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UNIVERSIDAD NACIONAL FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES Y MATEMÁTICA ESCUELA DE BIOLOGIA

ESTUDIO DE LAS BACTERIAS Alumnos:  Aranguren Díaz Lizandro  Príncipe Morillo Fabiola  Vega Chozo Karolyn

Docente: Erik Mercado

2015

I.

INTRODUCCION

La morfología de la mayoría de las células bacterianas es tal que resultan difíciles de ver con el microscopio óptico. La principal dificultad es la falta de contraste entre la célula y el medio que la rodea. El modo más simple de aumentar el contraste es la utilización de colorantes.

II.

MARCO TEORICO

Las células procarióticas se caracterizan por su estructura muy sencilla, no presentan envoltura nuclear y ningún tipo de endomembranas, pertenecen a este grupo las bacterias y las algas azul-verdosas. Algunas bacterias son dañinas al organismo, otras son benéficas y son usadas en la industria, tal es el caso de aquellas que acidifican la leche y permiten la producción del yogurt. Las bacterias son seres procarióticos, unicelulares que carecen de envoltura nuclear, en algunas circunstancias forman esporas para protegerse del medio. Presentan formas esféricas, alargadas o espiraladas. Pueden presentarse aisladas o agrupadas y tienen como medio de locomoción los flagelos en número variable. Hay bacterias que son patógenas para el hombre, animales y plantas, otras son saprófitas, que se las encuentran en materias en descomposición y otras son inocuas y benéficas, tales como las bacterias nitrificantes, que se las encuentra en diversos medios como el agua, aire, tierra y en otros. ¿Qué es la tinción Gram? La tinción de Gram es una técnica de coloración de contraste; fue descubierta por Hans Christian Gram en (1884). El fundamento de la técnica se hace con base a las paredes celulares de las bacterias. Gram positivas y Gram negativas. La coloración Gram es de amplia utilidad para clasificar a las bacterias en Gram positivas y Gram negativas. Las bacterias Gram positivas son aquellas que se tiñen de azul oscuro o violeta, esta característica química está íntimamente ligada a la estructura de la envoltura celular. Las bacterias Gram negativas son aquellas que se tiñen de un color rosado tenue o rojo.

Las bacterias Gram-negativas presentan dos membranas lipídicas entre las que se localiza una fina pared celular de peptidoglucanos, mientras que las bacterias Gram-positivas presentan sólo una membrana lipídica y la pared de peptidoglucanos es mucho más gruesa. Al ser la pared fina, no retiene el colorante durante la tinción de Gram. (Figura1)

Figura 1 Pared Gram + capa densa y uniforme de 200 a 800 A) ácidos teicoicos polisacáridos proteínas (pocas veces) glicopéptido (50% del peso seco) Pared Gram capa interna delgada de 20 a 30 A cubierta por capas externas de densidad menor) lipopolisacáridos lipoproteínas proteínas

glicopéptido (10% del peso seco)

III.

MATERIALES LABORATORIO

-

IV.

Microscopios Mecheros de alcohol o de Bunsen Aceite de inmersión Palitos de dientes Cristal de Violeta Safranina Láminas porta y cubreobjetos Lugol Agua destilada Alcohol cloroformo Azul de metileno

BIOLOGICO -

Muestra de sarro dentario

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Yogurt

METODOS a) Coloración de Gram de Bacterias del sarro dentario y yogurt:

1. 2. 3. 4. 5. 6. 7.

Hacer una extensión de la muestra en estudio sobre una lámina portaobjeto. Fijar el preparado a la llama de un mechero. Cubrir con la solución Cristal de violeta por 1 minuto. Lavar con agua corriente. Cubrir la preparación con Lugol durante 30 segundos o 1 minuto. Lavar con alcohol hasta que este no arrastre colorante. Lavar con agua corriente.

8. 9. 10. 11.

Agregar Safranina por 30 segundos o 1 minuto. Secar al ambiente o con un mechero. Colocar una gota de aceite de inmersión y observar al microscopio con la lente de inmersión. Esquematizar.

b) Coloración Gram de bacterias de cultivo

V.

RESULTADOS

Productos que se utilizan

Reacción y coloración de las bacterias GRAM +

1) Cristal violeta Células color violeta 2) Lugol solución Se forma el complejo CV-I. Las células iodada continúan teñidas de color violeta.

GRAM Células color violeta Se forma el complejo CV-I. Las células continúan teñidas de color violeta.

3) Alcohol

Se deshidratan las paredes celulares. Se Eliminación por extracción de grasas de contraen los poros. Disminuye la las paredes celulares. Aumenta la permeabilidad. El complejo CV-I no sale de porosidad. El complejo CV-I se separa de las células que continúan teñidas de color la célula. violeta.

4) Safranina

Células no decoloradas; quedan teñidas de Células decoloradas; se tiñen de color color violeta. rosado.

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Muestra: Sarro dental Coloración: Cristal de violeta Aumento: 100X Descripción: Se observan estreptococos gram +

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Muestra: yogurt Coloración: Cristal de violeta Aumento: 100X Descripción: Se observan Streptococos gram + que son como cadenas y cocos.

Muestra: Colonia Coloración: Gram Aumento: 100X Descripción: Se observan Bacilos gram -

VI.

DISCUSION

VII.

-

Al fijar la muestra con calor es esencial para que las células se adyeren al portaobjetos, ya que él calor desnaturaliza las proteínas y suelen matar microorganismos.

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El paso critico de este procedimiento Gram es cuando se va decorar con alcohol ya que se tiene que lograr que la preparación salga exenta de colorante por que los Gram + no se decoloran y los Gram – si y esta diferencia es porque las Gram + sufren con el alcohol una deshidratación, los poros se contraen y dificultan la salida del complejo yodo-azul en el interior de la célula, sin embargo en el caso de los Gram- el alcohol desorganiza la capa lipídica más externa y elimina el color violeta de la delgada capa de peptidoglucano.

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La diferencia que se observa en la resistencia a la decoración se debe a que la membrana externa de las Gram – es soluble en solvente orgánico

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Por investigaciones, la muestra que realizamos la tinción Gram del sarro dental del cual observamos cocos gram +, en un principio del nacimiento la flora bucal es simple y generalmente son bacteria aerobias pero cuando aparecen los primeros dientes se pueden observar que se suma a esta flora los anaeróbicos.

CONCLUSION -

Tinción diferencial que emplea secuencialmente dos colorantes para distinguir 2 tipos de microorganismos en función de sus diferencias en la pared celular

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Las bacterias Gram positivas se tiñen de azul violeta mientras los Gram negativas se tiñen de color rojo o rosado.

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Los bacilos son alargados y dan consistencia al yogurt.

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Los streptococos son cadenas de cocos y acidifican el yogurt.

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Método de gran utilidad pero debe ser evaluado con precaución: Al decorar por un tiempo muy prolongado se puede correr el riesgo de que todas bacterias Gram + se decoloren y se tiñen posteriormente como las Gram -

VIII.

CUESTIONARIO 1. ¿Qué función cumple el Lugol en la coloración de Gram? Funciona como fijación (mordiente) de la preparación, y también actúa sobre la pared de las bacterias Gram (+) de tal manera que al agregar el decolorante (alcoholcetona) no se destiñan las bacterias que ya se tiñeron, al agregar la Safranina, las restantes bacterias se teñirán, siendo estas últimas Gram (-). 2. ¿A que deben su color las bacterias Gram negativas? Esta característica está íntimamente ligada a la estructura didérmica dada por la envoltura celular, pues presenta doble membrana celular, una externa y la otra citoplasmática, lo que refleja un tipo natural de organización bacteriana. 3. ¿Qué forma presentan los Streptococcus? ¿Por qué? Los estreptococos son organismos anaerobios facultativos y Gram Positivos que a menudo aparecen formando cadenas o por pares. 4. ¿Qué forma presentan los Staphylococcus? ¿Por qué? Los estafilococos son granos que se presentan en forma de racimo de uvas. 5. ¿Cuál es la composición de la pared bacteriana? Tanto las bacterias Gram positivas como las Gram negativas poseen una pared celular de peptidoglucanos que les confieren su forma característica y les provee de protección mecánica. 6. ¿Cuál es el fundamento de la coloración de Gram? Se fundamenta en la afinidad que poseen ciertas bacterias de retener colorantes y resistir a la decoloración. Esto se debe principalmente a la diferencia de las paredes celulares de bacterias Gram positivas y Gram negativas, ya que las G+ tienen una pared celular más gruesa, con mayor contenido de peptidoglucanos y ácido teicoico, en cambio las G- poseen una cantidad menor de peptidoglucanos en su pared y no tienen ácido teicoico 7. ¿Por qué se usa alcohol-cloroformo en la preparación? Se usa como decolorante, y al usar el alcohol cetona los organismos Gram positivos no se decoloran, mientras que los Gram negativos sí lo hacen, para poner de manifiesto las células Gram negativas se utiliza una coloración de contraste. 8. ¿Por qué la observación se hace a 100X? Es debido a su tamaño, y debe usarse el aceite inmersión.

IX.

BIBLIOGRAFIA

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Aulton Michael E. 2004. Ciencia y diseño de formas farmacéuticas. 2° edición, Ed. Elsevier España.

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Rant W. D., 1989. Microbiología Ambiental. Ambientes extremos. Ed. ACRIBIA Capitulo 3.

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Revista Medicina y Laboratorio (Medellín). Mecanismos de Resistencia bacteriana a los antibióticos. Vol. 09, No. 07-08, Jul.-Ago. 2000 p. 371-38.

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Baumann, L.; M. Baumann; M. Mendel y R. Allen. 1972. Taxonomy of aerobic marine eubacteria. J. Bacteriol. 110: 402-429.