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• Karla Huamancaja

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Determinación de flavonoides totales en Opuntia soehrensii (ayrampo) Introducción: Los flavonoides son pigmentos naturales presentes en los vegetales, que protegen al organismo de los daños causados por los agentes oxidantes, como los rayos ultravioletas, la polución ambiental, sustancias químicas presentes en los alimentos, etc. Debido a que el cuerpo humano no puede producirlos estos ingresan por los alimentos que consumimos (1). Dentro de estos grupos se encuentran la quercetina y las antocianinas, que son las que se encuentran con mayor presencia en el fruto que estudiaremos; siendo estos últimos los responsables de darle la capacidad antioxidante al ayrampo. Las antocianinas son un antioxidante natural, antimicrobiano, que favorece la regeneración de los tejidos, mejora la actividad cardiaca, la circulación sanguínea, inhibe la síntesis de colesterol y promueve la formación de colágeno. Mediante la formación de sustancias coloreadas someteremos a nuestra muestra al espectrofotómetro para hallar sus absorbancias y gráficos característicos de estos flavonoides. Materiales  Muestras de ayrampo  Agua destilada  Nitrito de sodio 5%  Cloruro de aluminio 10%  Hidróxido de sodio 5% Métodos Para la determinación de antocianinas se debe emplear el método de ABTS. Este método tiene el mismo principio que el DPPH, con la única diferencia que, en este caso, se mide la captación del radical a través de la disminución de la absorbancia, se mide a 734 nm y, de igual forma, correlacionada en una curva estándar de Trolox (2). Para la determinación de quercetina se utilizó el método de Dini y Col, que consiste en formar un complejo flavonoide-aluminio de color rosado que absorbe una longitud de onda de 510 nm en un medio alcalino (3). Procedimientos Procedimiento para determinación de quercetina Se determinó la cantidad de flavonoides de acuerdo con el método descrito por Dini y Col, el fundamento del método consiste en formar un complejo flavonoide-aluminio de color rosado que absorbe una longitud de onda de 510 nm cuando se encuentra en medio alcalino.  Realizar diluciones 0, 001 M de la muestra de extracto acuoso y etanolico de ayrampo.  Mezclar 0,25 Ml de la muestra con 3,2 mL de agua destilada y 0,15 Ml de una solución de nitrito de sodio 5%.  Luego de 5 min agregar 0,15 mL de cloruro de aluminio 10% y agitar.  Pasado 6 min, agregar 0,15 mL de hidróxido de sodio 5%.  Determinar la absorbancia final a 510 nm en el espectro UV-visible, realizando la lectura cada 20 segundos durante 2 minutos.  Comparar la absorbancia final de cada muestra con una estándar de Quercetina (20.250mg/L).  Expresar los resultados como mmol equivalentes de Quercetina por gramo de muestra (4).

Procedimiento para determinación de la capacidad antioxidante Reactivo A: Se pesó 78.4 mg de ABTS y se llevó a 10 mL con agua destilada. Reactivo B: Se pesó 13.2 mg de persulfato de potasio y se llevó a 10 mL con agua destilada. Ambas soluciones se protegieron de la luz. Se mezclaron volúmenes iguales de los reactivos A y B, y se dejó reposar en oscuridad por 12 horas. La solución de ABTS obtenida, se dividió en una proporción aproximada de 1:60 (sol. Madre: metanol 30°) utilizando metanol, hasta que estuvo a una absorbancia de 1.1 ± 0.02 a 734 nm, esta solución diluida sólo fue utilizada durante las 4 horas siguientes de su preparación. Se tomó 150 μL del extracto diluido y se le adicionó 2850 μL de solución de trabajo de ABTS. Al mismo tiempo se preparó un blanco con 150 μL de metanol 30° en lugar de la muestra. La reacción se llevó a cabo a temperatura ambiente y en oscuridad. Luego, se leyó en el espectrofotómetro a 734 nm después de 165 minutos. Dichas lecturas no deben ser menores de 0.2 ni mayores a la absorbancia del blanco, en caso contrario se deben realizar la dilución correspondiente del extracto. La capacidad antioxidante se calculó usando una curva estándar de Trolox, y los resultados fueron expresados como μmol de Trolox equivalente/g de muestra en base seca. La ecuación empleada, fue obtenida a partir de la curva estándar de Trolox a 734 nm con r2 = 0.9942 (3). Y= 1.1504x-0.0141 Dónde: Y= Absorbancia X= μmol de trolox equivalente/ mL

Fig. N°1: Procedimiento para determinar la capacidad antioxidante Extraído de: http://repositorio.unam.edu.pe/bitstream/handle/UNAM/57/T095_71978393_T.pdf?sequence=1&isAllowed=y

Resultados Tabla N°1. Absorbancia de las muestras de extracto de ayrampo, según Nattes.

Grafica N°1. Curva de calibración para medir flavonoides totales expresados como mmol equivalentes de Quercetina por gramo de muestra, según Nattes.

Tabla 2. Promedio de flavonoides totales para los extractos, según Nattes.

La tabla N°2, muestra el contenido de flavonoides totales expresados en mmol de Quercetina/L el valor más alto de flavonoides totales se observó en el extracto etanólico con 61.209 mmol Quercetina/L comparado con el extracto acuoso con 46.321 mmol Quercetina/L (4).

Grafica N°2. Curva de Trolox para la medición de la capacidad antioxidante, según Apaza.

Observaciones:  Se requiere un adiestramiento previo si se desea hacer un correcto estudio.  Se requiere que el instrumento de medición, Espectrofotómetro UV- visible, este previamente calibrado. Referencias bibliográficas 1. Navarro Cruz, A. R. Estudio de la concentración de quercetina en las variedades de manzana (Malus domestica) Fuji, Red Delicius y Delicia. Universidad de Guanajuato, 2010 2. Ariel R. Obtención de ingredientes alimenticios con capacidad antioxidante mejorado por aplicación de distintos procesos a semillas de quinoa (Chenopodium quinoa). Universidad de Buenos Aires, 2014. 3. APAZA A. INFLUENCIA DE PARÁMETROS FISICOQUÍMICOS EN LA EXTRACCIÓN DE PIGMENTOS DE AYRAMPO (Opuntia Soehrensii B.), SOBRE EL CONTENIDO DE FENOLES TOTALES, BETACIANINAS TOTALES Y CAPACIDAD ANTIOXIDANTE. Universidad Nacional de Moquegua, 2017. 4. Nattes P. y Quispe Z. DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA DE LOS EXTRACTOS DE AYRAMPU (Opuntia soehrensii) PARA EL DESARROLLO GALÉNICO DE UN GEL DE LIMPIEZA DE MANOS. Universidad Mayor de San Andrés, 2018. 5. Soto H. Efecto Antibacteriano y Antifúngico comparativo de los extractos acuosos del Zea Mays L. (maíz morado), Rubus glaucus (mora andina); Opuntia soherensii (ayrampo) y Diseño de un gel de limpieza cutánea. Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2014.