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• Diana230598

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BENEMÉRITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA LICENCIATURA EN QUIMICO FARMACOBIOLOGO

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

PRACTICA 9 Crecimiento de microorganismos gram negativos en diferentes medios de cultivo

PROFESOR

M.S.P. MARIA DE LA CRUZ MENESES SÁNCHEZ

Resultados Cepa: Yersinia Enterocolitica Caracteristicas nutricionales:  No exigente  Fermentadora de glucosa y lactosa con producción de gas  Anaerobio facultativo MEDIO DE CULTIVO

TIPO DE MEDIO

MacConkey

EMB

XLD

INHIBIDORES

INDICADORES

FUENTE DE CARBONO

Diferencial Selectivo

Cristal violeta y sales biliares

Lactosa

Diferencial Selectivo Inhibidor Diferencial Selectivo

Eosina Azul de metileno Sales biliares a alta concentración, citrato y tiosulfato Sales biliares, citrato y Colorante: Verde brillante Colorante: Verde Brillante (inhibe Gram+) Bismuto y el colorante Verde Brillante

Rojo de fenol Diferencial: Lactosa Diferencial: Lactosa Rojo de fenol Diferencial: Lactosa,Sacarosa Xilosa.

Xilosa Lactosa Sacarosa

Rojo neutro Diferencial: Lactosa y tiosulfato Rojo de fenol

Lactosa

Sulfato ferrroso y sulfito indica la producción de SH2

Dextrosa

Por la presencia de sacarosa y el azul de timol y bromotimol como indicadores.

Sacarosa

SS

Selectivo Diferencial

Verde Brillante

Selectivo Inhibidor

Sulfito de Bismuto

Selectivo Diferencial

TCBS

Selectivo

VIRE ÁCIDO

DEL NEUTRO

Cepa: Escherichia coli Caracteristicas nutricionales:  No exigente

INDICADOR BASICO

Altas concentraciones de tiosulfato sódico, citrato férrico y cloruro sódico que inhiben a la mayoría de las enterobacterias.

Lactosa Sacarosa

Lactosa Sacarosa

 

Fermentadora de glucosa y lactosa con producción de gas Anaerobio facultativo

MEDIO DE CULTIVO

TIPO DE MEDIO

MacConkey

Diferencial Selectivo

EMB

Diferencial Selectivo Inhibidor

XLD

Diferencial Selectivo

SS

Selectivo Diferencial

Verde Brillante

Selectivo Inhibidor

Sulfito de Bismuto

Selectivo Diferencial

TCBS

Selectivo

VIRE ÁCIDO X (Lactosa +) Colonias rosa X (Color verde fosforescente) Fermentador de Lactosa X (Amarillo) Desecha NH3

X (Lactosa +) colonias rojas X

X (Producción de ácido)

X Sacarosa + (Amarillo)

DEL NEUTRO

INDICADOR BASICO

INHIBIDORES

INDICADORES

FUENTE DE CARBONO

Cristal violeta y sales biliares

Rojo de fenol Diferencial: Lactosa Diferencial: Lactosa

Lactosa

Sales biliares a alta concentración, citrato y tiosulfato Sales biliares, citrato y Colorante: Verde brillante Colorante: Verde Brillante (inhibe Gram+) Bismuto y el colorante Verde Brillante

Rojo de fenol Diferencial: Lactosa,Sacarosa Xilosa.

Xilosa Lactosa Sacarosa

Rojo neutro Diferencial: Lactosa y tiosulfato Rojo de fenol

Lactosa

Sulfato ferrroso y sulfito indica la producción de SH2

Dextrosa

Altas concentraciones de tiosulfato sódico, citrato férrico y cloruro sódico que inhiben a la mayoría de las enterobacterias.

Por la presencia de sacarosa y el azul de timol y bromotimol como indicadores.

Sacarosa

Eosina Azul de metileno

Lactosa Sacarosa

Lactosa Sacarosa

Cepa: Salmonella typhi Caracteristicas nutricionales:  Anaerobio facultativo MEDIO DE CULTIVO

TIPO DE MEDIO

MacConkey

Diferencial Selectivo

EMB

Diferencial Selectivo Inhibidor

XLD

Diferencial Selectivo

SS

Selectivo Diferencial

Verde Brillante

Selectivo Inhibidor

Sulfito de Bismuto

Selectivo Diferencial

TCBS

Selectivo

VIRE ÁCIDO

DEL NEUTRO

Neutro: colonias transparentes No fermentan la lactosa Ácido: colonias rosas o rojas (no fermentan la lactosa, pero descarboxilan la lisina, suben el pH) con punto central negro (por producción de sulfuro). Ligeramente ácido Colonias: con punto central negro (producen sulfuro). Ligeramente Ácido: colonias rosas Ácido: colonias con bordes claros y punto central negro. Fermentan la dextrosa Ácido: Colonias opacas y amarillas

INDICADOR BASICO

INHIBIDORES

INDICADORES

FUENTE DE CARBONO

Ligeramente Básico: colonias transparentes No fermenta la lactosa

Cristal violeta y sales biliares

Rojo de fenol Diferencial: Lactosa

Lactosa

Eosina Azul de metileno

Diferencial: Lactosa

Lactosa Sacarosa

Sales biliares a alta concentración, citrato y tiosulfato

Rojo de fenol Diferencial: Lactosa, Sacarosa Xilosa.

Xilosa Lactosa Sacarosa

Sales biliares, citrato y Colorante: Verde brillante

Rojo neutro Diferencial: Lactosa y tiosulfato

Lactosa

Colorante: Verde Brillante (inhibe Gram+)

Rojo de fenol

Lactosa Sacarosa

Bismuto y el colorante Verde Brillante

Sulfato ferrroso y sulfito indica la producción de SH2

Dextrosa

Altas Por la concentraciones presencia de de tiosulfato sacarosa y el

Sacarosa

Fermentan la sacarosa

sódico, citrato férrico y cloruro sódico que inhiben a la mayoría de las enterobacterias.

azul de timol y bromotimol como indicadores.

Conclusión La mayoría de las bacterias patógenas requieren nutrientes complejos similares en composición a los líquidos orgánicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos medios de cultivo es una infusión de extractos de carne y Peptona a la que se añadirán otros ingredientes. Así mismo es importante conocer el crecimiento que tienen estos microorganismos patógenos en diferentes medios de cultivo ya que así podemos conocer sus características. Bibliografía Krikorian, A. D. (1991). Medios de cultivo: generalidades, composición y preparación. Cultivo de tejidos en la agricultura: fundamentos y aplicaciones. Cali: CIAT, 41-77. Bou, G., Fernández-Olmos, A., García, C., Sáez-Nieto, J. A., & Valdezate, S. (2011). Métodos de identificación bacteriana en el laboratorio de microbiología. Enfermedades infecciosas y microbiología clínica, 29(8), 601-608. Huertas, R. A. P. (2010). Bacterias ácido lácticas: Papel funcional en los alimentos. Biotecnología en el sector agropecuario y agroindustrial, 8(1), 93-105.

Cuestionario 1. Menciona la característica de la pared celular de las bacterias Gram Negativas La envoltura celular de las bacterias gramnegativas está compuesta por una membrana citoplasmática (membrana interna), una pared celular delgada de peptidoglicano, que rodea a la anterior, y una membrana externa que recubre la pared celular de estas bacterias.

2. Da 5 ejemplos de microorganismos Gram Negativo       

Neisseria meningitidis. Neisseria gonorrhoeae. Escherichia coli. Salmonella typhi. Salmonella enteritidis. Haemophilus influenzae. Bordetella pertussis.

 Brucella abortus.  Francisella tularensis.  Pasteurella multocida

3. ¿Qué componentes deben estar presentes en un medio de cultivo? Agua, sustancias orgánicas (azúcares, aminoácidos, ácidos grasos, etc)

4. Menciona el fundamento de Mac Conkey. El fundamento de este medio se puede explicar a través de la descripción de sus componentes, pues cada uno posee una finalidad que determina una propiedad del mismo. Sales biliares y cristal violeta En este sentido, el agar MacConkey tiene una composición compleja. En primel lugar contiene sales biliares y cristal violeta. Estos elementos se encargan de inhibir el crecimiento de bacterias Gram positivas y algunos bacilos Gram negativos exigentes. A su vez favorece el desarrollo de los bacilos Gram negativos que no son afectados por estas sustancias. Por ello es un medio selectivo. Se dice que es ligeramente selectivo en comparación a otros medios que igualmente inhiben el crecimiento de bacterias Gram positivas y también de la mayoría de las bacterias Gram negativas. Es extremadamente selectivo para un determinado género, como por ejemplo el agar TCBS para aislamiento de Vibrio cholerae y otras especies similares halófilas y alcalófilas. Peptonas, polipectonas y lactosa Contiene sustancias que aportan los nutrientes necesarios a los microorganismos que se desarrollan en este medio, como las peptonas, polipectonas y la lactosa. La lactosa es el punto clave para que el medio sea un medio diferencial, pues los microorganismos que poseen la capacidad para fermentar la lactosa desarrollaran colonias rosadas fuertes. Algunas bacterias pueden fermentar la lactosa lentamente o débilmente, desarrollando colonias color rosado pálido y siguen siendo lactosa positiva. Las que no fermentan la lactosa utilizan las peptonas como fuente de energía, produciendo amoníaco, alcalinizando el medio. Por ello las colonias que se originan son incoloras o transparentes. Indicador de pH El cambio de color se logra a través de otro compuesto esencial que posee el agar MacConkey. Este compuesto es el indicador de pH, que en este caso es el rojo neutro. La fermentación de la lactosa genera la producción de ácidos mixtos. Los mismos acidifican el medio a un pH por debajo de 6,8. Esto hace que el indicador de pH vire hacia a una tonalidad rosada intenso. La intensidad del color puede variar dependiendo el pH final. Agua destilada, cloruro de sodio y agar

Por otra parte, contiene agua destilada y cloruro de sodio que le dan la hidratación y equilibrio osmótico al medio. Finalmente, el medio contiene agar, que es la base que proporciona la consistencia de medio sólido. El medio agar MacConkey preparado debe tener un pH final ajustado a 7,1 ± 0,2.

5. ¿Qué otros medios de cultivo, diferentes a los empleados en esta práctica, pueden ser utilizados para el crecimiento de Gram Negativos?