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• Isabel Cifuentes

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ELISA ENSAYO DE INMUNO ABSORCION LIGADO A ENZIMAS Técnica bioquímica, que surgió en los Años 70 como alternativa para reducir el uso de otras técnicas toxicas que utilizaban radioactividad. ÉXITO DE LA TECNICA Luego de MAS DE 40 años mantiene vigencia como procedimiento analítico de gran sensibilidad y especificidad, sencillo, bajo costo, reproducible, y adaptable a las características de cualquier laboratorio. DIRECTOS se usan para la detección de antígenos. INDIRECTOS se usan para la detección de anticuerpos. ESTA TECNICA NOS PERMITE cuantificar e identificar (determinar de una manera cuantitativa) determinadas moléculas: sustancias como proteínas hormonas en distintos tipos de soluciones (Sangre, orina, extractos de tejidos e incluso en cultivos celulares) Identificar o detectar un determinado elemento que produce una infección •Es la prueba más empleada comercialmente para el diagnóstico de diferentes enfermedades, dopin, tecnología de los alimentos para buscar patógenos o subproductos SIDA o ausencia o presencia de una determinada hormona. La solución en la que tenemos la molécula problema la vamos a inmovilizar en una superficie (un sustrato) que contiene poliestireno (placa). Y lo que vamos a hacer es detectarla con otras moléculas que son específicas de esta molécula problema. MOLÉCULA PROBLEMA=ANTÍGENO LA MOLÉCULA QUE LO DETECTA=ANTICUERPO Los anticuerpos van a identificar distintas estructuras dentro del anticuerpo. ANTICUERPOS MONOCLONALES= reconocen una sola estructura ANTICUERPOS POLICLONALES= son capaces de reconocer varias estructuras o epitopos dentro del mismo antígeno. ELISA DIRECTO La placa de poliestireno la cubrimos con la solución del antígeno y utilizamos el anticuerpo para detectarlo. El anticuerpo está unido a una enzima que es la que reacciona ante la presencia de un sustrato que se adiciona y genera así un color que es evaluado en un espectrofotómetro (por longitud de onda). Cuanto mas intensidad mas antigeno Y comparándolo con una (curva) estándar el color que emite una cantidad de antígeno conocido se pueden cuantificar los resultados Es rápido y sencillo

ELISA INDIRECTO La placa de poliestireno se cubre con una solución de antígeno y se adiciona un 1er anticuerpo que va a detectar el antígeno de una manera especifica y un 2do anticuerpo que es el que lleva la enzima. Se añade el sustrato y la enzima desarrollara un color Intensidad directamente proporcional a la cantidad de antígeno ELISA SANDWICH Se tapiza con un primer anticuerpo se aplica la muestra de la solución de la cual queremos detectar el antígeno, por lo que queda aderido al antierpo de captura, se agrega un segundo anticuerpo que se va a unir al antígeno. Y se pude agregar un tercer anticuerpo con la enzima.

COMPETITIVO Cuando la estructura es complicada y zonas difíciles de detectar o se tiene un poco cantidad de muestra. Se tapiza con una cantidad de antígeno conocida y se usa también la cantidad de solución con el antígeno problema. Por lo cual al añadir el anticuerpo este se va poder unir o al antígeno que esta adherido a la placa o al antígeno de la muestra. Como posteriormente vamos a lavar, todo el anticueerpo que se una al antígeno de la muestra será ELIMINADO DE LA PLACA . Cuanto mas color tenga, es decir cuando mas anticuerpo se halla unido al antígeno conocido, menor será la cantidad que se unio a la muestra. MENOS COLOR significa que había mas antígeno en la muestra

CROMATOGRAFIA de afinidad de proteína Electroforesis 2d Separación de los diferentes componentes del proteoma por punto isolectrico y masa 99||||||||||||||9||||||||||||||233333331oooooooooooooooooooooooooo