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• Marco Ruíz Alonso

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Ruiz Alonso Marco Antonio. Solano Valeriano Deniss.

Grupo 3IM1. Sección: 1 Fecha de entrega: miércoles 29 de agosto de 2018. Reacción de la ninhidrina: Es una reacción que se caracteriza por la detección de grupos amino libres en pH alcalino es decir; reacciona con todos los aminoácidos con carbono alfa cuyo pH es alcalino, dando una coloración que va de azul a violeta, este producto colorido (llamado azul de Ruhemann).Esta prueba es positiva tanto para proteínas como para aminoácidos. En aquellos casos donde no da positiva la prueba de Biuret y da positiva la de ninhidrina, indica que no hay proteínas, pero si hay aminoácidos libres.

REACCIONES DE AMINOÁCIDOS Y PROTEÍNAS. Introducción: Las proteínas son bio-macromoleculas, de un alto peso molecular constituidas por aminoácidos unidos entre sí por enlaces peptídicos. Por su compleja estructura para la identificación y cuantificación de aminoácidos así como proteínas, tienen como fundamento las características químicas que les confieren sus grupos R de reaccionar o no con determinados reactivos por lo que reflejan las propiedades químicas de los residuos de aminoácidos mediante reacciones coloridas que dependen de la existencia de un aminoácido en específico de ellas.

Reacción de Hopkins-Cole: Es específica del grupo indol característico del Triptófano. El anillo del indol se hace reaccionar con ácido Glioxálico en presencia de ácido Sulfúrico concentrado para formar un compuesto violeta que se forma en la interface entre la solución de proteína y el ácido sulfúrico. La reacción de Hopkins Cole es positiva sólo para las proteínas que contienen Triptófano.

Objetivos: 

Identificar la presencia de aminoácidos con grupo R específico que constituyen a una proteína a través de reacciones coloridas.

Reacción de Millón: Es específica para el grupo fenólico por lo tanto, la dan positiva todas las sustancias que poseen esta función, como la Tirosina y todas las proteínas que contengan Tirosina. El primer paso de la reacción de Millón consiste en la nitración del anillo fenólico de la Tirosina, por el ácido Nítrico del reactivo. La Tirosina nitrada forma complejos con los iones Mercurosos y Mercúricos del reactivo produciendo un precipitado rojo o una solución roja, ambos resultados positivos. Cualquier sustancia con un grupo fenólico dará positiva la reacción de Millón y puede interferir con la detección de Tirosina.

Resultados:

Gelatina. Peptona. Albumina. Aspartame. Tirosina. Triptófano. Fenilalanina. Cisteína. Agua.

Gelatina. Peptona. Albumina. Aspartame. Tirosina. Triptófano. Fenilalanina. Cisteína. Agua.

Reacción para grupo – SH. + + No utilizo. No utilizo. No utilizo. No utilizo. + Reacción de Millon. + + + No utilizo. + No utilizo. No utilizo. -

Reacción de la Ninhidrina. + + + No utilizo. + + + No utilizo. Reacción Xantoproteica. + + + No utilizo. + + No utilizo. -

Reacción de HopkinsCole. + + No utilizo. No utilizo. + No utilizo. Reacción del Biuret. + + + No utilizo. -

Reacción Xantoprotéica: Algunos aminoácidos como Fenilalanina, Tirosina y Triptófano, tienen anillo aromáticos derivados de benceno y por ello tiene las propiedades químicas del benceno. Una de estas propiedades es la reacción de nitración del anillo bencénico con ácido Nítrico concentrado. Los anillos Benceno de Tirosina y Triptófano están activados debido a un sustituyente en el grupo bencénico y reaccionan fácilmente, mientras que el benceno de la Fenilalanina no tiene sustituyentes que lo activan y no reacciona. Reacción del Biuret: Es una reacción en general para proteínas con más de dos enlaces peptídicos y tres o más constituyentes de aminoácidos. El reactivo de Biuret contiene CuSO4 en solución acuosa alcalina (de NaOH). La reacción se basa en la formación de un compuesto de color violeta, debido a la formación de un complejo de coordinación entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrógeno que forma parte de los enlaces peptídicos.

Significado de los signos en cada una de las pruebas. Prueba positiva (+).

Interpretación y conclusión de cada una de las reacciones.

Prueba negativa (-).

Reacción del plomo para la cisteína: Es una prueba específica para identificación de aminoácidos con grupos sulfhídrico, por lo cual la peptona, albumina y la cisteína, experimentalmente nos resultaron positivas es decir en su cadena de las moléculas se encuentra un tiol por lo tanto concluimos que habrá una precipitación en color negro en proteínas que en su cadena tenga un grupo –SH.

Fundamentos de las Reacciones: Reacción de plomo para la cisteína: Cuando los aminoácidos y las proteínas que contienen grupos sulfhídricos y se calientan en medio alcalino, el azufre presente reacciona para formar sulfuros. Este sulfuro puede detectarse por la formación de un precipitado color negro de sulfuro de plomo por adición de acetato de plomo.

Prácticas de Laboratorio de Bioquímica

Reacción de la Ninhidrina: Es una prueba general para aminoácidos libres, por lo cual todas las soluciones problema dieron un resultado positivo a excepción del agua, el color

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Ruiz Alonso Marco Antonio. Solano Valeriano Deniss.

Grupo 3IM1. Sección: 1 Fecha de entrega: miércoles 29 de agosto de 2018.

que denota un resultado positivo es el violeta, en el caso de la gelatina, el color violáceo fue muy tenue, lo que quiere decir que contiene un nivel bajo de proteínas y concluimos que la a gelatina, peptona, albumina, tirosina, triptófano y fenilalanina, contienen en su estructura grupos amino libres.

amoníaco y un aldehído que contiene un átomo de carbono menos que el compuesto original. El amoníaco y la molécula de ninhidrina desprotonada con una segunda molécula de ninhidrina da lugar a la formación de un pigmento color azul o violeta, la variación del color azul o violeta dependerá de la concentración del aminoácido por lo cual al comparar con el testigo todas la reacciones dieron positiva a excepción del agua que fue el testigo. En la reacción de Hopkins-Cole el aminoácido Triptófano nos resulta una prueba positiva al tener al grupo indol es grupo R, así como la albumina y peptona en su cadena presentan a algún grupo R con Triptófano contenido en él, por lo cual los demás compuestos al no tener el aminoácido mencionado anteriormente darán negativa a la prueba. En la reacción de Millón se observó que en el tubo de albumina la coloración rojiza era parcial, aunque es indudable la presencia de grupos fenólicos en ella. En esa misma prueba se observó que la fenilalanina formo un precipitado totalmente blanco, teóricamente se sabe que en ese caso es una prueba negativa ya que la proteína no tenía un pH acido adecuado para poder reaccionar y formar la sal mercúrica que daría el color rojo. La reacción Xantoproteica se obtuvo en todas las reacciones a excepción de la Fenilalanina, este comportamiento se debe a la presencia de anillos bencénicos activados en la estructura de las anteriores proteínas y aminoácidos. Los anillos aromáticos presentes reaccionaron con ácido nítrico concentrado formando nitroderivado precipitando de color amarillo. Por último la reacción de Biuret reacciono en la albumina, peptona y gelatina debido a que el NaOH se constituye en el medio que permite la formación de complejos de coordinación Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrógeno que forma parte de los enlaces peptídicos. Por tanto, el reactivo de Biuret cambió a color violeta en presencia de las anteriores proteínas.

Reacción de Hopkins Cole: Es específica para identificar grupos indol, al ser el triptófano el único aminoácido con este grupo, se trata una prueba específica para este, por lo cual concluimos que el aminoácido triptófano resulta una prueba positiva, así como en la estructura de la albumina y peptona se encuentra el triptófano dando una prueba positiva. Reacción de Millón: Es específica para la detección de grupos fenólicos en un aminoácido, la prueba fue positiva para aquellas soluciones que dieran un color rojo. En el caso de la albumina, se obtuvo una mezcla de colores, entre blanco y rojo, mientras que la fenilalanina fue completamente un precipitado color blanco. Por lo cual concluimos que la gelatina, albumina y peptona, al dar positivo a la prueba nos indicaron la presencia de grupos fenólicos en dichas proteínas. Reacción Xantoproteica: Es una reacción especifica para la identificación de grupos aromáticos activados. Los anillos aromáticos presentes reaccionaron con ácido nítrico concentrado formando nitro-derivados de color amarillo, por lo cual concluimos que en los aminoácidos, dio positivo para tirosina, triptófano así mismo nos indicó la presencia de estos aminoácidos en peptona, albumina y gelatina, este comportamiento se debe a la presencia de anillos bencénicos en la estructura de las anteriores proteínas y aminoácidos. Reacción de Biuret: Es una reacción general para identificación de enlaces di-peptídicos en adelante. En esta prueba de identificación, las soluciones de aspartame, tirosina, triptófano, fenilalanina y agua, resultaron ser negativas, en varias de ellas se obtuvo una coloración distinta al violeta, que era el color esperado en caso de ser una prueba positiva por lo cual concluimos que la gelatina, albumina y peptona contienen enlaces di-peptídicos al obtener un resultado positivo con la coloración adecuada (Violeta) en la prueba de Biuret.

Conclusiones:  Es posible diferenciar las proteínas mediante reacciones específicas, debido a que cada una contiene un grupo R en particular.  Las pruebas de identificación, nos proporcionaran la forma específica de determinados aminoácidos dentro de una proteína, y así conocer de forma empírica su estructura.

Discusión:

Bibliografía Consultada:

Existe una variación de resultados en algunas de las pruebas, por lo cual, el tubo de ensaye que contenía agua destilada fue usado como testigo para comparar con las soluciones que tenían una coloración muy tenue, ya que el agua en todas las pruebas resultaría negativa al no contener aminoácidos y proteínas. En el caso de la cisteína, los grupos tiol de dos moléculas de cisteína se han oxidado para formar un grupo di-sulfuro de modo que se establece un enlace covalente transversal entre ellas. La reacción se lleva a cabo en un medio alcalino, es decir en presencia de NaOH, el cual permite la separación del azufre de la estructura del aminoácido. Al añadir el acetato de plomo, el azufre se combina con el plomo para producir un precipitado de color negro que corresponde a sulfuro de plomo. En el caso de que el aminoácido reacciona con la ninhidrina, el cual es un agente oxidante fuerte que efectúa la descarboxilación oxidativa de los aminoácidos, y forman dióxido de carbono, Prácticas de Laboratorio de Bioquímica

Lehninger, Principios de Bioquímica, David. L. Nelson, Michael. M.Cox Ed. Omega. Sexta Edición, pag 75-84, 96115. Fundamentos de Bioquímica, Donald Voet, Judith G. Voet, Charlotte W. Pratt; Ed. Médica Panamericana, pag 216. Horton, Principios de Bioquímica, Laurence. A. Morán, J. David Rawn, Ed. Pearson. Cuarta Edicion, pag 52-69,72-80.

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