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• Karina Pacara

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PROTOCOLO DE OBTENCION DE CROMOSOMAS DE ANIMALES

1. Obtención de la muestra. Tomar un animal pequeño, ponerlo en una campana de vidrio y colocarle un algodón empapado en éter o cloroformo, hasta que el animal quede anestesiado. 2. Inmediatamente tomar un bisturí y realizar incisiones a fin de obtener el hueso largo de la pata (delantera y posterior), de la forma más rápida posible.

3. Limpiar los huesos de los restos de tejido muscular y conjuntivo.

4. Triturar el hueso con unas tijeras en un tubo de prueba que contenga la solución hipotónica (KCl 0.075 M), si es un animal de sangre caliente este debe estar a 37° C y si es un animal de sangre fría debe estar a temperatura ambiente. Por un espacio de 20 min a 1 hora.

5. Terminado este tiempo, llevar a centrifugación 1000 rpm, por 10 min. Eliminar el sobrenadante y agregar al pelex, fijador Carnoy, como mínimo dejar por un tiempo de 15 min. Pasado el tiempo centrifugar 1000 rpm, por 10 min. Repetir este último paso 2 veces al término del cual se tomará en una pipeta Pasteur unas gotas de muestra y se goteará (23) encima de una lámina portaobjeto previamente congelada, evitando la sobreposicion de las gotas.

6. Secar las láminas con aire caliente. Colorear con Giemsa al 2%, por espacio de 10 min. Sacarla, enjuagar con agua corriente, secarla y observar al microscopio 7. Observar al microscopio, ubicar las metafases.

PROTOCOLO PARA LA OBTENCION DE CROMOSOMAS POLITENICOS 1. Obtención de larvas de Drosophila melanogaster en estadio 3.

2. Extracción de las glándulas salivales: pinchar la cabeza y la cola, obteniendo el tubo digestivo y en las glándulas salivales.

3. Uso de una solución salina hipotónica (suero fisiológico), , colocar las glándulas salivales sobre una lámina portaobjeto y cubrir las con orceína por 15 minutos 4. Colocar una lámina cubreobjetos, extender la muestra mediante la técnica del squash con movimientos circulares.

5. Colocar esmalte de uña por los bordes. 6. Observar al microscopio

FOTOGRAFÍA MICROSCOPICA DE CROMOSOMAS POLITÉNICOS

PROTOCOLO PARA LA OBTENCION DE CROMOSOMAS VEGETALES 1. Coloque los bulbos de cebolla en vasos pequeños que contenga agua de caño, hasta que emerjan las nuevas raíces.

2. Colóquelas en una luna de reloj.

3. Agregue 2ml de HCl. 4. Flamee por tres veces consecutivas evitando que hierva la muestra.

5. Elimine el HCl y agregue el colorante evitando que hierva la muestra. 6. Flamee hasta que la muestra tome un color rojo oscuro, evitando que hierva. 7. Coloque una de las puntas de la cebolla en una lámina portaobjeto con unas gotas de colorante nuevo.

8. Cubra la laminilla cubreobjeto.

9. Realice la técnica del Squash.

10. Observe la preparación a mayor aumento y con lente de inmersión.