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Instituto Politécnico Nacional Escuela Nacional de Ciencias Biológicas – Laboratorio de Bioquímica y Biología molecular Curva tipo de azucares reductores. Morales Ramírez Tania, Vela Vázquez Valeria/ Grupo: 3IM2/ Sección 3 

Introducción

Los azúcares reductores son aquellos azúcares que poseen su grupo carbonilo (grupo funcional) intacto, y que a través del mismo pueden reaccionar como reductores con otras moléculas. Una curva tipo o curva de calibración es una representación gráfica entre la relación de concentración (eje de las abscisas) y absorbancia (eje de las ordenadas). Es necesario ensayar varias soluciones de concentración conocida y determinar sus respectivas absorbancias, construyéndose la curva tipo, cuya apariencia es una recta. Para medir la absorbancia se emplea un espectrofotómetro que realice lecturas a 540 nm. El método DNS (técnica de Miller) es una técnica colorimétrica que emplea ácido 3,5dinitrosalicilico para la hidrolisis de polisacáridos presentes en una muestra. Esta técnica sirve para cuantificar los azucares reductores producidos en una reacción enzima generando un producto coloreado. La intensidad de color que se mide por métodos espectrofotométricos es proporcional a la concentración de azucares.

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Objetivo

Obtener una curva de calibración para transformar las lecturas de absorbencia. Obtener la actividad de la enzima invertasa. .

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Resultados

Tabla 1. Curva tipo de azucares reductores

mL Glucosa Azúcar reductor 0.005M / (µmoles/2mL) Fructosa 0.0005M Blanco 0 0 1 0.1 1 2 0.2 2 3 0.4 4 4 0.8 8 5 1.0 10 Tabla 2. Valores de Glucosa + Fructosa en µmoles/2mL. Tubo No.

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Cálculo de los µmoles/2mL

Glucosa ( 0.005 M )+ Fructosa ( 0.005 M ) =0.01 M 0.01 mol=1000mL

x mol=0.1 mL

por lo tanto x=0.00001mol=1 x 10−6 moles=1 µmol /2mL Figura 1. Resultados Curva tipo azucares reductores

necesario para que las recciones de óxidoreducción se lleven a cabo. Cuando se añade el 3,5 DNS a la Glucosa + Fructosa ocurre una reacción de óxidoreducción en la cual el DNS es reducido por la Glucosa a ácido 3-amino-5-nitrosalicílico, mientras que la glucosa se oxida a ácido Dglucónoico.

Gráfica 1. Curva tipo de azucar reductor.

Al realizar la gráfica se obtuvo una línea recta por lo que podemos decir que la concentración de un azúcar reductor es directamente proporcional a la absorbancia obtenida en el espectrofotómetro, es decir que a mayor cantidad de glucosa y fructosa se obtiene una mayor absorbancia.

Discusión Se llevó a cabo la preparación de tubos como se muestra en la tabla 1 se comenzó a observar la presencia de color cuando estos se sometían a calentamiento a baño maría, el color va dependiendo de la cantidad de azúcar reductor (glucosa-fructuosa) que se le haya colocado. La sacarosa es un disacarido no reductor, que no se oxida con facilidad debido a que sus átomos de carbono anomericos esta unidos a un enlace glicosidico. El ácido 3,5-dinitrosalisilico reacciona solo con azucares reductores, cuando la sacarosa se hidrolizo se libero Glucosa y Fructosa (ambos son azucares reductores) que reaccionarón con el 3,5 DNS a una temperatura dada durante un tiempo marcado para generar coloración y posteriormente ser observado en un espectrofotómetro a una longitud de onda de 540nm. Además de permitir el desarrollo de color (un tono amarillo representa una oxidación y un tono rojo cuando presenta una reducción) el DNS proporciona el nivel de pH

 1.

2.

Conclusiónes

A mayor cantidad de

µmol

de azúcar

reductor mayor absorbencia reflejada. El ácido 3,5-dinitrosalisilico nos permite observar el poder reductor de los ázucares.

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Bibliografía

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Thomas M. Delvin, “Bioquímica”, Ed. Reverte S.A, 4ª edición en Esp., PP. 110-125 (2004) Lehninger, A.L., “Principios de Bioquímica”, 2ª Edición, Ed. Worth Publiserhs, Inc., PP. 138-146 (1993)

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