• Author / Uploaded
• Andrea Cervantes Quiñones

Citation preview

Informe N°9: Metabolismo de carbohidratos, aminoácidos y urea. I.

INTRODUCCIÓN Las bacterias son muy versátiles en la degradación de dd polímeros. Sin embargo existen microorganismos que son más activos frente a ciertos compuestos. Los proteolíticos, se caracterizan por ser degradadores de proteínas en forma más activas que otras, de igual manera los amilolíticos, los lipolíticos, los hemolíticos, etc. Existen microorganismo que se comportan como proteolíticos amilolíticos, lipolíticos, etc debido a que tienen un sistema enzimático muy versátil. La degradación se puede demostrar por la aparición de unidades monoméricas derivado de los compuestos poliméricos, así, de las proteínas se obtendrá aminoácidos, y a partir de los derivados como indol, escatol, ácido sulfhídrico, amoniaco, etc. La degradación de estos compuestos nitrogenados se evidencia por la aparición de amoníaco u otros compuestos. Siempre que existan la condiciones adecuadas, el microorganismo y el sustrato a degradarse, aparecen compuestos productos de la degradación.

II.

MATERIALES Y MÉTODOS ● Medios de cultivos: agar Kligler, agar citrato de Simmon`s, ● caldo lisina, caldo triptófano y caldo urea ● Asa de Kolle ● Mechero ● Cultivo de microorganismos de 18- 24 horas. En la fermentación de glucosa y lactosa se realizó en un solo medio :Agar Kliger en la cual la siembra se realizó por picadura y una estría en la superficie. Con respecto a la degradación de citrato inoculamos con la aguja de kolle sobre la superficie inclinada de agar citrato de Simmons. Para la degradación de la lisina inoculamos el microorganismo en el caldo y se mandó a incubar como los anteriores procesos a una temperatura de 37°C por 18 - 24 horas. En la degradación de triptófano, inoculamos el asa de kolle con el microorganismo en el indol y se mandó a incubar por 24 hora. Luego de la incubación se le agrego reactivo de kovaos. Y finalmente para degradación de urea, inoculamos el microorganismo al caldo de urea y se mandó a incubar con el tubo control a una temperatura de 37 °c por 18-24 horas.

III.

RESULTADOS Muestra 1:

De izquierda a derecha, agar lisina positivo, agar citrato positivo y agar Kligler negativo

De izquierda a derecha, Detalle del caldo triptófano, caldo desplazamiento de la nitrógeno y caldo urea, bacteria en el agar en u siendo las muestra negativas

Microorganismo Muestra 1

Muestra 2

Muestra 3

Muestra 4

Muestra 5

Muestra 6

Glucosa

-

+

+

+

+

+

Lactosa

-

-

-

-

+

+

H2S

-

-

-

-

-

-

Gas

-

-

-

-

+

+

Asimilación del citrato

+

-

-

-

-

-

Descarboxilación de la lisina

+

-

-

-

+

+

Degradación del Triptófano

-

-

-

-

-

-

Degradación de la urea

-

-

+

-

+-

-

NItrógeno

-

+

-

-

-

-

Kligler

IV.

DISCUSIONES Fermentación de glucosa y lactosa En la muestra 1 se observó que para el agar TSI salió negativo ya que este no cambió a un color amarillo. Según Laboratorios Britania (2015), el agar TSI como contiene lactosa, glucosa y sacarosa, estos al fermentarse producen ácidos siendo detectados por el rojo fenol contenido en el agar TSI el cual proporciona un cambio de color de rojo a amarillo. Las bacterias que no fermentan glucosa ni lactosa resultan negativos sin cambio de color, es decir sigue manteniendo el color del indicador rojo fenol agar TSI. La Pseudomona aeruginosa presenta dicha característic, según Guzmán A. (2016), las bacterias del género Pseudomona no forman esporas y no son fermentadoras de azúcares, siendo su metabolismo es oxidativo de tipo respiratorio. En Agar MacConkey crecen siendo lactosa negativas. Asimilación del citrato En la muestra 1 se observa un cambio de color de verde a azul según Laboratorios Britania S.A. (2015), el agar citrato de Simmons al contener el azul de bromotimol es el indicador de pH el cual vira de verde a azul el cual nos indica que se ha producido la citrato permeasa que descarboxila al citrato desdoblándose en oxalacetato y piruvato. La bacteria Pseudomona aeruginosa crece de color azul en este medio, es decir degrada citrato Descarboxilación de la lisina En el caso del agar lisina presentó un color púrpura, según Laboratorios Britania S.A. (2015) el púrpura de bromocresol es el indicador de pH y este al tener un ambiente ácido por la actividad de la enzima decarboxilasa se metaboliza la lisina a cadaverina elevando el pH del medio produciéndose un cambio de color. La Pseudomona aeruginosa tiene la capacidad de descarboxilar la lisina. Degradación del triptófano La degradación del triptófano libera indol ácido pirúvico, amoniaco y energía. El indol reacciona con el grupo aldehído de p-dimetilaminobenzaldehído formando un complejo de color rojo. La formación del indol se da en los organismos que son capaces de fermentar los hidrato de carbono. Teniendo estas características en cuenta la Pseudomona aeruginosa no produce indol. Degradación de la urea En el caso de la urea no se observó ningún cambio de color. Esta prueba nos indica si un organismo es capaz de degradar la urea formando dos moléculas de amoniaco por la acción de la enzima ureasa produciendo un cambio de color de rosado claro a uno intenso. La Pseudomona aeruginosa dió negativo a pruebas de la urea, los que nos indica que no posee la enzima ureasa.

Degradación del nitrógeno En este caso no se observó ningún halo rojo en la muestra. Esta prueba nos indica la capacidad de un organismo de reducir nitratos a nitritos. Las enzima que realizan dicha reducción son la nitrato y nitrito reductasa, la reducción del nitrito es indicada por la reacción de nitritos con reactivos que producen un color rojo. La Pseudomona aeruginosa si reduce nitratos a nitritos. Movilidad En la muestra se observó que la bacteria creció dentro de la línea de inoculación aunque se tuvo una ligera opacidad en el medio. Este medio determina si un organismo es móvil o no, ya que algunas bacterias tienen movilidad por medio de sus flagelos. Según Ruiz L.(2007) la Pseudomona aeruginosa presenta un único flagelo polar el cual le permite responder a estímulos químicos. V.

CONCLUSIONES ● ●

VI.

Según los medio utilizados para ver el metabolismo,el microorganismo de la muestra 1 podría ser Pseudomona aeruginosa. En la prueba de degradación de nitrógeno se pudo contaminar la muestra dando un resultado negativo..

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ●

● ● ● ●

●

●

●

CABALLERO A. 2006. Técnico especialista en laboratorio de atención primaria del instituto Catalán de la Salud. Primera edición. Volumen II. Editorial Mad. España. FORBES B. SAHM D. WEISSFELD A. 2007. Diagnóstico Microbiológico. Doceava edición.Editorial Médica Panamericana. Buenos Aires. Argentina INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL. 1959. Acta Politécnica Nacional. Volumen 1. México.Pág 12,13 TORTORA, G., FUNKE, B. Y CASE, C. 2007.Introducción a la microbiología. Novena edición.Editorial Médica Panamericana. Madrid, España. Laboratorios Britania S.A. (2015). Simmons Citrato Agar. Recuperado en: https://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_5a29779bd2be 8.pdf Laboratorios Britania S.A. (2015). Lisina Hierro Agar. Recuperado en: https://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_5a282fb7b620 4.pdf Ruiz L. (2007). Pseudomona aeruginosa: Aportación al conocimiento de estructura y a los mecanismos que contribuyen a su resistencia a los antimicorbianos. Recuperado de: https://www.tdx.cat/bitstream/handle/10803/2521/LRM_TESIS.pdf?sequence =1&isAllowed=y Montero M. (2012). Pseudomona aeruginosa multiresistente: aspectos microbiológicos, clínicos y terapéuticos. Recuperado en: https://www.tdx.cat/bitstream/handle/10803/107902/mmm1de1.pdf?seque