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• Melissa Leon Caballero

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FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA

TEMA: Laboratorio N°5

CURSO: Interpretación y análisis clínicos

PROFESOR: Neuman Pineda Pérez

PRACTICA N°5: TIEMPO DE COAGULACION, TIEMPO DE SANGRIA, TIEMPODE PROTROMBINA, DOSAJE DE FIBRINOGENO.

1. MARCO TEORICO

La hemostasia La hemostasia es el fenómeno fisiológico que detiene el sangrado. La hemostasia es un mecanismo de defensa que junto con la respuesta inflamatoria y de reparación ayudan a proteger la integridad del sistema vascular después de una lesión tisular. En condiciones normales la sangre circula en fase líquida en todo el organismo. Después de una lesión vascular la sangre se coagula sólo en el sitio de la lesión para sellar únicamente el área. La transformación de sangre líquida en coagulo sólido está regulada por el sistema hemostático y depende de una interacción compleja entre la sangre (que contiene las células y los factores que intervienen en la coagulación) y pared vascular (el endotelio vascular tiene un papel fundamental dentro de la coagulación y la fibrinolisis, y en condiciones fisiológicas tiene propiedades anticoagulantes, pero puede presentar propiedades procoagulantes cuando se rompe el equilibrio). Por una parte, está el sistema de la coagulación que junto con sus mecanismos de retroalimentación asegura la eficacia hemostática y, por otro lado, hay el sistema fibrinolítico que actúa como regulador del sistema de la coagulación, eliminando la fibrina no necesaria para la hemostasia. El sistema tiene mecanismos de seguridad: cada componente es inactivo y se tiene que activar, la mayoría de los componentes forman complejos con la superficie de las membranas que están localizados sólo en la región del vaso lesionado y, finalmente, existen los inhibidores del proceso para evitar una activación

de la coagulación y fibrinolisis más allá de la lesión. La hemostasia resultante siempre depende del equilibrio entre ambos sistemas, así vemos que: • En las personas sanas el equilibrio es perfecto.

• Si disminuyen los factores de coagulación o el potencial fibrinolítico sobrepasa el potencial de coagulación se producirá una hemorragia. • Si el potencial de coagulación sobrepasa el fibrinolítico o bien disminuyen los factores inhibidores de la coagulación se producirá una trombosis.

Cascada de coagulación

Modelo de la vía extrínseca El papel principal del modelo del factor tisular es generar una «explosión de trombina», un proceso en el que la trombina es liberada muy rápidamente. El FVlla circula en una cantidad más alta que cualquier otro factor coagulante. Este proceso incluye los siguientes pasos: 1. Siguiendo el daño al vaso sanguíneo, el FVII deja a la circulación y entra en contacto con el factor tisular (FT) expresado en células que contienen factor tisular. Estas células incluyen a los leucocitos y a los fibroblastos estromales y forman el complejo activado TF-FVlla. El TF-FVlla activa el FIX y el FX. 2. El mismo FVII es activado por la trombina. El FXla, el FXlla y el FXa. 3. La activación de FX (para formar FXa) por el TF-FVlla es casi inmediatamente inhabitado por el inhibidor de factor tisular (TFPI). 4. El FXa y su co-factor FVa forman el complejo protombinasa, que activa la protrombina en trombina. Luego, la trombina activa a los otros componentes de la cascada de coagulación, incluyendo al FV y al FVIII, y activa y libera FVIII para que no se una al vWF. FVlla es el co-factor de FIXa y juntos forman el complejo tenasa. Este activa al FX y el ciclo continúa.

Modelo de la vía intrínseca La vía intrínseca es iniciada cuando se hace contacto entre la sangre y la superficie expuesta negativamente cargada. Esta activación de contacto comienza con la formación del complejo primario de colágeno por HMWK (por sus siglas en inglés) o cininógeno de alto peso molecular, el factor Fletcher y el factor de coagulación XII. El factor Fletcher es convertido en calicreína, y el factor de coagulación XII se convierte en FXlla. La FXlla convierte a la FXI en Fxla. El Factor Xla activa al FIX, junto con su cofactor FVlla para formar el complejo tenase. Este factor a su vez activa el FX al FXa

Tiempo de coagulación (método de Lee White) Antiguamente se empleaba como método de pesquisa de alteraciones del mecanismo intrínseco de la coagulación y para monitorear la terapia con heparina. Hoy se conoce que este método tiene poca reproducibilidad y es sensible solo a deficiencias graves de factores de la coagulación; por lo tanto, su uso en el laboratorio está limitado.

Tiempo de sangría. También llamado Tiempo de sangrado, es un examen de sangre que analiza qué tan rápido se cierran los vasos sanguíneos pequeños en la piel para detener el sangrado. El tiempo de sangrado constituye la mejor prueba para detectar alteraciones de la función plaquetaria y es uno de los principales estudios en los trastornos de la coagulación. La duración del sangrado de un capilar depende de la calidad y cantidad de plaquetas y de la vasoconstricción. plaquetas.

Tiempo de trombina

Esta prueba permite explorar de forma rápida y simple el tiempo para la formación de fibrina. Este indicador se mantiene normal en deficiencias del factor XIII; debe ser determinado antes de cualquier cuantificación analítica en caso de prolongación inexplicable de los test globales (TP, TPTA).

2. COMPETENCIAS 

Aplica las técnicas apropiadas para determinar el tiempo de coagulación, tiempo de sangría y tiempo de protrombina.

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Hacer la interpretación clínica y correlacionar las coagulopatías.

3. MATERIALES Y EQUIPOS  Laminas portaobjeto  Cronometro  Tira de papeles secantes  Tubo cónico graduado  Aguja  Ligadura  Algodón  Lanceta  Baño maría  Anticoagulante de Wintrobe  Reactivo de tromboplastina

4. PROCEDIMIENTO

PROCEDIMIENTO 1: Tiempo de coagulación

“Método de Burker”

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Sangre capilar

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Extraer sangre capilar y colocar dos gotas en un portaobjeto

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Dejar reposar por 30 segundos.

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Con ayuda de un estilete levantar la gota de sangre

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Observar y tomar el tiempo en el cual se forma los filamentos de fibrinógenos.

PROCEDIMIENTO 2: Tiempo de coagulación “Método de Lee y White”

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Sangre venosa

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Extraer 2ml de sangre venosa en un tubo de ensayo

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Inclinar el tubo de ensayo a 45°

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Tomar el tiempo que demora en coagular la sangre.

PROCEDIMIENTO 3: Tiempo de sangría “Método de Duke” 

Sangre capilar

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Tomar sangre del lóbulo de la oreja

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Cada 30 segundos limpiar suavemente la sangre que se forma hasta que termine la sangría.

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Tomar el tiempo transcurrido

PROCEDIMIENTO 4: Retracción del coagulo “Método de Mac Farland”

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Tomar sangre venosa 4 ml en un tubo graduado

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Colocar el espiral con tapón en el tubo

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Incubar a 37° por una hora

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Retirar el tapón con espiral del tubo.

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Medir el suero que queda en el tubo

5. CUESTIONARIO 

¿Cuál es el fundamento del tiempo de coagulación?

El tiempo necesario para que la primera sangre se coagule en tubo es la medida de la actividad total des sistema intrínseco de la coagulación. La inspección periódica del coagulo permite la valoración de las propiedades físicas del coagulo (tamaño, aspecto y fuerza mecánica).

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¿Cuál es el fundamento del tiempo de sangría?

Cuando se produce injuria tisular quedan expuestos los componentes del subendotelio (fundamentalmente colágeno tipo IV y V) donde las plaquetas se adhieren y luego se agregan. El tiempo de sangría se basa en esta propiedad y mide el tiempo que tarda en cohibirse la salida de sangre provocada por una incisión estandarizada realizada en los vasos superficiales pequeños.

Es una prueba global de la hemostasia primaria. Está influenciada por factores técnicos que se deben estandarizar cuidadosamente profundidad, ubicación y dirección de la incisión; también depende del tipo de piel del paciente y la habilidad del operador. El TS depende fundamentalmente de la calidad y cantidad plaquetaria. Por lo tanto, en presencia de trombocitopenia (menor de 80.000 mm3) el TS debe interpretarse con cuidado.

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¿Cuál es el fundamento bioquímico del proceso de retracción del coagulo?

Al coagularse en forma espontánea la sangre, se forma una masa solida con todos los componentes sanguíneos. Con el tiempo, la acción de las plaquetas sobre la red de fibrina retrae el coagulo reduciendo su masa. La retracción del coagulo depende de fibrinógeno y las plaquetas

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¿Cuál es el fundamento del dosaje de fibrinógeno?

El fibrinógeno, en presencia de un exceso de trombina, se transforma en fibrina. El tiempo de formación del coágulo es inversamente proporcional a la concentración de fibrinógeno presente en la muestra de plasma. La cuantificación del fibrinógeno se puede realizar por métodos cronométricos, que exploran la funcionalidad del fibrinógeno, y por métodos antigénicos, que solo exploran su concentración.

6. REFERNCIA BILIOGRAFICA 

Robbins S, Cotran R. Manual de patología estructural y funcional. 6° edición. Madrid: Interamericana; 1999.

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Wintrobe M, Maxbell M. Hematología clínica. 6° edición. Buenos Aires: Interamericana; 2000.