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NSTITUTO NSTITUTO POLITÉCNICO POLITÉCNICO NACIONAL NACIONAL ESCUELA ESCUELA NACIONAL NACIONAL DEDE CIENCIAS CIENCIAS BIOLÓGICAS BIOLÓGICAS QUÍMICO QUÍMICO BACTERIÓLOGO BACTERIÓLOGO PARASITÓLOGO PARASITÓLOGO

REPORTE DE LABORATORIO

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Fecha:23/Marzo/2018 Grupo: 4QM1 Integrantes: Equipo: 1 Sección: 1 Bolaños Nicolás Lilia Mérida Romano Adarely Nayfé EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DEL SUSTRATO SOBRE LA VELOCIDAD DE LA REACCIÓN E INHIBICIÓN ENZIMÁTICA Tabla No 1: Efecto de la concentración de OBJETIVOS sustrato sobre la actividad de la invertasa ● Analizar el efecto de la concentración (Continuación). del sustrato sobre la velocidad de Tubo No 3 4 5 6 reacción. ● Determinar la Km de forma gráfica 0.493 0.631 0.602 0.716 Absorbencia por los métodos de Michaelis-Menten 5.4 6.95 6.65 7.9 Azúcar reductor y Lineweaver-Burk. (µmoles)/2.0mL ● Determinar el tipo de inhibición producida por la anilina sobre la Velocidad 0.54 0.695 0.665 0.79 (unidades de actividad de la invertasa. invertasa) RESULTADOS Tabla No 1: Efecto de la concentración de sustrato sobre la actividad de la invertasa. Tubo No

Testigo

1

2

Absorbencia

0

0.306

0.435

Azúcar reductor

0

3.4

4.8

Velocidad (unidades de invertasa)

0

0.34

0.48

Concentración de sustrato (moles/L=M)

0

0.01

0.02

(µmoles)/2.0mL

Concentración de sustrato (moles/L=M) CÁLCULOS

0.03

0.05

0.08

0.1

Cálculo de la concentración de sustrato

Azúcar reductor

0

0.65

0.95

Velocidad (unidades de invertasa)

0

0.065

0.095

Concentración de sustrato (moles/L=M)

0

0.01

0.02

(µmoles)/2.0mL

Tabla No 2: (Continuación) Tubo No Absorbencia

Inhibición 3

4

enzimática 5

6

0.126 0.050 0.098 0.141 1.35

0.5

1

1.55

Velocidad (unidades de invertasa)

0.135

0.05

0.1

0.155

Concentración de sustrato (moles/L=M)

0.03

0.05

0.08

0.1

Azúcar reductor (µmoles)/2.0mL

CÁLCULOS

Tabla No 2: Inhibición enzimática Tubo No

Testigo

1

2

Absorbencia

0

0.063

0.088

Tabla No 3: Datos obtenidos de la concentración del sustrato para la gráfica de Lineweaver-Burk Sustrato

1/ V

1/S

2.94

100

2.08

50

1.80

33.3

1.43

20

1.50

12.5

1.26

10

Tabla No 4: Datos obtenidos del inhibidor para la gráfica de Lineweaver-Burk Inhibidor 1/ V

1/S

15.38

100

10.52

50

7.4

33.3

20

20

10

12.5

6.45

10

DISCUSIONES Para observar los fenómenos de la concentración de sustrato y el uso de inhibidores en la reacción enzimática de la sacarosa con la invertasa se trazaron curvas que nos brindan información esencial, como lo es la velocidad máxima que tiene la enzima para la formación de productos y la constante de Michaelis; generalmente se obtiene una dependencia hiperbólica de la velocidad respecto a la concentración de sustrato, distinguiéndose 3 partes distintas en la curva.

En la primera parte, a bajas concentraciones de sustrato, la velocidad es proporcional a la concentración de sustrato, de tal manera que si se duplica la concentración de sustrato, se duplica la velocidad (reacción de primer orden). La segunda parte de la curva, a concentraciones intermedias de sustrato, la velocidad se incrementa menos que en la primera parte con el incremento de la concentración, iniciando alrededor de la ½ de la Vmax. La última parte de la curva, a altas concentraciones de sustrato, la velocidad es independiente de la concentración de sustrato (reacción de orden cero), así la velocidad alcanzada es cercana a la máxima. Ocasionalmente en una reacción simple catalizada por enzimas la dependencia de la velocidad sobre la concentración de sustrato nota una curva hiperbólica la velocidad puede alcanzar un máximo y luego de que a medida que se incrementa la concentración de sustrato este fenómeno se llama inhibición por sustrato el cual observamos al incrementar la concentración de la sacarosa. La Km es llamada la constante de MichaelisMenten. El valor de Km de una enzima para un sustrato específico es la concentración del sustrato a la cual la velocidad de la reacción es la mitad de la velocidad máxima. La Vmax es la velocidad teórica máxima de la

reacción catalizada por la enzima. A concentraciones muy altas de sustrato el valor de la velocidad se aproxima al de la velocidad máxima de la reacción, pero nunca se llega a ésta. Los valores de Km y Vmax son característicos de una enzima, y se conocen como parámetros cinéticos de la enzima. Es por ello que a partir de nuestras gráficas los calculamos. En la práctica hicimos uso de un inhibidor (la anilina). Por medio de las gráficas de cinética enzimática observamos como se ve afectado el Km o bien la Vmax. Un inhibidor es una sustancia que cuando interacciona con una enzima provoca una disminución de la actividad catalítica; una inhibición enzimática puede ser reversible si se produce la formación de un complejo enzima inhibidor no covalente o puede ser irreversible si se forma un complejo covalente entre enzima e inhibidor. Para el caso de la inhibición enzimática reversible se tienen tres tipos: la competitiva, la no competitiva la acompetitiva. Como resultado obtuvimos que la anilina lleva a cabo una inhibición no competitiva, esto se comprobó al trazar la gráficas y obtener los valores de Km y Vmax, y observar que los valores de Vmax son iguales y los valores de Km difieren. CONCLUSIÓN Al aumentar la concentración de sustrato, la velocidad de la reacción aumenta hasta un punto máximo, incrementos posteriores en la concentración de sustrato no producen efecto sobre la velocidad de reacción, La anilina es un inhibidor de tipo no competitivo. BIBLIOGRAFÍA

● Fieser L.. (2004). Experimentos de química orgánica. España: REVERTÉ, S.A. 140-142 pp. ● Nelson D.L & Cox M. ( 2000) “ Principios de bioquímica” 3° Edición omega, 113-124 pp. ● Rosa P., Oliver I. & Rodríguez A. (2003) “Bioquímica: Técnicas y métodos”, Madrid: Hélice pp. 216231.