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• Ana Lucia Alban Vargas

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COLORACIÓN COMPUESTA Son aquellas en que se emplean más de un colorante. La más común es la Gram, que fue creada por el bacteriólogo danés Christian Gram (1853-1938), que desarrolló la técnica en 1884. Se utiliza tanto para poder referirse a la morfología celular bacteriana, como para poder realizar una primera aproximación a la diferenciación bacteriana COLORACION GRAM OBJETIVO.- Reconocer los dos grandes grupos de bacterias existentes mediante el método de coloración diferencial, considerándose bacterias gram positivas a las que se visualizan de color morado, y bacterias gram negativas a las que se visualizan de color rosa, rojo o grosella. MATERIAL.Cultivos en medio liquido o solidos de: 

Escherichia coli



Bacillus cereus



Proteus vulgaris



staphylococcus albus



streptococcus



Cristal violeta o violeta geciana



Lugol



Alcohol-cetona



Safranina



Asas de siembra



Aceite de inmersión



Porta objetos desengrasados



Pizetas con agua destilada



Microscopio

PROCEDIMIENTO 1. Colocar una gota de medio líquido con bacterias sobre un portaobjetos limpio y desengrasado, en caso de tratarse de una muestra sólida, colocar previamente una gota de agua destilada estéril sobre portaobjetos, luego extender la muestra sobre el área de un cm2. 2. Fijar la muestra al aire o pasándola rápidamente por encima de la llama del merchero. 3. Después de la fijación de la muestra cubrirla con la solución fenicada de violeta de genciana o la de Hucker. 4. Tiempo: 30 a 60 segundos, aproximadamente. 5. Lavar con agua a chorro. 6. Cubrir con Lugol y dejar actuar de 2 a 3 minutos. 7. Lavar. 8. Decolorar con alcohol, solo o con alcohol acetona hasta que ya no se desprenda más colorante de la lámina. 9. Lavar. 10. Contrastar con safranina (10 a 30 segundos) 11. Lavar, secar y observar a inmersión.

Al final de la coloración según se verá al microscopio, los gérmenes pueden quedar ceñidos de violeta o rojo. Los que toman el color violeta se llaman gram positivos y los que toman color rojo se llaman gram negativo. Los gérmenes gran negativos, son los que han cedido al color violeta por acción del alcohol acetona y por haber quedado sin coloración, han estado aptos para tomar el segundo colorante que es el rojo. La acción del lugol en esta coloración es conseguir una mayor fijación del violeta pro parte de los gérmenes gram postivio por unión del colorante con el yodo del lugol. En términos generales son gram positivos todos los cocos a excepción de Neisseria y son gram negativos todos los bacilos a excepción de los esporulados los Mycobacterium y Corynebacterium. La técnica original de Gram ha sufrido muy diversas modificaciones, una de las ellas consiste en el empleo de safranina.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Figura 1. Staphylococcus ssp en Coloracion de Gram.Bacterias de color violeta (Gram positivas). En la figura se observó cocos gram positivos provenientes del staphylococcus (en griego significa racimo de granos) que se encuentran en racimos, pares y e cadenas cortas con forma redonda (coco), esta característica está íntimamente ligada a la estructura de la envoltura celular por lo que refleja un tipo natural de organización bacteriana. La envoltura celular de las bacterias Gram-positivas comprende la membrana citoplasmática y una pared celular compuesta por una gruesa capa de peptidoglicano, que rodea a la anterior. La pared celular se une a la membrana citoplasmática mediante moléculas de ácido lipoteicoico. La capa de peptidoglicano confiere una gran resistencia a estas bacterias y es la responsable de retener el tinte durante la tinción de Gram al poseer una gran proporción de este polímero complejo (mureína) la cual no la hace susceptibles a la acción del solvente orgánico, sino que este actúa deshidratando los poros cerrándolos, lo que impide que pueda escaparse el complejo cristal violeta/yodo, y manteniendo la coloración azul-violácea . A diferencia de las Gram-negativas, estas bacterias no presentan una segunda membrana lipídica externa.

CONCLUSIONES -La tinción de Gram permite conocer la morfología celular, el tamaño, la forma y su clasificación taxonómica (Gram positivos o Gram negativos) de acuerdo al color que tornan las bacterias después de la tinción, sin embargo no permite conocer la especie o género de la bacteria al cual pertenece. -La coloración reacciona con la célula bacteriana, pero no reacciona con su medio exterior. -La Tinción es importante para la microbiología debido a que proporciona contraste entre el microorganismo y el medio que lo rodea, permitiendo diferenciar varios tipos morfológicos. -Permite el estudio de las estructuras internas de la célula bacteriana, tales como paredes celulares, vacuolas o cuerpos celulares. Permite el empleo de mayores amplificaciones.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

Díaz

Camilo

(2011).

Definición

de

tinción.

[En

línea].

Disponible:

http://es.scribd.com/doc/52811425/Tinciones-en-Microbiologia-Seminario. Citado: 19/11/2013. Martinez Roberto. (2009). Bacteria gram positiva [En línea]. Disponible: http://martinezroberto.blogspot.com/. Citado: 19/10/2013. Wikipedia

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Tinción

de

Gram.

[En

http://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n_de_Gram. Citado: 19/11/2013

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