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LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA “Universidad Nacional del Callao”

INFORME Nº 04 TEMA: IDENTIFICACION DE ESCHERICHIA COLI

DOCENTE: Ing. Herrera Sánchez Sonia

ALUMNOS:     

Jacinto Bazan Peter García Sarmiento Oscar Quiroz Burgos Melissa Sáenz Rosales Liz Vértiz Del Aguila Carolina

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06 de Mayo de 2015, Bellavista - Callao

IDENTIFICACION DE ESCHERICHIA COLI

Universidad Nacional del Callao Facultad de ingeniería química

ÍNDICE

Introducción……………………………………………………………………………………..3 Objetivos…………………………………………………………………………………..........4 Fundamento teórico………………………………………………………………………….5  Los hongos…………………………………………………………………………….5  Utilización alimentaria y farmacéutica………………………………….5  Morfologías…………………………………………………………………………..5  Habitad…………………………………………………………………………………6  Alimentación…………………………………………………………………………6  Reproducción………………………………………………………………………..6  Variación ambiental………………………………………………………………7 Materiales y Reactivos………………………………………………………………………8 Procedimiento experimental…………………………………………………………….9  Preparación de la solución salina…………………………………………..9  Preparación del agar……………………………………………………………..9  Preparación de la muestra…………………………………………………….9  Proceso de lectura…………………………………………………………………11 Conclusiones…………………………………………………………………………………….13 Recomendaciones…………………………………………………………………………….13 Bibliografía……………………………………………………………………………………….14

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I.

INTRODUCCIÓN

La familia Enterobacteriaceae está formada por más de 20 géneros bacterianos, aproximadamente 120 especies y miles de serotipos (combinación del antígeno somático y el flagelar). Las bacterias de esta familia, son anaerobias facultativas. La mayor parte son de vida libre, algunas son comensales de animales vertebrados e invertebrados. Sin embargo, también pueden ser patógenos causantes de enfermedad. Escherichia coli es la especie bacteriana más común de la microbiota intestinal; se presenta como un comensal del intestino humano pocas horas después del nacimiento. Es raro encontrar cepas comensales asociadas a enfermedad. Empero, existen varios patotipos de E. coli implicados en un amplio espectro de enfermedades agrupados en tres síndromes clínicos. (Iguchi et al., 2009). Escherichia coli y otras bacterias son necesarias para el funcionamiento correcto del proceso digestivo, además de ser responsables de producir vitaminas B y K. El tamaño promedio de los bacilos es de 0.5 µ de ancho por 3 µ de largo, cuando se utiliza la tinción de Gram se tiñen de rojo (gramnegativas). Algunas especies son móviles (por flagelos perítricos), no esporuladas, fermenta la glucosa y la lactosa son catalasa positivos, oxidasa negativos y reduce nitratos a nitritos. El género Escherichiaincluye siete especies (E. adecarboxylata, E. alberti, E. blattae, E. fergusonii, E. hermannii, E. vulneris y E. coli).

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II.

OBJETIVOS

 Realizar adecuadamente mediante el método de cuenta en placa, el número de Escherichia coli viables presentes en productos alimenticios destinados al consumo humano.  Evaluar la calidad microbiológica de un alimento, que sea factible de estar contaminado con estos microorganismos  Comprender el fundamento de todas las etapas del método de detección y cuantificación de Escherichia coli en alimentos.

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III.

MARCO TEÓRICO ESCHERICHIA COLI

La Escherichia coli (E. coli) es una bacteria común que se encuentra en los intestinos de los animales y las personas. Existen muchas cepas de E. coli, y la mayoría resultan inofensivas, sin embargo, existe una variedad peligrosa, la E. coliO157:H7, que produce una poderosa toxina (Shiga) que puede originar graves enfermedades, como el Síndrome Urémico Hemolítico, que puede desencadenar un fallo renal.

CLASIFICACIÓN CIENTÍFICA  Reino: Bacteria  Filo: Proteobacteria

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   

Clase: Gammaproteobacteria Orden: Enterobacteria Género: Escherichia Especie: E. Coli ( E. freundi)

 Nombre binomial : Escherichia Coli CARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS Y TINTORIALES        

Bacilo Gram negativo No forma esporas Móviles (flagelos perítricos) Miden 0.5 𝜇 de ancho y 3 𝜇 de largo. Catalasa positivos Oxidasa negativos Reducen nitratos a nitritos Producen vitamina B y K.

CARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS Y TINTORIALES -

No exigente Fermenta glucosa y lactosa con producción de gas. Es anaerobio facultativo.

ESTRUCTURA ANTIGÉNICA -

Atígeno capsular (Antígeno “K”) Antígeno somático ( Antígeno “O”) Antígeno flagelar (Antígno “H”) Antígenos menores como proteínas de membrana externa y fimbrias.

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ESCHERICHIA COLI- PATÓGENO ENTÉRICO

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ESCHERICHIA COLI Y LA ENFERMEDAD DIARREICA La diarrea aguda es una enfermedad intestinal generalmente infecciosa y autolimitada, se caracteriza por presentar evacuaciones líquidas o de consistencia disminuida, en número mayor a tres en 24 horas y con evolución menor de dos semanas. Diarrea persistente se define como el paso de evacuaciones semilíquidas por más de dos semanas, en tanto que la diarrea crónica se establece a las cuatro semanas. La enfermedad diarreica grave (EDA), es uno de los problemas de salud pública de mayor importancia en el mundo. De acuerdo con estudios efectuados por la Organización Mundial de la Salud (OMS) y el fondo de las naciones unidas para la infancia (UNICEF), las EDA son un problema de salud de la población infantil, principalmente en los países en desarrollo donde se producen anualmente entre 5 a 6 millones de muertes, constituyendo la segunda causa global de mortalidad infantil. E. coli es responsable de aproximadamente 630 millones de casos de diarrea en el mundo y entre 5 a 6 millones de muertes al año, afectando principalmente a la población infantil de países en desarrollo. Además se ha reportado su participación en cerca del 50% de las UTI intrahospitalarias y en el 90% de las infecciones de este tipo en pacientes ambulatorios.

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DIAGNÓSTICO -

Coprocultivos (Medios de cultivos generales o selectivos). Medio Nutritivo, Mueller Hinton o EMB.

-

Pruebas bioquímicas Tipificación serológica Técnicas de recombinación genética Técnica de reacción en cadena de la polimerasa.

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IV.

MATERIALES Y REACTIVOS Placa Petri

Agua destilada

Probeta

Mechero

Cuenta colonias

Termómetro

Incubadora

Muestra(leche asada) y solución salina

Balanza analítica

Medio de cultivo (Agar sabouraud glucosado)

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V.

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

1. PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN SALINA

Preparar en un recipiente usando sal común o de mesa la solución al 0.8% en porcentaje en peso. 2. PREPARACIÓN DEL AGAR

Para la preparación del medio, utilizaremos el agar sabouraud glucosado. A asta solución se calienta en baño maría hasta que alcance una temperatura adecuada entre 45°C a 60°C

3. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA Recogemos 10 ml o 10 gr de muestra problema, en nuestro caso escogimos leche asad

De la solución salina antes preparada recogemos con una pipeta 90ml de esta solución, puesto que la relación de concentración de la muestra debe ser de 0.1 y/o de 0.01

Ahora tendremos que mezclar los 90 ml de la solución con los 10gr de la muestra problema. Una vez realizado disolver hasta donde más se pueda; en caso de quedar partículas sólidas solo trabajar con la solución.

Separamos el medio en un matraz aproximadamente 20ml del agar y lo mantenemos entre la temperatura de 40ºC como mínimo para producir grumos de esta y 60ºC como máximo para no quemar los microorganismo que estén ahí presente

Sacamos 1 ml de toda esta muestra y la colocamos en la placa de vidrio ya esterilizada con 15 o 20 ml de solución del medio, hasta homogeneizar

Dejar cerca de un mechero y tapar la placa, antes de guárdalo en la incubadora volver a cambiar de tapa y darle vuelta

Ponemos la placa en la incubadora y esperamos

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4. PROCESO DE LECTURA Después de dos días aproximadamente retirar la placa de la incubadora y llevarla al dispositivo para poder leerlo con una fuerte luz. Cada punto observado en la placa en un moho que se puede contabilizar dentro de la muestra

De esto obtenemos 1 punto contable que como la concentración estaba en 0.01; entonces la cantidad de microorganismos presente es de 1x102

COLOR transparente FECHA DE MUESTREO TIEMPO DE INCUBACION

RESULTADOS UFC (unidades formadoras de colonias) 1 (uno) 24 de abril del 2015 48 horas

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NUMERO DE HONGOS (UFC/g) 102

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VI.

CONCLUSIONES  Se evaluó la calidad microbiológica de la leche asada, y se obtuvo que se encontraba en el rango permisible (m=10 y M=100; NTS N° 071); por lo que las UFC (unidades formadoras de colonia) fue solamente una.  El color de la colonia formada estuvo de un color claro por lo que se podría concluir que lo que se formo fue levadura y no moho. Ya que los mohos poseen colores más oscuros que este.

 De acuerdo a la UFC encontrada, el alimento analizado estaba en óptimas condiciones para su consumo.

VII.

RECOMENDACIONES

 Al trabajar con el agar este debe estar totalmente disuelto ya que al poseer grumos puede afectar los resultados.  Al momento del sembrado tener presente que el agar debe estar a una temperatura de 40 a 55 °C porque de lo contrario se afectaría al microorganismo que se está tratando de identificar.  Mantenga solo el material requerido sobre la mesa de trabajo, los frascos de reactivos deben permanecer en el estante de madera.  Se debe trabajar en completo orden, para así evitar accidentes en el laboratorio.  Tomar en cuenta las recomendaciones del profesor, las medidas que se deben de usar de los reactivos o tomar en cuenta lo que está en la guía de laboratorio.

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VIII. REFERENCIAS  Frazier W. & Westhoff D. (1994) Microbiología de los Alimentos. 4ª ed. Acribia, España.  Pierson M. & Smoot L. (2001) Indicator Microorganisms and Microbiological Criteria. In: Food Microbiology. Fundamentals and Frontiers. 2nd ed. Doyle M. Beuchat L. & Montville T. (Eds.) ASM Press. USA.  http://www.uv.mx/personal/sbonilla/files/2011/06/escherichia-coli-i.pdf  http://www.bvsops.org.uy/pdf/coli.pdf  http://www.facmed.unam.mx/deptos/microbiologia/bacteriologia/escherichiacoli.html

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