escindiéndose en el aparato de Golgi para formar insulina conectada a uniones disulfuro y la cadena C y péptidos denominadas péptidos de conexión (péptido C). la insulina del péptido C empaquetan en los gránulos secretores y son secretados en cantidades equimolares . Aproximadamente 5-10% del producto final secretado persiste en forma de preinsulina. 1 3. -¿Cómo actúa la insulina una vez liberada a la circulación sanguínea? ¿Qué acción tiene a nivel de hígado y músculo? La mayor parte de la insulina liberada hacia la sangre circula de forma no ligada; su semivida plasmática es de unos 6 minutos por términos medio y desaparece de la circulación de unos 10 a 15 minutos. Con la excepción de una parte de insulina que se une a los receptores de las células efectores el resto se degrada por efecto de la enzima insulinasa, sobre todo en el hígado y, menor medida, en los riñones y en los músculos, y de forma muy ligera un casi todos los demás tejidos. Su desaparición inmediata del plasma tiene interés porque, a veces, es tan importante desactivar con rapidez el efecto de insulina como activar sus funciones reguladoras.2 4. -Mencione, ¿Cómo actúa la insulina a nivel de la membrana plasmática celular para lograr o facilitar el pasaje o entrada de glucosa a la misma? La insulina es la hormona hipoglucemiante. Como tal, su función primaria es reducir la concentración de glucosa en sangre (glucemia) promoviendo su transporte al interior de las células, pero sólo actúa en este sentido sobre el tejido adiposo (adipocitos), el músculo (fibras musculares o miocitos) y el corazón (fibras cardiacas o miocardiocitos). La insulina realiza esta función activando el transportador de glucosa GLUT4, que sólo se encuentra en la membrana plasmática de esas células. La glucosa es una sustancia poco polar, y como tal puede difundir libremente por las membranas de las células. Sin embargo, todas las células tienen transportadores específicos de glucosa para acelerar su tránsito a través de sus membranas, pero el único transportador dependiente de insulina está sólo en las células citadas, las cuales tienen además transportadores no dependientes de insulina. Los transportadores de glucosa son proteínas integradas en la membrana plasmática de las células que permiten o facilitan el transporte de sustancias específicas en ambos sentidos (del medio extracelular al citoplasma, o en sentido contrario, de acuerdo con las condiciones termodinámicas). Se conocen hasta doce transportadores 1 GUYTON Y HALL- PSICOLOGÍA MÉDICA PAG:940 2 GUYTON Y HALL- FISIOLOGÍA MÉDICA PAG:940

diferentes de glucosa El más general y más ubicuo es GLUT1. El transportador GLUT3 se encuentra sólo en el cerebro, y GLUT4 (que se encuentra en los músculos, el corazón y el tejido adiposo) es el único de los doce sensible a la insulina. Así, la mayoría de las células no necesitan insulina para consumir glucosa. 5.

Con base a los resultados obtenidos, Usted gráfico la Curva de Tolerancia Oral a la Glucosa en tres diferentes tiempos. Analice el gráfico y discuta en el grupo las implicaciones y consecuencias fisiológicas derivadas del mismo. Brevemente, anote los comentarios más importantes. 6. Explique la razón del incremento y posterior decremento de la glicemia en la Curva de tolerancia Oral a la Glucosa, y discuta ¿qué hormonas pueden estar implicadas en este efecto fisiológico? LAS RESPUESTAS DE LAS PREGUNTAS 5 Y 6 ESTÁN EN LA DISCUSIÓN PARTE UNO 7. ¿Qué situaciones podrían alterar los resultados dando falsos positivos? - Cuando agregamos reactivos en cantidades inadecuadas a las muestras. - Una mala calibración de esfectofotrómetro. - Cuando la persona al cual se le va a ser la prueba no ha cumplido adecuadamente los pasos del ayuno. - 3 DIAS ANTES DE LA PTGO - Planifica comer tres comidas saludables y meriendas durante 3 días antes de la prueba. No necesitas comprar nada en especial, pero necesitas asegurarte que tengas alimentos saludables para comer. Tus comidas deben ser balanceadas con muchos carbohidratos. Los alimentos que contienen carbohidratos incluyen: - Frutas - Panes - Cereal - Pasta - Arroz - Galletas - Verduras que contienen almidón (maíz/alverjas/zanahorias) - 12 HORAS ANTES DE LA PTGO - NO comas, fumes o realices ejercicios fatigosos 12 horas antes de la prueba. (Por ejemplo: si tu prueba está programada por la mañana a primera hora, ejemplo: a las 8 AM-No comas, fumes, o hagas ejercicio que demanden mucho esfuerzo luego de las 8pm la noche anterior). Puedes tomar agua pura, NO con saborizantes. 8.

Con los resultados obtenidos, podría Usted indicar si los (las) voluntarios (as) participantes en el ensayo, son sujetos sanos o padecen trastornos de utilización de la glucosa. Son sujetos sanos porque los valores normales de una persona en ayunas son entre 80 – 10 mg/100ml, y cuando ingiere glucosa después de dos horas no debe ser mayor de 140 mg/100ml.

VII. CONCLUSIONES: Según Fisiología de Guyton y Hall

Una curva anormal de tolerancia a la glucosa; esto explica un mal funcionamiento del metabolismo de la glucosa regulado por la insulina. En su efecto inicial hay un mayor transporte de glucosa, en su efecto intermedio se da mayor síntesis de glucógeno y de ácidos grasos y en su efecto tardío hay más glucosa en la sangre.. Cuando una persona sana ingiere 1g de glucosa por kg de peso corporal en ayunas, la glucemia se eleva desde aproximadamente 90mg/100ml hasta 120 a 140mg/100ml y luego retorna a la normalidad en unas 2 horas. Alumno: Tolerancia Anormal a la Glucosa: Se considera que una persona tiene una respuesta anormal de su glucosa a la insulina, es decir, que es intolerante a la glucosa, cuando el nivel de glicemia en ayunas fue mayor de 100 mgs/dl y menor a 125 mgs.dl pero el nivel de glicemia 2 horas después de la ingesta de la solución glucosada, estuvo entre 140 mg/dl. a 199 mg/dl.. En este caso la nuestro resultado fue de 133 mgs/dl en ayunas y el nivel después de la ingesta estuvo en 213 mg/dl se llegó esto como causa que el alumno haya comido un diagnóstico más preciso sería una pre diabetes

PRÁCTICA N° 04 DETERMINACIÓN DE PROTEINA TOTAL, ALBÚMINA Y GLOBULINAS I.INTRODUCCIÓN

Las proteínas son macromoléculas orgánicas ampliamente distribuidas en el organismo. Actúan como elementos estructurales y de transporte y aparecen bajo la forma de enzimas, hormonas, anticuerpos, factores de coagulación, etc. En el plasma las proteínas contribuyen a mantener el volumen del fluido circulante transportan sustancias relativamente insolubles y actúan en la inactivación de compuestos tóxicos y en defensa contra agentes invasores. La determinación de proteína total es útil para el monitoreo de cambios ocasionados por diversos estados de enfermedad. En condiciones patológicas como perdidas renales, desnutrición, infecciones prolongadas, etc. suelen presentarse hipoproteinemias con desarrollo de edema y ascitis o acumulación de líquido en la cavidad abdominal, mientras que en otras como mieloma múltiple, endocarditis bacteriana y hemoconcentración de diversos orígenes (ej. Deshidratación) se observan hiperproteinemias. La albúmina es el mayor componente proteico del suero. Se sintetiza en el hígado y posee una gran capacidad de cambios en su configuración. Entre sus funciones se distinguen el transporte de una amplia variedad de sustancias como hormonas esteroides, ácidos grasos, bilirrubina, catecolaminas, que en forma libre son insolubles en medio acuoso. También contribuye al mantenimiento de la presión osmótica que estaría relacionado con su bajo peso molecular y su gran carga neta. Los aumentos de albumina son ocasionales y se relacionan casi siempre con la deshidratación que provoca la reducción en el contenido de agua plasmática. La hipoalbuminemia ocurre en la perdida excesiva de proteínas, en el síndrome nefrótico, desnutrición, infecciones prolongadas, quemaduras severas, otras causas son la dieta deficiente. Enfermedad hepática o malabsorción.

La globulina es una proteína de la sangre. Junto con la albúmina constituyen las dos proteínas séricas. Reagrupadas en cuatro familias de proteínas -las alfa 1 globulinas, las alfa 2 globulinas, las beta globulinas y las gamma globulinas- permiten transportar lípidos, iones y otras vitaminas. La globulina contribuye a la constitución del coágulo de sangre y participa en la defensa del organismo en el sentido que contiene anticuerpos. Por ejemplo, en caso de inflamación la tasa de alfa 1 aumenta en la sangre. II.OBJETIVOS 2.1. Determinar la concentración de proteína total, en una muestra de suero sanguíneo como apoyo al diagnóstico clínico, de acuerdo a los métodos actuales. 2.2. Determinar la concentración de albumina, en una muestra de suero sanguíneo como apoyo al diagnóstico clínico, mediante el método colorimétrico. III.MATERIALES -

Espectrofotómetro. Pipetas automáticas de 10 – 100 ul y de 100 a 1000 ul. Tubos de ensayo y gradilla Tubos de espectrofotómetro Suero sanguíneo Kit de reactivos para la determinación de Proteínas Totales Kit de reactivos para la determinación de Albúmina

IV.PROCEDIMIENTO 4.1 Proteínas Totales Fundamento:

Los enlaces peptídicos de las proteínas reaccionan con el ion cúprico en medio alcalino, para dar un complejo color violeta con máximo de absorción a 540 nm. En tres tubos de ensayo marcados B (Blanco), E (Estándard) y D (Desconocido), colocar: B Estándard Muestra Reactivo

E ----2 ml

D 20 ul --2 ml

--20 ul 2 ml

Mezclar e incubar durante 15 minutos a 37⁰C. Leer en espectrofotómetro a 540 nm, llevando a cero con el blanco de reactivo. Calculo de los resultados: Proteína Total (g/dl) =

Dxf

f = Estandard (g/dl) Abs. Estándar

Donde: D = Desconocido o muestra problema f = Factor Valores de referencia: Proteína Total 6.1 a 7.9 g/dl (6 – 8 g/dl) 4.2. ALBÚMINA Fundamento: La albumina reacciona con la forma aniónica del bromocresol verde (BSG), con una absorbancia máxima a 625 nm. En tres tubos de ensayo marcados B (Blanco), E (Estandard) y D (Desconocido), colocar:

Estándard Muestra Reactivo

B

E

D

----2 ml

10 ul --2 ml

--10 ul 2 ml

Mezclar e incubar durante 10 minutos entre 15 y 28⁰C. Leer en espectrofotómetro a 625 nm, llevando a cero con el blanco de reactivo. Calculo de los resultados: Albumina (g/dl) =

Dxf

f = Estandard (g/dl) Abs. Estándar Donde: D = Desconocido o muestra problema f = Factor

Valores de referencia: Albumina 3.5 a 4.8 g/dl (3.5 – 5 g/dl) 4.3 GLOBULINAS Proteínas totales – albúmina = Globulinas Indice de Hoffman Relación A/G 1.2 a 2.2

Cuestionario 1. Que métodos se conocen para el estudio de las proteínas plasmáticas? 2. En que consiste la realización de un proteinograma? 3. Describa las patologías relacionadas a las proteínas: Inflamación aguda, inflamación crónica, enfermedades hepáticas, síndrome nefrótico, hipogammaglobulinemia y perdida de proteínas por el aparato digestivo.