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DETERMINACIÓN DE GLUCOSA EN SANGRE [Método Enzimático] 1.

INTRODUCCIÓN

Hormonas que intervienen en la regulación de [Glucosa] GLUCAGÓN Es producida por las células alfa de los islotes de Langerhans en el páncreas endocrino. Es una hormona hiperglicemial ya que se incrementa en la sangre al disminuir el nivel de glucosa, cuando llega al hígado por la vena porta causa la glucogenólisis (degradación de glucógeno para obtener glucosa). Cuando la necesidad de glucosa es muy grande en nuestro organismo y no se dispone de la suficiente cantidad en la dieta, se puede formar glucosa mediante la gluconeogénesis (obtención de glucosa a partir de vías alternativas como: lactato, aminoácidos glicerol, ácidos grasos, cuerpos cetónicos, etc.). Este proceso tiene lugar en las células hepáticas, células renales, células adiposas y en el tejido muscular. También es importante diferenciar el concepto de glucogénesis, que es la formación de glucosa, en general. INSULINA Hormona secretada por las células beta del páncreas endocrino (islotes de Langerhans). Se le considera hipoglicemiante, ya que cuando los niveles de glucosa en sangre se incrementan también se incrementa la insulina,esto se conoce como repuesta directa a la hiperglicemia. Su concentración en sangre es similar a la de la glucosa sanguínea. 2.

FUNDAMENTO

Se basa en que la glucosa es oxidada enzimáticamente por la glucosa oxidasa a ácido glucónico y agua oxigenada.

C6H12O6 + O2 + H2O

Ácido Glucónico + H2O2

Esta, en presencia de una peroxidasa produce la copulación oxidativa del fenol con la 4-amino fenazona, dando lugar a la formación de un cromógeno rojo cereza que es proporcional a la cantidad de glucosa presente.

H2O2 + Ácido Parahidroxibenzoico

Cromógeno rojo – cereza + H2O

A este proceso se le denomina sistemas de relación acopladas. 3.

PROCEDIMIENTO

Preparar la siguiente batería, corriendo solo una vez el Tubo Blanco y el Tubo Estándar. Suero Diluido (ml.) Estándar de Glucosa (ml.) Reactivo de Trabajo (ml.)

Tubo M.P. 0.01

Tubo Estándar ---

Tubo Blanco ---

---

0.01

---

1

1

1

Incubar en baño maría a 37ºC durante 10 minutos. Retirar del baño maría y luego agregar, según la tabla: Agua Destilada (ml.)

Tubo M.P. 2

Tubo Estándar 2

Tubo Blanco 2

Mezclar bien la solución. Leer las ABSs para cada unos de los tubos en el espectrofotómetro a 505 nm. Encontrar la [Glucosa] en mg/dL de las muestras de suero.

4.

RESULTADOS

[Estándar de Glucosa] = 4 mg/dL [Glucosa] STD = 100 mg/dL ABSMP = 1.392 ABS ESTANDAR = 0.861

Tubo M.P Cromógeno rojo – cereza Presencia de glucosa

5.

Tubo Estándar Cromógeno rojo – cereza Presencia de glucosa

Tubo Blanco Reactivo de trabajo

CÁLCULOS

[Glucosa] = ( 100 mg/dL / ABS ESTANDAR) x ABS MP [Glucosa] = ( 100 mg/ dL / 0.861 ) x 1.392 [Glucosa] = 161.672 mg/dL 6.

VALORES NORMALES

En ayunas: [Glucosa] = de 60 mg/dL a 110 mg/dL 7.

IMPORTANCIA CLÍNICA

Alteraciones y patologías en el metabolismo de los carbohidratos. -

Hiperglicemia: estado biológico donde los niveles de glucosa sanguínea está por encima de los valores normales.

-

Hiperglicemia Fisiológica: niveles bajos de glucosa en sangre debido a esfuerzos físicos intensos, exitación psíquica y emocional.

-

Diabetes mellitus: es una condición de hiperglicemia patológica. Se caracteriza por el aumento de glucosa durante el ayuno, por encima de 140 mg/dL y a cualquier hora del día encima de 200 mg/dL. Algunas características son: glucosuria, poliuria, polidipsia y polifagia. Las consecuencias mas saltantes de la enfermedad son los trastornos vasculares, ceguera, insuficiencia renal y gangrenas.

-

Hipoglicemia: cuando los niveles de glucosa alcanzan valores de 40 mg/dL a 45 mg/dL. Puede presentarse durante el ayuno o la actividad física intensa.