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• Marco Ruíz Alonso

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REACCIONES PROTEÍNAS.

DE

AMINOÁCIDOS

Y

Introducción: Objetivos: Resultados obtenidos en forma de tabla: Reacción de la ninhidrina

Gelatina Peptona Albúmina Tirosina Triptófano Fenilalanina

Agua

Gelatina Peptona Albúmina Tirosina Fenilalanina Agua

Gelatina Peptona Albúmina Aspartame Tirosina Triptófano Fenilalanina Agua

+ + + + + + Reacción de Millón + + + + Reacción de Biuret + + + -

Fundamento: Reacción de la Ninhidrina  Iniciamos colocando 1 ml de la soluciones problema en un tubo de ensaye (Gelatina, peptona, albumina, tirosina, triptofano, fenilalanina y agua).  A cada uno de los anteriores se agregaron 5 gotas de solución de ninhidrina en butanol.  Después, se calentaron los tubos en baño maría y se observó la aparición de color azul o violeta. Reacción de Millón

 Se adicionó 1 ml de las soluciones problema en distintos tubos de ensaye (Gelatina, peptona, albumina, tirosina, fenilalanina y agua).  Posteriormente, se agregó a cada tubo 2 gotas del reactivo de Millón.  Finalmente, se calentaron los tubos hasta la aparición de color rojo. Reacción de Biuret  Se agregó 1 ml de las soluciones problema a utilizar en diferentes tubos de ensaye (Gelatina, peptona, albumina, aspartame, tirosina, triptófano, fenilalanina y agua).  Posteriormente se adicionó a cada tubo 2 ml de NaOH y 4 gotas del reactivo de Biuret.  Se observó en que soluciones apareció un color violáceo. Interpretación y conclusión de cada reacción: Reacción de la Ninhidrina: Para esta prueba, todas las soluciones problema dieron un resultado positivo a excepción del agua, el color que denota un resultado positivo es el violeta, en el caso de la gelatina, el color violáceo fue muy tenue, lo que quiere decir que contiene un nivel bajo de proteínas. Conclusión: La gelatina, peptona, albumina, tirosina, triptófano y fenilalanina, contienen en su estructura grupos amino libres. Reacción de Millón: De las soluciones problema que se utilizaron para esta prueba, solo una de ellas resultó negativa, el agua, que tuvo el papel de testigo. La prueba fue positiva para aquellas soluciones que dieran un color rojo. En el caso de la albumina, se obtuvo una mezcla de colores, entre blanco y rojo, mientras que la fenilalanina fue completamente una solución blanquecina. Conclusión: La prueba de Millón identifica la presencia de grupos fenólicos, las soluciones que lo contienen son la gelatina, peptona, albumina y tirosina. Reacción de Biuret: En esta prueba de identificación, las soluciones de peptona, aspartame, tirosina, triptófano y agua, resultaron ser negativas, en varias de ellas se obtuvo una coloración distinta al violeta, que era el color esperado en caso de ser una prueba positiva. Conclusión: La gelatina, albumina y fenilalanina contienen una cadena mayor a 3 unidades de aminoácidos al obtener un resultado positivo en la prueba de Biuret. Discusión: Es evidente la variación de resultados en todas las pruebas, el tubo de ensaye que contenía agua destilada fue usado como testigo para comparar con las soluciones que tenían una coloración muy tenue, ya que el agua en todas

las pruebas resultaría negativa al no contener aminoácidos y proteínas. En la reacción de Millón, se observó que en el tubo de albumina la coloración rojiza era parcial, probablemente falto calentar un poco más en el baño maría para que ese color fuera total, aunque es indudable la presencia de grupos fenólicos en ella. En esa misma prueba se observó que la solución de fenilalanina era totalmente blanquecina, teóricamente se sabe que en ese caso, la proteína precipitó y solo era necesario calentar un poco más para que se volviera roja. En la reacción de Biuret, los tubos que contenían peptona y albumina, fueron descartados de un resultado positivo ya que aunque presentaron cierta coloración no era la esperada, que era el color violeta. Conclusiones generales:  Es posible diferenciar las proteínas debido a que cada una contiene un grupo R específico.

PRECIPITACIÓN, SEPARACION ISOELÉCTRICO DE PROTEÍNAS

Y

PUNTO

Introducción: Objetivos: Resultados obtenidos en forma de tabla: Tabla 1. Resultados salting-out, Filtrado 1

Biuret +

Precipitado 1

+

Filtrado 2

+

Precipitado 2

-

Interpretación La coloración que se obtuvo fue violeta, con la acción del sulfato de amonio, no se precipitó completamente la proteína. Coloración violeta, la sal concentrada de sulfato de amonio logro precipitar parte de la proteína. Coloración violeta, las proteínas que aun contenía la solución lograron precipitar. Coloración azul tenue, con el filtrado anterior se logró la precipitación completa de proteínas.

Discusión: Salting-out: En la práctica de reacciones de aminoácidos y proteínas, se puso en manifiesto que la albumina contiene proteínas, en esta práctica fue posible precipitarlas al usar una sal neutra con altas fuerzas iónicas, como lo fue una solución saturada de sulfato de amonio, ya que este es un factor que disminuye la solubilidad de las proteínas por ellos fue posible obtener el primer precipitado después de un proceso de separación como el centrifugado. Cuando a dicho precipitado se le realiza nuevamente la reacción de Biuret, se utiliza NaOH para evitar la formación de amoniaco, mientras que el filtrado anterior también fue sometido a la misma prueba, pero debido a que seguía conteniendo proteínas se agregó nuevamente a otra muestra del filtrado, la sal neutra de sulfato de amonio, con eso se logró saturar, se procedió a filtrar y el resultado obtenido fue que se lograron precipitar todas las proteínas ya que el último filtrado resultó negativo a la prueba de Biuret. Conclusiones:  A mayor concentración de sales neutras, menor solubilidad de proteínas (salting-out).  A menor concentración de sal, mayor solubilidad de las proteínas es alta (salting-in).