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• Abraham David Calvo Arvayo

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UNIVERSIDAD DE SONORA DIVISIÓN DE CIENCIAS BIOLÓGICAS Y DE LA SALUD

LICENCIATURA EN MEDICINA

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA

PRÁCTICA 2 DETERMINACIÓN DE CONCENTRACIÓN DE GLUCOSA EN SUERO

ALUMNOS: CALVO ARVAYO ABRAHAM DAVID CARDONA SAMANIEGO ADILENE HERRERA BARRIOS CRUZ DENIA QUIÑÓNEZ BENZE JOSÉ ANTONIO

GRUPO: Z02 - SEGUNDO SEMESTRE

HERMOSILLO, SONORA

08 DE MAYO DEL 2014

OBJETIVO

Aprender a cuantificar, mediante un método colorimétrico, la concentración de glucosa de una muestra problema (suero) utilizando el método colorimétrico enzimático para glucosa sérica de RANDOX®.

INTRODUCCIÓN

La glucosa es el carbohidrato de mayor importancia fisiológica y biomédica. Este hidrato de carbono es rápidamente asimilado en el intestino y transportado hacia los tejidos, principalmente el hígado, a través del torrente sanguíneo. A partir de la glucosa se pueden formar los demás carbohidratos. La glucosa como cualquier carbohidrato es la vía más rápida o de fácil asimilación y/o utilización como fuente de energía. La Diabetes mellitus es la principal patología donde el desorden en los niveles de glucosa es su característica principal. Entre los métodos enzimáticos más usados para cuantificar glucosa en suero y plasma se encuentra el método de la glucosa-oxidasa, que se caracteriza por su elevada especificidad. En este método, la glucosa es oxidada por la enzima glucosa oxidasa, generando ácido glucurónico y peróxido de hidrógeno. El peróxido de hidrógeno formado reacciona con un aceptor de oxígeno (como el 2,4diclorofenol, 4-aminofenazona, 4-aminopiridina, ortodianisadina) para formar un indicador colorido. Cuando se usa como aceptor de oxígeno a la 4aminofenazona, se produce un color rojo-violeta. Este método no es afectado por la presencia de ácido úrico, ácido ascórbico, glutation, anticoagulantes, bilirrubina o creatinina a concentraciones fisiológicas, por lo que puede ser utilizado en todas las aplicaciones clínicas en las que se desee estimar la concentración de glucosa sérica y/o plasmática.

MATERIALES

Colorímetro Celdas de plástico de 1 cm Micropipetas de 0.01 a 100 µL, de 100 a 1000 µl y puntas Un vaso de precipitados de 250 mL 1 pipeta serológica de 1 mL 4 tubos de 13 x 100 Gradilla para tubos Mezclador (Vórtex)

REACTIVOS Y MUESTRAS PROBLEMAS 1. Reactivo Glucosa Oxidasa: Glucosa oxidasa ≥ 1.5 kU/L, peroxidasa ≥ 1.5 kU/L y 4-aminofenazona, en amortiguador de fosfato 0.1 M/L, pH 7 y fenol 11 mM/L. Contiene también azida de sodio 0.02% 2. Solución patrón de glucosa: 100 mg/100 mL (5.55 mM/L). 3. Suero o plasma problema

MÉTODO

1. Etiquete un tubo de ensaye con el nombre “problema” y otro con “patrón”. 2. Agregue 1 mL del reactivo de glucosa oxidasa a los dos tubos de ensaye. 3. Aplique 0.01 mL de la muestra problema y patrón, a los tubos correspondientes mezcle e incube durante 9 minutos a 15-25°C. 4. Determine la OD500 del tubo problema y del patrón, contra el blanco de reactivo antes de que transcurran 10 min y estime la concentración de glucosa en la muestra problema con las siguientes ecuaciones: 5. Compare los valores que obtuvo con los Valores Normales en suero para adultos: 70 -100 mg/dL.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Al realizar nuestra práctica obtuvimos como resultado 37.07 mg/dL de glucosa en nuestra muestra siendo que los rangos normales son de 70 a 100 mg/dL. Según el kit usado. Según las fuentes consultadas, los niveles de glucosa en sangre por debajo de 70 mg/dL pueden resultar peligrosos. Al comparar nuestros resultados con los demás equipos que se encontraban en la práctica nos dimos cuenta que los resultados que obtuvieron ellos también eran muy bajos así que planteamos 2 hipótesis: 1. La muestra ya tenía tiempo(más de 24 horas) , por lo cual los niveles de glucosa se vieron alterados. 2. Un procedimiento de la práctica no se hiso adecuadamente. Al final optamos por la segunda hipótesis pues nos dimos cuenta que no agitamos bien el plasma junto con el reactivo. Esto lo pudimos comprobar al comparar los resultados con la segunda partición del laboratorio pues ellos obtuvieron rangos dentro de los normales e incluso algunos por arriba de estos.

CONCLUSIÓN

Con la práctica realizada podemos concluir que para calcular la concentración de glucosa en suero se debe seguir el procedimiento estrictamente ya que si se cometen algunos errores, los valores resultantes pueden salir alterados, como nos ocurrió a nosotros en el laboratorio; además se deben de tener en cuenta otros factores que podrían alterar los resultados, como en este caso el tiempo que tiene el suero a analizarse, entre otros aspectos. Este es un procedimiento que es de gran importancia conocer, puesto que en un futuro, cuando estemos ejerciendo como médicos, es uno de los principales y más frecuentes estudios de los que ocuparemos hacer uso.

BIBLIOGRAFÍA

http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003482.htm http://www.netdoctor.es/articulo/niveles-glucosa-en-sangre