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Universidad “Dr. José Matías Delgado” Facultad de Agricultura e Investigación Agrícola “Julia Hill de O’ Sullivan”

PRÁCTICA No. 6: “PROPIEDADES DE LOS CARBOHIDRATOS”

ESTUDIANTE: Ardón López, Josselyn Jeannette —201601876 Villarreal Rodríguez, María José —201601065

CÁTEDRA: Bioquímica CICLO 02-2017

DOCENTE: Lic. Marina Cisneros de Courtade

Antiguo Cuscatlán, 01 de diciembre de 2017

INTRODUCCIÓN

OBJETIVOS

OBJETIVO GENERAL: Identificar con ayuda experimental las propiedades químicas de los carbohidratos.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS: 

Comprobar experimentalmente las reacciones genéricas de los carbohidratos con los reactivos de Antrona, Molisch y Saliwanoff.



Diferenciar los azucares reductores de los no reductores utilizando los reactivos de Fehlin y Tollens.



Verificar la prueba de formación de Osasuna con la glucosa, fructosa y sacarosa utilizando 2-4-difenilhideoxina..



Verificar la hidrólisis ácida de la sacarosa.



Comprender la reactividad de la solución de sacarosa hidrolizada con el 2-4difenilhideoxina.



Identificar al almidón mediante su reacción con una solución de yodo.

PROCEDIMIENTO 1. Reacción de Antrona En seis tubos de ensayo numerados del 1 al 6 respectivamenrte, colocar lo siguiente: 1er tubo: 1 ml de solución de glucosa del 1%, 2do tubo: 1 ml de solución de fructosa al 1%, 3er tubo: 1 ml de solución de sacarosa al 1%, 4to tubo: 1 ml de solución de lactosa al 1%, 5to tubo: 1 ml de solución de almidón al 1%, 6to tubo: 1 ml de agua (usada como testigo). A cada uno de los tubos añada 1 ml de una solución reciente de Antrona al 0.2%

en acido sulfúrico concentrado. Terminada la adición observe la

aparición de una coloración verde azulosa. 2. Reacciones de Molish En 6 tubos de ensayo procesa en la misma forma que lo hizo en el paso 1, utilizando Antrona, luego añada 2 ml de ácido sulfúrico concentrado a cada tubo dejándolo caer por las paredes del tubo. Observe el color violaceo del anillo formado en la interfase entre los líquidos. 3. Reacción de Saliwanoff Prueba de cetosas. Coloque en dos tubos de ensayo 1 ml de reactivo de Saliwanoff, agregue a uno de ellos 1 ml de solución de frutosa y al otro 1 ml de solución de glucosa, ponga ambos tubos en baño de maría y caliente durante 5 minutos. La formación de una coloración rosa indica que el azúcar es una cetosa. 4. Reacciones específicas de carbohidratos  Reacción de Fehling. Prepare 5 tubos de ensayo colocando 1 ml de solución A y 1 ml de solución B del reactivo de Fehling en cada uno. Luego agregue 2 ml de solución de carbohidratos a cada tubo, utilizando las 5 soluciones que utilizaron en el paso 1. Los azucares reductores reaccionan haciendo que el reactivo se reduzca formando Cu2O que es un precipitado rojo ladrillo.  Reacción de Tollens. Prepare 5 tubos de ensayo colocando 1 ml de reactivos de Tollens en cada uno. Luego agregue 2 ml de solución de carbohidratos (de los 5 que se han proporcionado, caliente en baño de

maría y observe si se forma espejo de plata). Sólo los azucares 

reductores darán positiva esta prueba. Formación de Osazonas. Coloque en cada uno de los 3 tubos de ensayo por separado 1 ml de solución de glucosa, fructosa y sacarosa (respectivamente). Agregue 1 ml de solución 2-4-Difenilhidroxina, mezcle y caliente en baño de maría hirviente durante 5 minutos. Luego enfríe los tubos en baño de hielo y observe la formación de un



precipitado naranja. Hidrólisis de carbohidratos. Prepare en un tubo de ensayo una solución con 0.5 g de sacarosa en 5 ml de agua, añada 5 gotas de ácido clorhídrico concentrado y caliente en baño de maría durante 5 minutos. Enfríe la solución y neutralice el ácido con unas gotas de NaOH al 10%, de igual forma, haga la prueba con el reactivo de Fehling con esta solución hidrolizada y compare los resultados obtenidos con los de la



prueba anterior. Formación de compuestos coloreados con yodo. En cada uno de 5 los tubos, coloque 1 ml de solución de carbohidratos. Utilizando las 5 soluciones de carbohidratos que se han proporcionado, añada a cada tubo unas gotas de solución I2/Kl y observe los resultados. La formación de un complejo de color azul determina la presencia de almidón.

OBSERVACIONES

RESULTADOS  Reacción de Antrona: En los tubos con las muestras con 1 ml de solución de: glucosa al 1%, fructosa al 1%, sacarosa al 1%, lactosa al 1%, almidón al 1% y agua (respectivamente) se observó un precipitado color verde azulado y por ende sobrenadante blanco al agregar 1 ml de Antrona a cada tubo, esto debido a la presencia de ácido sulfúrico en la Antrona, el cual desnaturaliza y deshidrata los azúcares y por actuar fuertemente como un agente desecante que extrae el agua y por lo tanto carboniza el azúcar. Es por ello la visualización del color verde azulado (fuerte) en los primeros 2 tubos ya que éstos son mayormente resistentes al ácido sulfúrico, por tener una sola cadena carbonada (por ser monosacáridos), en el caso del tubo 3 se observó una coloración verde azulada pero en menor proporción debido ya que éste contenía sacarosa y en el caso de los últimos 3 tubos se observó de igual forma una coloración verde azulada pero en menor proporción que en los primeros 3, debido a que son polisacáridos, es decir, polímeros construidos por una gran cantidad de monosacáridos enlazados entre sí, por lo que al hidrolizarse se producen monosacáridos (es por ello la coloración).  En el caso de la Reacción de Molish, se observó en los primeros 4 tubos la formación de un anillo en la interfase de los líquidos (color violeta oscuro) esto debido a que todos los carbohidratos reaccionan con el 1-nafttol en presencia de ácido sulfúrico para formar soluciones complejas coloreadas, debido a la deshidratación que experimentan los carbohidratos en presencia de ácidos minerales fuertes, la formación del complejo coloreado se debe a la deshidratación existente por la polarización del grupo carbonilo del carbohidrato, el cual produce un carbocatión que se estabiliza con los pares electrónicos libres del oxígeno del 1-naftol, por lo tanto, los monosacáridos por ser estructuras más simples que los oligosacáridos reaccionan más rápido y su coloración al deshidratarse es mucho más fuerte.

 Reacción de Saliwanoff: Se observó una coloración rosada en la muestra del tubo 1 después de los 5 minutos, esto debido a la deshidratación del carbohidrato, la reacción de Saliwanoff es utilizada para la identificación de cetosas ya que en éstas se observa la reacción de forma más rápida, es por ello, que en el caso de la muestra del tubo 2 sí se observó una coloración pero ésta tomó más tiempo y fue en mínima proporción ya que la glucosa es una aldosa.  Reacción de Fehling: Ésta se caracteriza por identificar los azucares reductores, en nuestro caso los tubos con glucosa al 1%, fructosa al 1% y lactosa al 1% presentaron un color rojo ladrillo a diferente nivel de coloración (y decoloración de la solución) ya que esto indica la concentración de azúcar en cada solución, en el caso del tercer tubo se observó una coloración azul el cual determina que esta solución es un azúcar no reductor, de igual forma ocurrió en el 5to tubo el cual contenía almidón. La Reacción de Fehling se visualiza en los azucares reductores por el poder reductor del grupo carbonilo en las aldosas pues al tener una estructura química abierta actúan como agentes reductores de igual forma ocurre en algunas cetosas como la fructosa en nuestro caso, los carbohidratos donde el grupo carbonilo potencial está bloqueado indica que no es un azúcar reductor, en el caso de la sacarosa no se observó nada debido a que posee un carbonilo potencial bloqueado lo que la vuelve un azúcar no reductor.  Reacción de Tollens: Se observó la formación de un espejo de plata en las soluciones, sin embargo se visualizó en mayor proporción en la fructosa por ser una cetosa y por lo tanto un monosacárido (con una sola cadena carbonada), en el caso de la sacarosa se observó un mínimo espejo de plata por ser un oligosacárido, lo que indica que las soluciones son aldehídos. Para que un carbohidrato reaccione con Felihling o Tollens es necesario que posea un grupo carbonilo real o potencia libre, llamándose azúcar reductor.

 Formación de Osazonas: Se observó un precipitado naranja en todos los tubos después de enfriarlos lo cual indica la formación de Osazonas. Se observó el precipitado naranja en la sacarosa por que está en medio ácido por haber cambiado el reactivo (aunque no debería de dar en ésta), la formación de Osazonas se debe debido al empleo de un exceso de fenilhidricina, lo cual causa una reacción de formación de fenilhidrazonas que continua hasta dar productos conocidos como Osazonas.  Hidrólisis de carbohidratos: No se observaron cambios en la solución al aplicar el ácido clorhidríco, sin embargo al agregar el reactivo de Fehling se observó un precipitado verde y un cambio de color en la solución a rojizo/naranja, esto debido a la hidrólisis de la sacarosa por ser un oligosacárido, la hidrólisis ocurrió por la destrucción de los polisacáridos hasta llegar a su forma más pequeña, un factor que influyó en esto fue la exposición de la solución a altas temperaturas, de igual forma la presencia de HCl en la muestra contribuye a la descomposición de la sacarosa en sus monosacáridos (glucosa y fructosa) reductores.  Formación de compuestos coloreados con yodo: Se observo un cambio de color en las muestras tornándose a morado, sin embargo, en el caso del almidón el cambio de color fue a azul intenso, esto se debe a la fracción de amilasa que absorbe el yodo utilizado, el producto azul es un complejo de inclusión en el cual las moléculas de yodo entran en los espacios amplios (por la forma de hélice que posee) de amilosa .

CONCLUSIONES  Los carbohidratos en presencia de ácidos fuertes de deshidratan formando derivados de éste, los cuales reaccionan con reactivos como Antrona, Molish y Saliwanoff para dar compuestas de estructura compleja, debido a las reacciones genéricas con los reactivos ya mencionados se forman compuestos coloreados que son utilizados para la identificación de éstos.  El reactivo de Saliwanoff puede ser usado para diferenciar aldosas de cetosas ya que las aldosas reaccionan con más lentitud que las cetosas y necesitan un calentamiento prolongado, en esta reacción se observa un complejo resultante rojizo o rosado lo cual indica que la muestra es una aldosa.  Los carbohidratos reaccionan fácilmente con agentes oxidantes suaves como los reactivos de Fehling y Tollens, los cuaes son utilizados para la oxidación de aldehidos a ácidos carboxílicos, sin embargo por reaccionar tanto con aldosas como cetosas no son reactivos adecuados para la diferenciación de éstas.  Los carbohidratos que reaccionan con Fehling y Tollens necesitan un grupo carbonilo real o potencial libre, llamándose azúcar reductor. Los carbohidratos donde el grupo carbonilo potencial está bloqueado indica que no son azúcares reductores,  Las cetosas y aldosas reaccionan con fenilhidracina para dar fenilhidrazonas como cualquier aldehído o cetosa, si se emplea un exceso de ésta la reacción da como producto Osazonas.  Los oligosacáridos y polisacáridos pueden sufrir reacciones de hidrólisis catalizada con ácidos o enzi,as en donde se rompen los enlaces glicosídicos liberando monosacáridos.  El almidón forma un complejo azul cuando reacciona con yodo, debido a la acumulación de las moléculas de éste en los espacios de amilosa, la fracción de ésta absorbe el 18%-20% en peso de yodo.

CUESTIONARIO