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Hepatitis A HAV IgM en Cassette (Suero / Plasma) MATERIALES REQUERIDOS PERO NO SUMINISTRADOS 1.

Reloj o cronómetro ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES

Número de Catálogo R0090C

Diagnostico In Vitro INTENCION DE USO La prueba Rápida OnSite de HAV IgM es un inmunoensayo cromatográfico de flujo lateral para la detección qualitativa de anticuerpos IgM al virus Hepatitis A (HAV) en suero humano o plasma. Sirve como prueba de tamizaje para ayudar al diagnóstico de la infacción al HAV. Cualquier espécimen reactivo con la prueba OnSite HAV IgM debe confirmarse con métodos alternativos y averiguaciones clínicas. 1

El HAV es un virus positivo RNA, un miembro único de picornavirdae . Su transmission depende primeramente de la transmission serial de persona a persona por la via fecal-oral. A pesar de que el hepatitis A no es una enfermedad de transmission sexual ordinaria, el porcentaje de 2,3

infección es alto entre los hombres homosexuales como consecuencia del contacto oral-anal

.

Para uso de Diagnostico y In Vitro 1. Este inserto deberá ser leído por completo antes de desempeñar el examen. No leer las instrucciones puede llevar a tomar resultados imprecisos. 2. No abra el sobre laminado, hasta estar listo para llevar a cabo la prueba. 3. No utilice dispositivos caducos. 4. Introduzca todos los reactivos a temperatura de interior (15º - 30ºC) antes de usar. 5. No utilice componentes de cualquier otra prueba como substituto a los componentes de este kit. 6. No utilice sangre hemolizada. 7. Utilice ropa protectiva y guantes deshechables mientras utilice los reactivos del kit y los especímenes clínicos. Lavese las manos con cuidado después de desempeñar la prueba. 8. Usuarios de esta prueba deberán seguir las precauciones universales US CDC para la prevención de transmisión de HIV, HBV y otros patógenos. 9. No fume, beba, o coma en áreas en las que los especímenes están siendo manejados. 10. Deseche todos los especimenes y materiales como desechos biológicos. 11. Maneje los controles de la misma forma que los especímenes de pacientes. 12. Los resultados del examen deberán leerse dentro de 10 minutos después de que el espécimen es aplicado a la ranura de muestra o a la almohadilla del dispositivo. Leer después de 10 minutos puede dar resultados erróneos. 13. No realice la prueba en un cuarto con mucho flujo de aire, por ejemplo, con ventiladores eléctricos o un fuerte aire acondicionado

La presencia de anti-HAV IgM específico en muestras de sangre sugiere infección aguda o 4-6

reciente. . El anticuerpo IgM incrementa su presencia en un periodo de 4-6 semanas luego de la infección y luego disminuye a niveles no detectables dentro de 3 a 6 meses en la mayoría

PREPARACION DE LOS REACTIVOS E INSTRUCCIONES DE ALMACENAMIENTO

7

de los pacientes . La prueba OnSite HAV IgM se utiliza para detectar IgM anti-HAV en menos de 15 minutos sin requerir de equipos avanzados de laboratorio ni personal altamente capacitado en la prueba.

G

PRINCIPIO DEL EXAMEN

COLECCIÓN DEL ESPECÍMEN Y MANEJO Considere cualquier material de origen humano como infeccioso y manéjelo utilizando procedimientos de bio-seguridad estándar. Plasma 1 Colleccione el espécimen de sangre en un tubo de colección de tapa lila, azul o verde (conteniendo EDTA, citrato o heparina, respectivamente en Vacutainer®) por punción. 2 Separe el plasma por centrífuga. 3 Cuidadosamente retire el suero en un nuevo tubo previamente etiquetado.

M

AA

La prueba Rápida Onsite HAV IgM es un inmunoensayo cromatográfico de flujo lateral. El examen consiste de: 1) Almohadilla de conjugado de color budeos con conteniendo antígenos de ratón anti anticuerpos IgM humano conjugados con oro coloidal (Conjugados IgM) y 2) Una tira de membrana de nitrocelulosa que contiene una banda de prueba (banda T) y una banda de control (Banda C). La banda T es pre-recubierta con antígenos HAV recombinantes, y la banda C es pre-recubierta con anticuerpos lgG de cabra anti-conejo.

Todos los reactivos están listos para utilizar como fueron provistos. Almacene los dispositivos sin utilizar a temperaturas de 2º - 30º C. Los controles positivos y negativos deben guardarse a 2ºC - 8ºC, asegúrese que el dispositivo de prueba se encuentra en temperatura de interior antes de abrir. El dispositivo de prueba es estable hasta la fecha de expiración impresa en el sobre laminado. No congele el kit ni lo exponga a temperaturas mayores a 30ºC.

SA

Suero

1 2 3 4

Cuando un volumen adecuado de muestra de la prueba se distribuye en la superficie absorbente de la tira, la muestra migra por acción capilar a través de la franja. Anti-HAV IgM de estar presente en la muestra se unirá a los conjugados IgM. El inmunocomplejo es entonces capturado en la membrana por el antígeno previamente recubierto, formando una banda color tinto T, indicando un resultado positivo del anticuerpo HAV. La ausencia de la banda T sugiere un resultado negativo. La prueba contiene un control interno (banda C) la cual deberá exhibir una banda borgoña coloreada, de los inmunocomplejos IgG de cabra anti- conejo / conejo IgG-conjugado de oro, independientemente del desarrollo de color en la banda T. De lo contrario, los resultados del ensayo no serían validos, y la muestra debería ser analizada con otro dispositivo. REACTIVOS Y MATERIALES PROVISTOS 1.

2.

Cada kit incluye 30 dispositivos de prueba, cada uno sellado en un sobre laminado y con tres artículos en su interior: a. Un dispositivo de prueba b. Una pipeta o gotero c. un desecante Un Inserto (Instrucciones de Uso)

Coleccione el espécimen de sangre en un tubo de colección de tapa roja (conteniendo ningún anticoagulante en Vacutainer®) por punción. Permita que la sangre se coagule. Separe el suero mediante centrífuga. Cuidadosamente retire el suero en un tubo nuevo previamente etiquetado.

Los especímenes de prueba tan pronto y sea posible después de colectarse. En caso de no hacer la prueba inmediatamente, almacene los especímenes entre 2° y 8°C. Almacene los especímenes entre 2° y 8°C por hasta 5 días. Los especimenes deberán congelarse a -20°C para un mayor almacenaje. Evite ciclos múltiples de congelamiento-descongelamiento. Antes de realizar la prueba, lleve los especímenes a temperatura de interior lentamente y mezcle gentilmente. Los especimenes que contengan materia de partículas visibles deberán ser aclarados por centrífuga antes de realizar la prueba. No utilice muestras que contengan lipemia gruesa, hemólisis gruesa o turbiedad con el propósito de evitar interferencia en la interpretación de resultados. PROCEDIMIENTO DE ENSAYO Paso 1:

Paso 2: Paso 3: Paso 4:

Lleve el espécimen y los componentes de prueba a temperatura de interior si se encuentran refrigerados o congelados. Mezcle el espécimen bien una vez descongelado antes de llevar a cabo el ensayo. Estando listo para llevar la prueba, abra el sobre y retire el dispositivo. Coloque la prueba en una superficie limpia y plana. Asegúrese de etiquetar el dispositivo con el número de identificación del espécimen. Llene el gotero plástico con el espécimen. Mantenga el gotero verticalmente y dispense 2-3 gotas (alrededor de 60 – 90 µl) de espécimen en la ranura de muestra, asegurando que no hay burbujas de aire.

MATERIALES REQUERIDOS NO SUMINISTRADOS

1 2

Control Positivo (1 vial, tapa roja, 1 mL, Cat # R0090-P) Control Negativo (1 vial, tapa verde, 1 mL, Cat # R0090-N) RESULTADO

Nota: Agregue 1 gota de buffer salino o fosfato-salino en la ranura de muestra si no se observa migración de flujo dentro de 30 segundos en la ventana de resultados, lo cual puede ocurrir con especímenes altamente viscosos.

Prueba Rápida Kabla - OnSite de Hepatitis A HAV IgM en Cassette (Suero / Plasma) Paso 5:

Inicie el Cronómetro

PRECISIÓN

Paso 6:

Los resultados pueden leerse en 10 minutos. Resultados positivos pueden ser visibles tan pronto como en un minuto.

La precisión fue determinada por examinaciones de 15 replicas con 3 tipos de muestras: una negativa, una débilmente positiva, y una fuertemente positiva. Los 3 tipos de muestras fueron correctamente identificas en cada una de las pruebas en cada ocasión.

No lea los resultados después de 10 minutos. Para evitar confusión, deseche el dispositivo luego de interpretar el resultado.

LIMITACIONES DE LA PRUEBA

CONTROL DE CALIDAD

1

El uso de los cassettes individuales de prueba de HAV IgM se describe en el procedimiento de ensayo, haga un control positivo y un control negativo (provistos bajo requerimiento si los controles de calidad no están disponibles en laboratorio) bajo las siguientes circunstancias para monitorear el desempeño del cassette. 1 Un operador usa el kit por primera vez, antes de probar con especímenes. 2 Un nuevo kit se va a utilizar. 3 Un nuevo embarque se kits de va a utilizar. 4 La temperatura utilizada durante el almacenaje esta fuera de 2 – 30 C. 5 La temperatura del cuarto de pruebas esta fuera de 15 – 30 C.

2 3 4 1. 5

Resultados esperados son como los siguientes:

6

Control Negativo Solo la línea C muestra un color. La línea T se encuentra en blanco.

-

El procedimiento de ensayo y la interpretación de los resultados del ensayo deben seguirse de cerca al realizar pruebas de anti-HAV IgM suero o plasma de individuos. La prueba Onsite de Sifilis Ab esta limitada a la detección cualitativa del anti-HAV IgM en suero humano o plasma. La intensidad de la línea de prueba no tiene una correlación con la cantidad de anticuerpo presente en el espécimen. Un resultado negativo para un individuo indica la ausencia de anti-HAV IgM detectable. Sin embargo, un resultado negativo no excluye la posibilidad de exposición o la infección con HAV. Un resultado negativo puede ocurrir si la cantidad anti-HAV IgM presente en el espécimen esta por debajo de los límites de detección del ensayo, o los anticuerpos que se detectan no estan presentes durante la etapa de la enfermedad en la que se colecto la muestra. Algunos especimenes conteniendo cantidad altas de anticuerpos heterófilos o factor reumatoide pueden afectar los resultados esperados. Los resultados obtenidos en esta prueba deben solo interpretarse en conjunto con otros procedimientos de diagnóstico y averiguaciones clínicas.

REFERENCIAS 1. 2.

Control Positivo Tanto la línea C como la línea T muestran color.

3. 4.

G

5.

AA

La aparición de cualquier línea en la banda T, independientemente de su intensidad, se debe considerar como la presencia de la línea. INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS DE ENSAYO

7.

Minor P. Picornaviridae. In: Francki RIB, Fauquet CM, Knudson DL, et al.

SA

M

1. RESULTADO NEGATIVO: Si solo la línea C se desarrolla, la prueba indica que no hubo la detección de IgM anti HAV en el espécimen. El resultado es negativo.

6.

Minor P. Picornaviridae. In: Francki RIB, Fauquet CM, Knudson DL, et al., eds. Classification and nomenclature of viruses (Arch Virol Supp 2). Wien: Springer-Verlag, 1991: 320-326. Keeffe EB. Clinical approach to viral hepatitis in homosexual men. Med Clin North Am. 1986;70(3):567-86. . Ballesteros J, Dal-Re R, Gonzalez A, del Romero J. Are homosexual males a risk group for hepatitis A infection in intermediate endemicity areas? Epidemiol Infect. 1996; 117(1):145-8. Bradley DW, Maynard JE, Hindman SH, et al: Serodiagnosis of viral hepatitis A: Detection of acute-phase immunoglobulin M anti-hepatitis A virus by radioimmunoassay. J Clin Microbiol 1977; 5: 521-530 Decker RH, Kosakowski SM, Vanderbilt AS, et al: Diagnosis of acute hepatitis A by HAVAB-M : A direct radioimmunoassay for IgM anti-HAV. Am J Clin Pathol 1981;76:140 Locarnini SA, Ferris AA, Lehman NI, et al: The antibody response following hepatitis A infection. Intervirology 1974; 4:110-118. Skinhoj P, Mikkelsen F, Hollinger FB. Hepatitis A in Greenland: Importance of specific antibody testing in epidemiologic surveillance. Am J. Epidemiol 1977; 105: 104-147

2. RESULTADO POSITIVO: Si tanto las líneas C y T se presentan, la prueba indica la presecia del IgM anti-HAV en el espécimen. El resultado es positivo. European Authorized Representative: The Netherlands. Tel.: +31 (0)6.516.536.26 CEpartner4U , Esdoornlaan 13, 3951DB Maarn.

Muestras con resultados positivos deberán confirmarse con método(s) alternativo(s) y averiguaciones clínicas antes de determinarse como positivas. 3. INVÁLIDO: Si no se presenta una línea C, el ensayo es invalido independientemente de la línea T, como se indica. Repita el ensayo con un nuevo dispositivo.

Index of CE Symbol

In Vitro Diagnostics

Manufacturer: CTK Biotech, Inc. 6748 Nancy Ridge Drive, San Diego, CA 92121, USA Tel: 858-457-8698, Fax: 858-535-1739, E-mail: [email protected] PI-R0030C Rev. C Effective date: June-01-2006 Spanish Version

CARACTERÍSTICAS DE DESEMPEÑO Desempeño Clínico Un total de 200 muestras de sujetos susceptibles fueron puestas a prueba utilizando la prueba rápida OnSite HAV IgM Rapid Test y una prueba comercial EIA. La comparación aparece en la siguiente tabla: OnSite HAV IgM Rapid Test

!

EIA

Positivo

Negativo

Positivo

21

1

Total 22

Negativo

0

178

178

Total

21

179

200

Sensitividad Relativa 95.5% , Especificidad Relativa: 100%, Concordancia General: 99.5%

Lea las instrucciones.